Name: an optimized procedure for fluorescence-activated cell sorting (facs) isolation of autonomic neural progenitors from visceral organs of fetal mice
Uploaded: 2012-08-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Optimized Procedure for Fluorescence-activated Cell Sorting FACS Isolation of Autonomic Neural Progenitors from Visceral Organs of Fetal Mice at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر كاثرين الفورد للحصول على اقتراحات حول خلية تفكك الأساليب ويلر كيفين، فلاهيرتي ديفيد ماتلوك وبريتاني للحصول على الدعم في تدفق الموارد الخلوي المشتركة في مركز جامعة فاندربيلت الطبي، وميليسا مسر ألف للحصول على المساعدة الفنية مع الرسوم التوضيحية. نشكر الدكاترة. موشر جاك موريسون وشون لتقديم المشورة بشأن تنفيذ العزلة من أسلاف الخلايا العصبية. ويدعم هذا التدفق الخلوي VMC مورد مشترك من قبل مركز فاندربيلت السرطان انجرام (P30 CA68485) ومرض في الجهاز الهضمي فاندربيلت مركز أبحاث (P30 DK058404). وأيد هذا العمل بتمويل من المعاهد الوطنية الأميركية للصحة منح DK064251، DK086594، وDK070219.

1. إعداد وسائل الاعلام (جميع الخطوات أجريت في غطاء محرك السيارة زراعة الأنسجة) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجمع بين ما يلي: 44 مل L-15 متوسطة، و 0.5 مل 100X البنسلين / الستربتومايسين عقار (P / S)، و 0.5 مل 100 ملغ / مل الأبقار مصل (BSA)، و 0.5 مل HEPES 1M، 5 زراعة الأنسجة...

<ol>
	<li>Gong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gene+expression+atlas+of+the+central+nervous+system+based+on+bacterial+artificial+chromosomes.">A gene expression atlas of the central nervous system based on bacterial artificial chromosomes.</a> Nature. 425, 917-925 (2003).</li><li>Morrison, S. J., White, P. M., Zock, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification,+isolation+by+flow+cytometry,+and+in+vivo+self-renewal+of+multipotent+mammalian+neural+crest+stem+cells.">Prospective identification, isolation by flow cytometry, and in vivo self-renewal of multipotent mammalian neural crest stem cells.</a> Cell. 96, 737-749 (1999).</li><li>Kruger, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+stem+cells+persist+in+the+adult+gut+but+undergo+changes+in+self-renewal,+neuronal+subtype+potential,+and+factor+responsiveness.">Neural crest stem cells persist in the adult gut but undergo changes in self-renewal, neuronal subtype potential, and factor responsiveness.</a> Neuron. 35, 657-669 (2002).</li><li>Bixby, S., Kruger, G. M., Mosher, J. T., Joseph, N. M., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-intrinsic+differences+between+stem+cells+from+different+regions+of+the+peripheral+nervous+system+regulate+the+generation+of+neural+diversity.">Cell-intrinsic differences between stem cells from different regions of the peripheral nervous system regulate the generation of neural diversity.</a> Neuron. 35, 643-656 (2002).</li><li>Walters, L. C., Cantrell, V. A., Weller, K. P., Mosher, J. T., Southard-Smith, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+background+impacts+developmental+potential+of+enteric+neural+crest-derived+progenitors+in+the+Sox10Dom+model+of+Hirschsprung+disease.">Genetic background impacts developmental potential of enteric neural crest-derived progenitors in the Sox10Dom model of Hirschsprung disease.</a> Human Molecular Genetics. , (2010).</li><li>Corpening, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+live+imaging+of+enteric+progenitors+based+on+Sox10-Histone2BVenus+transgene+expression.">Isolation and live imaging of enteric progenitors based on Sox10-Histone2BVenus transgene expression.</a> Genesis. 49, 599-618 (2011).</li><li>Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Isolation of fetal rat neural crest stem cells (NCSC) from gut and sciatic nerve. , (2012).</li><li>Skarnes, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conditional+knockout+resource+for+the+genome-wide+study+of+mouse+gene+function.">A conditional knockout resource for the genome-wide study of mouse gene function.</a> Nature. 474, 337-342 (2011).</li><li>Harding, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GUDMAP+database--an+online+resource+for+genitourinary+research.">The GUDMAP database--an online resource for genitourinary research.</a> Development. 138, 2845-2853 (2011).</li><li>Joseph, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+glia+are+multipotent+in+culture+but+primarily+form+glia+in+the+adult+rodent+gut.">Enteric glia are multipotent in culture but primarily form glia in the adult rodent gut.</a> J. Clin. Invest. 121, 3398-3411 (2011).</li><li>Newgreen, D. F., Murphy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+cell+outgrowth+cultures+and+the+analysis+of+cell+migration.">Neural crest cell outgrowth cultures and the analysis of cell migration.</a> Methods Mol. Biol. 137, 201-211 (2000).</li></ol>

