Name: antibody transfection into neurons as a tool to study disease pathogenesis
Uploaded: 2012-09-26T13:00:00
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이 작품은 연구 개발의 사무실, 의료 연구 서비스, 보훈학과에서 지원됩니다. 이 연구는 VA 공훈 검토 상 (MCL에)와 테네시 건강 과학 센터 다발성 경화증 연구 기금의 대학 재정 지원되었다.

1. 항체 라벨 (그림 1) <ol><li> 0.1 M NaHCO 3 버퍼를 만들기 : <ul type="circle"><li> 8.4 g NaHCO 3 </li><li> 29.2 g NaCl </li><li> 1리터 H 2 O </li></ul></li><li> 이 솔루션 (10.6 g 오세영 2 CO 3, 29.2 g NaCl, 1리터 H 2 0)과 8.4의 산도에 버퍼를 가져와. </li><li> 70 μl 방지 hnRNPA1 500 μl NaHCO 3 버퍼 35 μl Atto550 NHS를 추가하고 실온에서 1 시간에 회전 할 수 있습니다. 1 시간 긴 회?...

<ol>
	<li>Burkhardt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope-specific+recognition+of+type+II+collagen+by+rheumatoid+arthritis+antibodies+is+shared+with+recognition+by+antibodies+that+are+arthritogenic+in+collagen-induced+arthritis+in+the+mouse.">Epitope-specific recognition of type II collagen by rheumatoid arthritis antibodies is shared with recognition by antibodies that are arthritogenic in collagen-induced arthritis in the mouse.</a> Arthritis Rheum. 46, 2339-2348 (2002).</li><li>Chester, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lambert-Eaton+syndrome+antibodies:+reaction+with+membranes+from+a+small+cell+lung+cancer+xenograft.">Lambert-Eaton syndrome antibodies: reaction with membranes from a small cell lung cancer xenograft.</a> J. Neuroimmunol. 18, 97-104 (1988).</li><li>Lee, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HTLV-1+induced+molecular+mimicry+in+neurological+disease.">HTLV-1 induced molecular mimicry in neurological disease.</a> Curr. Top Microbiol. Immunol. 29, 125-136 (2005).</li><li>Reeves, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+lupus+erythematosus.+Antibodies+to+DNA,+DNA-binding+proteins,+and+histones.">Systemic lupus erythematosus. Antibodies to DNA, DNA-binding proteins, and histones.</a> Rheum. Dis. Clin. North Am. 20, 1-28 (1994).</li><li>Levin, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmunity+due+to+molecular+mimicry+as+a+cause+of+neurological+disease.">Autoimmunity due to molecular mimicry as a cause of neurological disease.</a> Nat. Med. 8, 509-513 (2002).</li><li>Lee, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+that+recognize+functional+domains+of+hnRNPA1+implicate+molecular+mimicry+in+the+pathogenesis+of+neurological+disease.">Autoantibodies that recognize functional domains of hnRNPA1 implicate molecular mimicry in the pathogenesis of neurological disease.</a> Neurosci. Lett. 401, 188-193 (2006).</li><li>Kalume, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mimicry:+cross-reactive+antibodies+from+patients+with+immune-mediated+neurologic+disease+inhibit+neuronal+firing.">Molecular mimicry: cross-reactive antibodies from patients with immune-mediated neurologic disease inhibit neuronal firing.</a> J. Neurosci. Res. 77, 82-89 (2004).</li><li>Levin, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reactivity+between+immunodominant+human+T+lymphotropic+virus+type+I+tax+and+neurons:+implications+for+molecular+mimicry.">Cross-reactivity between immunodominant human T lymphotropic virus type I tax and neurons: implications for molecular mimicry.</a> J. Infect. Dis. 186, 1514-1517 (2002).</li><li>Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+potential+link+between+autoimmunity+and+neurodegeneration+in+immune-mediated+neurological+disease.">A potential link between autoimmunity and neurodegeneration in immune-mediated neurological disease.</a> J. Neuroimmunol. 235, 56-69 (2011).</li><li>Smeenk, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antinuclear+antibodies:+cause+of+disease+or+caused+by+disease.">Antinuclear antibodies: cause of disease or caused by disease.</a> Rheumatology (Oxford). 39, 581-584 (2000).</li><li>Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-translational+glycosylation+of+target+proteins+implicate+molecular+mimicry+in+the+pathogenesis+of+HTLV-1+associated+neurological+disease.">Post-translational glycosylation of target proteins implicate molecular mimicry in the pathogenesis of HTLV-1 associated neurological disease.</a> J. Neuroimmunol. 204, 140-148 (2008).</li><li>Reisinger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+transfection+of+CHO+cells+with+chemically+defined+transfection+systems+and+investigation+of+their+potential+for+transient+and+stable+transfection.">Serum-free transfection of CHO cells with chemically defined transfection systems and investigation of their potential for transient and stable transfection.</a> Cytotechnology. 60, 115-123 (2009).</li><li>Weill, C. O., Biri, S., Erbacher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cationic+lipid-mediated+intracellular+delivery+of+antibodies+into+live+cells.">Cationic lipid-mediated intracellular delivery of antibodies into live cells.</a> Biotechniques. 44, Pvii-Pxi (2008).</li><li>Radic, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+nuclear+ribonucleoprotein+P2+is+an+autoantibody+target+in+mice+deficient+for+Mer,+Axl,+and+Tyro3+receptor+tyrosine+kinases.">Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein P2 is an autoantibody target in mice deficient for Mer, Axl, and Tyro3 receptor tyrosine kinases.</a> J. Immunol. 176, 68-74 (2006).</li><li>Vincent, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+'passive+transfer'+of+paraneoplastic+stiff+person+syndrome+with+antibodies+to+an+intracellular+antigen.">Successful 'passive transfer' of paraneoplastic stiff person syndrome with antibodies to an intracellular antigen.</a> Brain. 133, 3164-3165 (2010).</li><li>Vincent, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stiff,+twitchy+or+wobbly:+are+GAD+antibodies+pathogenic.">Stiff, twitchy or wobbly: are GAD antibodies pathogenic.</a> Brain. 131 (Pt 10), 2536-2537 (2008).</li><li>Magrys, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+anti-alpha-enolase+autoantibodies+in+pathogenicity+of+autoimmune-mediated+retinopathy.">The role of anti-alpha-enolase autoantibodies in pathogenicity of autoimmune-mediated retinopathy.</a> J. Clin. Immunol. 27, 181-192 (2007).</li><li>Geis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stiff+person+syndrome-associated+autoantibodies+to+amphiphysin+mediate+reduced+GABAergic+inhibition.">Stiff person syndrome-associated autoantibodies to amphiphysin mediate reduced GABAergic inhibition.</a> Brain. 133, 3166-3180 (2010).</li></ol>

