Name: isolation of cardiomyocyte nuclei from post-mortem tissue
Uploaded: 2012-07-10T13:00:00
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हम मार्सेलो टोरो प्रवाह cytometry के साथ सहायता के लिए स्वीकार करना है. इस अध्ययन स्वीडिश दिल और फेफड़े फाउंडेशन, यूरोपीय संघ आयोग के FP7 &quot;CardioCell&quot;, स्वीडिश अनुसंधान परिषद, वायु सेना अकादमी बीमा और ALF द्वारा समर्थित किया गया था. ओ ड्यूश Forschungsgemeinschaft द्वारा समर्थित किया गया था.

1. कार्डिएक नाभिक का अलगाव <ol><li> कोट 1% कोटिंग / BSA पीबीएस समाधान के 10 मिलीलीटर के साथ ultracentrifuge ट्यूब (के Beckman अपकेंद्रित्र ट्यूबें 363,664). ट्यूबों कैप और उन्हें एक ट्यूब अंग को घुमानेवाली पेशी में 30 मिनट के लिए बारी ब?...

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	<li>Ang, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+of+conventional+approaches+to+identify+myocyte+nuclei+in+histologic+sections+of+the+heart.">Limitations of conventional approaches to identify myocyte nuclei in histologic sections of the heart.</a> American journal of physiology. Cell physiology. , 298-1603 (2010).</li><li>Bergmann, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+cardiomyocyte+nuclei+and+assessment+of+ploidy+for+the+analysis+of+cell+turnover.">Identification of cardiomyocyte nuclei and assessment of ploidy for the analysis of cell turnover.</a> Experimental cell research. 327, 188-194 (2011).</li><li>Bergmann, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+Cardiomyocyte+Renewal+in+Humans.">Evidence for Cardiomyocyte Renewal in Humans.</a> Science. 324, 98-102 (1126).</li><li>Walsh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+cell+cycle+control+and+growth+estimation.">Cardiomyocyte cell cycle control and growth estimation.</a> Cardiovascular Research. , 1-31 (2010).</li><li>Spalding, K., Bhardwaj, R. D., Buchholz, B., Druid, H., Frisén, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+birth+dating+of+cells+in+humans.">Retrospective birth dating of cells in humans.</a> Cell. 122, 133-143 (2005).</li><li>Adler, C. P., Friedburg, H., Herget, G. W., Neuburger, M., Schwalb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variability+of+cardiomyocyte+DNA+content,+ploidy+level+and+nuclear+number+in+mammalian+hearts.">Variability of cardiomyocyte DNA content, ploidy level and nuclear number in mammalian hearts.</a> Virchows Arch. 429, 159-164 (1996).</li><li>Herget, G. W., Neuburger, M., Plagwitz, R., Adler, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+content,+ploidy+level+and+number+of+nuclei+in+the+human+heart+after+myocardial+infarction.">DNA content, ploidy level and number of nuclei in the human heart after myocardial infarction.</a> Cardiovascular Research. 36, 45-51 (1997).</li><li>Adler, C. P., Friedburg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+DNA+content.+ploidy+level+and+cell+number+in+geriatric+hearts:+postmortem+examinations+of+human+myocardium+in+old+age.">Myocardial DNA content. ploidy level and cell number in geriatric hearts: postmortem examinations of human myocardium in old age.</a> Mol. Cell Cardiol. 18, 3953-39 (1986).</li><li>Dubois, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIRPA+is+a+specific+cell-surface+marker+for+isolating+cardiomyocytes+derived+from+human+pluripotent+stem+cells.">SIRPA is a specific cell-surface marker for isolating cardiomyocytes derived from human pluripotent stem cells.</a> Nature. 29, 1011-1018 (2011).</li><li>Hattori, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nongenetic+method+for+purifying+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Nongenetic method for purifying stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Nature Methods. 7, 61-66 (2010).</li><li>Fransioli, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+c-kit-Positive+Cell+Response+to+Pathological+Challenge+in+the+Myocardium.">Evolution of the c-kit-Positive Cell Response to Pathological Challenge in the Myocardium.</a> Stem Cells. 26, 1315-1324 (2008).</li><li>Elliott, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NKX2-5(eGFP/w)+hESCs+for+isolation+of+human+cardiac+progenitors+and+cardiomyocytes.">NKX2-5(eGFP/w) hESCs for isolation of human cardiac progenitors and cardiomyocytes.</a> Nature Methods. 8, 1037-1040 (2011).</li><li>Laflamme, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+Cardiomyocyte+Repopulation+by+Extracardiac+Progenitors+in+Transplanted+Human+Hearts.">Evidence for Cardiomyocyte Repopulation by Extracardiac Progenitors in Transplanted Human Hearts.</a> Circulation Research. 90, 634-640 (2002).</li><li>Srsen, V., Fant, X., Heald, R., Rabouille, C., Merdes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrosome+proteins+form+an+insoluble+perinuclear+matrix+during+muscle+cell+differentiation.">Centrosome proteins form an insoluble perinuclear matrix during muscle cell differentiation.</a> BMC cell biology. 10, 28 (2009).</li><li>Spoelgen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+flow+cytometry-based+technique+to+measure+adult+neurogenesis+in+the+brain.">A novel flow cytometry-based technique to measure adult neurogenesis in the brain.</a> Journal of neurochemistry. 119, 165-175 (2011).</li><li>Soonpaa, M. H., Kim, K. K., Pajak, L., Franklin, M., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+DNA+synthesis+and+binucleation+during+murine+development.">Cardiomyocyte DNA synthesis and binucleation during murine development.</a> The American journal of physiology. 271, H2183-H2189 (1996).</li><li>Olivetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging,+cardiac+hypertrophy+and+ischemic+cardiomyopathy+do+not+affect+the+proportion+of+mononucleated+and+multinucleated+myocytes+in+the+human+heart.">Aging, cardiac hypertrophy and ischemic cardiomyopathy do not affect the proportion of mononucleated and multinucleated myocytes in the human heart.</a> J Mol Cell Cardiol. 28, 1463-1477 (1996).</li><li>Okada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+sorting+of+neuronal+and+glial+nuclei+from+central+nervous+system+tissue.">Flow cytometric sorting of neuronal and glial nuclei from central nervous system tissue.</a> Journal of cellular physiology. 226, 552-558 (2011).</li><li>Matevossian, A., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+Nuclei+Isolation+from+Human+Postmortem+Brain+Tissue.">Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue.</a> J. Vis. Exp. (20), e914 (2008).</li></ol>