خطوط مراسل الماوس التعبير للصحفيين فلوري أصبحت متاحة على نطاق واسع من خلال جهود متعددة في المجتمع الوراثة الفئران 1،8،9. ويمكن نتيجة لذلك تكون الطريقة تفكك يتضح هنا يطبق على نطاق واسع لعزل الخلايا العصبية فرعية منفصلة على أساس عصبي أو أنماط التعبير مستقبلات إما...

The authors middle initials were omitted from the publication of <a href="http://www.jove.com/video/4188">An Optimized Procedure for Fluorescence-activated Cell Sorting (FACS) Isolation of Autonomic Neural Progenitors from Visceral Organs of Fetal Mice</a>.

Erratum: An Optimized Procedure for Fluorescence-activated Cell Sorting (FACS) Isolation of Autonomic Neural Progenitors from Visceral Organs of Fetal Mice

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> بائع </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> Accumax </td><td> سيغما (MFR: تقنيات مبتكرة خلية) </td><td> A7089-100ML </td><td> تخزين المجمدة في aliquots 1 مل </td></tr><tr><td> أنا الدناز </td><td> سيغما </td><td> D-4527 </td><td> المخزنة المجمدة في -20 درجة مئوية 5 ملغ / مل في 1xHBSS، (المستخدم في تبريد، تطفئوا 1:5) </td></tr><tr><td> 10X PBS درجة الحموضة 7.4 </td><td> Gibco </td><td> 70011-044 </td><td> جعل ما يصل الى 1X مع زراعة الأنسجة المياه الصف مرشح ثم عقيم </td></tr><tr><td> 10X HBSS ث / س الكالسيوم أو المغنيسيوم </td><td> Gibco </td><td> 14185-052 </td><td> جعل ما يصل الى 1X مع زراعة الأنسجة المياه الصف مرشح ثم عقيم </td></tr><tr><td> ليبوفيتز لL-15 متوسطة </td><td> Gibco </td><td> 21083027 </td><td></td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتومايسين عقار 100X </td><td> Gibco </td><td>15140-133 </td><td> مخزن aliquoted في -20 درجة مئوية </td></tr><tr><td> جيش صرب البوسنة </td><td> سيغما </td><td> A3912-100G </td><td> تخزين aliquoted في -20 درجة مئوية، و 100 ملغم / لتر في المياه </td></tr><tr><td> Biowhittaker 1M HEPES في كلوريد الصوديوم 0.85٪ </td><td> Lonza </td><td> 17-737E </td><td></td></tr><tr><td> 38 نايلون NITEX ميكرومتر شبكة غشاء </td><td> Sefar أمريكا </td><td> 3-38/22 </td><td> مقطعة إلى مربعات ~ سم 3. الأشعة فوق البنفسجية لتعقيم علاج بين عشية وضحاها في نسيج الثقافة غطاء محرك السيارة. </td></tr><tr><td> 7-AAD </td><td> إينفيتروجن </td><td> A1310 </td><td> 1 ملغ / مل </td></tr><tr><td> TRIzol LS </td><td> إينفيتروجن </td><td> 10296-028 </td><td></td></tr><tr><td> 5 مل أنابيب البولي ستايرين </td><td> صقر </td><td> 352058 </td><td></td></tr><tr><td> 15 مل أنابيب مخروطية </td><td> كورنينج </td><td> 430790 </td><td></td></tr><tr><td> غرامة الملقط تشريح </td><td> آلات العلم غرامة </td><td> 11251-30 </td><td> دومون # 5 وorcep، Dumoxel، ومعيار رأس 0.1x0.06mm </td></tr><tr><td> تشريح ملعقة </td><td> آلات العلم غرامة </td><td> 10370-18 </td><td></td></tr></tbody></table>

an optimized procedure for fluorescence-activated cell sorting (facs) isolation of autonomic neural progenitors from visceral organs of fetal mice