특정 분자와 표현에 대한 가설을 테스트하기 위해, 유전자 및 기타 벡터는 일반적으로 세포로 transfected 수 있습니다. 이 절차의 독특한 측면은 쉽게 대상 세포에 항체를 transfect 할 수있는 능력입니다. 우리는 5 개의 실험을 중복의 각이 방법을 수행했습니다. Transfection 효율 결과는 모든 실험들과 비슷했다. 중요한 방법은 항체의 구조 나 기능을 변경하지 않고 셀에 항체의 항목을 수 있습니다. 또?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 형광 현미경 AxioObserver A1 </td><td> Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> Axiovision 버전 4.2 </td><td> Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> 안티 rhnRNPA1 </td><td> Abcam </td><td> Ab4791 </td></tr><tr><td> FITC 안티 rIgG 표시 </td><td> OZ Biosciences </td><td> AI20100 </td></tr><tr><td> Atto550 NHS 에스테르 </td><td> 시그마 </td><td> 92,835 </td></tr><tr><td> AB-DeliverIN </td><td> OZ Biosciences </td><td> AI20100 </td></tr><tr><td> DMEM/F12 10%는 FBS 1%의 항생제 </td><td> Gibco </td><td> 11320-033 </td></tr><tr><td> 폴리-D-라이신 8도 문화 슬라이드 </td><td> BD </td><td> 354632 </td></tr><tr><td> 다중 목적 회전하는 것 </td><td> 과학 Industri에스 주식회사 </td><td> 모델 151 </td></tr><tr><td> DAPI 장착 미디어 </td><td> Millipore </td><td> S7113 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Ambion </td><td> 9626 </td></tr><tr><td> Dialyzer </td><td> 온도 피셔 과학 </td><td> 66,380 </td></tr><tr><td> Amicon 울트라 - 0.5 </td><td> Millipore </td><td> UFC501096 </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde (4 % 용액) </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td></td></tr><tr><td> 나노 드롭 </td><td> 온도 피셔 과학 </td><td></td></tr></tbody></table>

antibody transfection into neurons as a tool to study disease pathogenesis

항체가 생활 시스템에서 일어나는 다양한 이벤트에 소설 통찰력을 얻을 수있는 기능을 제공합니다. 대상 단백질에 매우 구체적인 항체를 생산하는 능력은 해결 될 매우 정확한 생물학적 질문에 사용할 수 있습니다. 중요한 항체는 전신 홍반 루푸스 (SLE), 류마티스 관절염 (RA), paraneoplastic syndromes, 다발성 경화증 (MS)와 인간 T-lymphotropic 바이러스 타입 1 (HTLV-1)를 포함한 인간의 질병의 숫자의 pathogenesis에 연루되어 myelopathy / 열대 경련 paraparesis (햄 / TSP) 1-9 연결된 상태입니다. 항체는 질병이 진행중인 조사의 영역이며, 데이터 항체와 염증의 다양한 세포 내 분자 결과 사이의 상호 작용은 세포 메시징 및 apoptosis 10 변경하는 것이 좋습니다 원인이 방법. 그것은 MS와 햄 / TSP 환자는 세포 내 RNA 결합 단백질 이기종 ribonuclear 단백질에 autoantibodies을 생산하는 것으로 나타되었습니다1월 5일에서 7일까지 (hnRNP A1) 3, 9, 11. 최근 데이터 간 neuronal 및 표면 항원 모두 항체가 병원성 3, 5-9 11아르을 나타냅니다. 따라서, 세포 내 항체의 연구를 위해 할 수있는 절차 : 단백질 상호 작용은 질병 pathogenesis에 큰 통찰력을 부여합니다. 유전자는 일반적으로 기본 세포와 문화에 세포 라인에 transfected 있으며, 세포에 항체의 그러나 transfection이 항체 구조 또는 낮은 transfection 효율을 12 개조에 의해 방해했습니다. transfection의 다른 방법은 양이온 liposomes (DOTAP / 마약으로 구성)과 polyethylenimines (PEI)을 기반으로 항체 transfection을 포함, 컨트롤 12에 비해 항체 transfection의 열 배나 감소로 이어진 둘 다. 우리의 연구에서 수행 한 방법은 양이온 지질로 인한 방법과 유사하고를 통해 항체와 비 공유 결합 복합체를 형성하기 위해 지질 기반 메커니즘을 사용 정전기 및 hydrophobic 상호 작용 13. 우리는 비 공유 결합 정전기와 소수성 상호 작용을 통해 항체를 캡쳐하고 세포 내부를 제공 할 수있는 지질 제제입니다 AB-DeliverIN 시약을 이용. 따라서 화학 및 유전 커플 링은 생활 세포에 기능 항체의 전달에 필요하지 않습니다. 단백질 상호 작용 9 :이 방법은 우리가 다양한 항체는 단백질 현지화 실험뿐만 아니라, 세포 내 항체의 분자 결과의 분석을 추적하고 수행 할 수있게되었습니다. 이 프로토콜에서는, 우리는 빠르게, reproducibly과 transfection 효율의 높은 수준의 뉴런에 항체를 transfect하는 방법을 보여줍니다. 예를 들어, 우리는 반 hnRNP A1 및 안티 IgG 항체를 사용합니다. transfection 효율을 쉽게 정량화를 들어 우리는 아토-550-NHS와 FITC-라벨 IgG으로 표시 방지 hnRNP A1 항체를 사용했습니다. Atto550 NHS는 고분자 흡수 및 양자 순으로 새 레이블연령. 여기 소스와 Atto550에 대한 형광 필터는 Cy3 (예 556 엠. 578)과 비슷합니다. 또한, Atto550 높은 photostability 있습니다. FITC-라벨 IgG는이 방법에 의존 염색 다목적 및 아니라는 것을 보여주기 위해 제어로 사용되었습니다. 이 방법과 생성 된 데이터는 대상 항원을 세포하기 위해 항체 인간 질병의 pathogenesis에서 재생 할 수있는 역할의 이해에 도움이 될 것입니다.