خلال تطوير العرف العصبي (NC) المستمدة من الأسلاف العصبية تهاجر بعيدا عن الأنبوب العصبي اللاإرادي لتشكيل العقد في الجهاز التنفسي والهضمي مثل الأمعاء والمسالك البولية السفلية. على حد سواء خلال تطوير والأنسجة الناضجة غالبا ما تكون هذه الخلايا على نطاق واسع في جميع أنحاء متفرقة الأنسجة بحيث عزلة السكان منفصلة باستخدام أساليب مثل القبض على الليزر الدقيقة تشريح أمر صعب. يمكن أن تكون إلا تصور مباشرة من قبل التعبير عن صحفيين فلوري طردوا من المناطق التنظيمية من الخلايا العصبية جينات محددة مثل هيدروكسيلاز التيروسين (TH). نحن وصفا لطريقة الأمثل لعوائد عالية من TH قابلة للحياة + الأسلاف من الأنسجة العصبية الماوس الجنين الحشوية، بما في ذلك الأمعاء والجهاز البولي التناسلي السفلي (LUT)، استنادا إلى التفكك ومضان تنشيط الفرز الخلية (نظام مراقبة الأصول الميدانية). الجين بترميز ث الحد من معدل انزيم لإنتاج الكاتيكولامينات. الأسلاف العصبية المعوية يبدأ في التعبير عن TH الدرجى هجرتهم في الأمعاء الجنين 1 و TH موجود أيضا في مجموعة فرعية من الخلايا العصبية للبالغين العقد الحوض 2-4. لم يكن أول ظهور لهذه السلالة، وتوزيع هذه الخلايا العصبية في الجوانب الأخرى من الطرفيات، وعزلتهم وصفها. ويمكن التعبير عن الأسلاف العصبية TH يمكن تصور بسهولة من قبل التعبير عن EGFP في الفئران التي تحمل التصور التحوير تيراغرام (TH-EGFP) DJ76Gsat/Mmnc 1. التقط لنا التعبير عن هذا التحوير في الفئران الجنينية لتوثيق توزيع TH + الخلايا في LUT النامية على 15،5 الجماع آخر أيام (DPC)، تعيين صباح الكشف عن المكونات إلى 0.5 DPC، وأشار إلى أن مجموعة فرعية من أسلاف الخلايا العصبية في ائتلافه العقد الحوضية صريحة EGFP. لعزل TH LUT + أسلاف الخلايا العصبية، إلى أقصى حد نحن الأساليب التي استخدمت في البداية لتنقية الخلايا الجذعية العصبية قمة من الأمعاء الماوس الجنين 2-6. قبل جهودا لعزل NC المستمدة من السكان يعتمد عليهاالهضم مع مزيج من كولاجيناز والتربسين للحصول على تعليق خلية لالتدفق الخلوي. في أيدينا تنتج هذه الأساليب تعليق خلية من LUT مع بقاء منخفض نسبيا. نظرا للمعدلات المتدنية أصلا من أسلاف الخلايا العصبية في أنسجة الجنين LUT، شرعنا في تحسين أساليب تفارق تلك التي من شأنها أن تكون زيادة بقاء الخلايا في تنأى النهائي. نحن مصممون على أن تفكك لطيف في Accumax (تقنيات خلية المبتكرة، المؤتمر الوطني العراقي)، والترشيح اليدوي، وتدفق الفرز في ضغط منخفض سمحت لنا لتحقيق قدر أكبر من البقاء على قيد الحياة على الدوام (&gt; 70٪ من مجموع الخلايا) مع الغلة لاحق من الأسلاف العصبية كافية لتحليل اتجاه مجرى النهر. ويمكن لأسلوب وصفنا تطبيقها على نطاق واسع لعزل مجموعة متنوعة من السكان من الأنسجة العصبية إما الفئران الجنينية أو الكبار.

Watch this Scientific Journal Video about An Optimized Procedure for Fluorescence-activated Cell Sorting FACS Isolation of Autonomic Neural Progenitors from Visceral Organs of Fetal Mice at JoVE.com

An Optimized Procedure for Fluorescence-activated Cell Sorting FACS Isolation of Autonomic Neural Progenitors from Visceral Organs of Fetal Mice

يوصف إجراء الأمثل لتنقية العرف العصبي المستمدة من الأسلاف من الأنسجة العصبية الماوس الجنين. هذا الأسلوب يستفيد من التعبير من الأليلات مراسل فلوري لعزل السكان منفصلة عن طريق الفرز الخلية مضان تنشيط (FACS). ويمكن تطبيق هذه التقنية لعزل القطعان الخلايا العصبية في جميع أنحاء تطوير أو من أنسجة البالغين.

وهو الإجراء الأمثل لالإسفار تنشيط عزل الخلية (نظام مراقبة الأصول الميدانية) فرز الأسلاف العصبية الاستقلال الذاتي من الجهاز التنفسي والهضمي من الفئران الجنينية

During development neural crest (NC)-derived neuronal progenitors migrate away from the neural tube to form autonomic ganglia in visceral organs like the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

An Optimized Procedure for Fluorescence-activated Cell Sorting (FACS) Isolation of Autonomic Neural Progenitors from Visceral Organs of Fetal Mice

Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue

جيل من الخلايا الجذعية العصبية من الأنسجة الجنينية البشرية المهملة القشرية

Neural stem cells (NSCs) reside along the ventricular zone neuroepithelium during the development of the cortical plate. These early progenitors ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

A Quantitative Cell Migration Assay for Murine Enteric Neural Progenitors

مقايسة الهجرة الخلية الكمي لالفئران العصبية المعوية أسلاف

Neural crest cells (NCC) are a transient and multipotent cell population that originates from the dorsal neural tube and migrates extensively throughout ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Using Fluorescence Activated Cell Sorting to Examine Cell-Type-Specific Gene Expression in Rat Brain Tissue

باستخدام الإسفار خلية المنشط الفرز لفحص الخلية من نوع محدد التعبير الجيني في الأنسجة دماغ الفئران

The brain is comprised of four primary cell types including neurons, astrocytes, microglia and oligodendrocytes. Though they are not the most abundant ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

فرز خلية العصبية الجذعية وخلايا السلف من الفأر Subventricular المنطقة الكبار وحية على التصوير من حيوية دورة الخلية الخاصة

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) and Gene Expression Analysis of Fos-expressing Neurons from Fresh and Frozen Rat Brain Tissue

Fluorescence Activated Cell Sorting FACS and Gene Expression Analysis of Fos-expressing Neurons from Fresh and Frozen Rat Brain Tissue

مضان تنشيط الخلايا الفرز (FACS) وجين تحليل التعبير عن فوس، معربا عن الخلايا العصبية من الطازجة والمجمدة الأنسجة دماغ الفئران

The study of neuroplasticity and molecular alterations in learned behaviors is switching from the study of whole brain regions to the study of specific ...

Isolation and Cultivation of Neural Progenitors Followed by Chromatin-Immunoprecipitation of Histone 3 Lysine 79 Dimethylation Mark

عزل وزراعة المتكفل العصبية تليها الكروماتين-إيمونوبريسيبيتيشن من هستون 3 يسين 79 مارك ديميثيليشن

Brain development is a complex process, which is controlled in a temporo-spatial manner by gradients of morphogens and different transcriptional programs. ...

Primary Cell Culture of Purified GABAergic or Glutamatergic Neurons Established through Fluorescence-activated Cell Sorting

الخلايا الاساسيه الثقافة المنقية جابايرجيك أو الخلايا العصبية جلوتاميجيك أنشئت من خلال الفرز الخلية المنشطة الفلورية

The overall goal of this protocol is to generate purified neuronal cultures derived from either GABAergic or glutamatergic neurons. Purified neurons can ...

Dissection of Pelvic Autonomic Ganglia and Associated Nerves in Male and Female Rats

تشريح العقدة اللاإرادية الحوض والأعصاب المرتبطة بها في الفئران الذكور والإناث

The bilateral major pelvic ganglia (MPG; synonym, pelvic ganglia) are the primary source of postganglionic sympathetic and parasympathetic neurons ...