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Antibody Transfection into Neurons as a Tool to Study Disease Pathogenesis

상호 작용과 세포 내 환경에서 항체의 존재에 관한 분자 메커니즘에 미치는 영향을 조사하기 위해 신속하게 접근 방식이 설명되어 있습니다. 방법은 지질 공식에 따라 비 공유 결합 복잡한 형성을 사용하여 라이브 세포에 항체의 transfection을 포함한다. 기술은 불후의 세포 라인과 기본 셀에 적용 할 수 있습니다.

질병 Pathogenesis를 공부하는 도구로 뉴런에 항체 Transfection

Antibodies provide the ability to gain novel insight into various events taking place in living systems.  The ability to produce highly specific ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

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의 레이저 캡처 Microdissection Drosophila 주변 뉴런

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the ...

연구

신경과학

Cut-loading: A Useful Tool for Examining the Extent of Gap Junction Tracer Coupling Between Retinal Neurons

잘라내기 -로드 : 망막 뉴런 사이 간격 접합 추적 커플링의 범위를 검토​​를위한 유용한 도구

In addition to chemical synaptic transmission, neurons that are connected by gap junctions can also communicate rapidly via electrical synaptic ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

차 해마 신경 세포의 칼슘 인산염 형질

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Real-Time Impedance-based Cell Analyzer as a Tool to Delineate Molecular Pathways Involved in Neurotoxicity and Neuroprotection in a Neuronal Cell Line

신경 세포주에 신경 독성과 신경에 관여하는 분자 진학의 윤곽을하는 도구로 실시간 임피던스 기반의 세포 분석기

Many brain-related disorders have neuronal cell death involved in their pathophysiology. Improved in vitro models to study neuroprotective or neurotoxic ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

모델로 후각 시스템은 축삭 성장 패턴 및 형태를 연구하는<em&gt; 생체</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Intramuscular Injections Along the Motor End Plates: A Minimally Invasive Approach to Shuttle Tracers Directly into Motor Neurons

모터 엔드 플레이트 함께 근육 주사 : 직접 모터 뉴런에 셔틀 트레이서에 대한 최소 침습 접근

Diseases affecting the integrity of spinal cord motor neurons are amongst the most debilitating neurological conditions. Over the last decades, the ...

Stripe Assay to Study the Attractive or Repulsive Activity of a Protein Substrate Using Dissociated Hippocampal Neurons

스트라이프 분석은 해리 해마 신경 세포를 사용하여 단백질 기판의 매력적인 또는 혐오감 활동을 연구하는

Growing axons develop a highly motile structure at their tip, termed the growth cone. The growth cone contacts extracellular environmental cues to ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 연구 Neuroprotection 및 종양 세포의 침입을 모델로

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

Exogenous Administration of Microsomes-associated Alpha-synuclein Aggregates to Primary Neurons As a Powerful Cell Model of Fibrils Formation

소 대형의 강력한 셀 모델로 기본 신경 하 Microsomes 관련 알파 synuclein 집계의 외 인 관리

For years, the inability of replicating formation of insoluble alpha-synuclein (&#945;S) inclusions in cell cultures has been a great limitation in the ...

Cell-based Assay to Study Antibody-mediated Tau Clearance by Microglia

Microglia에 의해 항 체 중재 타우 정리 공부 세포 기반 분석 결과

Alzheimer&#39;s disease (AD) is a progressive neurodegenerative condition in which aggregated tau and amyloid proteins accumulate in the brain causing ...