Cardiomyocyte नाभिक के सटीक पहचान 2,3 मायोकार्डियम में पुनर्योजी प्रक्रियाओं के विश्लेषण के लिए महत्वपूर्ण है. परम्परागत तकनीकों ताजा ऊतक से cardiomyocytes को अलग करने के लिए मुख्य रूप से बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन के...

<table border="1"><tbody><tr><td> 1. Lysis बफर </td></tr><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td></tr><tr><td> 0.32 एम सूक्रोज </td></tr><tr><td> 10 मिमी Tris - एचसीएल (8 = पीएच) </td></tr><tr><td> 5 मिमी 2 CaCl </td></tr><tr><td> 5 मिमी मैग्नीशियम एसीटेट </td></tr><tr><td> 2.0 मिमी EDTA </td></tr><tr><td> 0.5 मिमी EGTA </td></tr><tr><td> 1 मिमी डीटीटी </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> 2. Sucrose बफर </td></tr><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td></tr><tr><td> 2.1 एम सूक्रोज </td></tr><tr><td> 10 मिमी Tris - एचसीएल (8 = पीएच) </td></tr><tr><td> 5 मिमी मैग्नीशियम एसीटेट </td></tr><tr><td> 1 मिमी डीटीटी </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> 3. नाभिक का भंडारण बफर (NSB अधिक) </td></tr><tआर&gt; <td> अभिकर्मक का नाम </td></tr><tr><td> 0.44 एम सूक्रोज </td></tr><tr><td> 10 मिमी Tris - एचसीएल (पीएच 7.2 =) </td></tr><tr><td> 70 मिमी KCl </td></tr><tr><td> 10 मिमी 2 MgCl </td></tr><tr><td> 1.5 मिमी spermine </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मकों और उपकरण </td><td> कंपनी </td></tr><tr><td> निर्धारण खरगोश आईजीजी चिप ग्रेड, ab37415 को # </td><td> Abcam </td></tr><tr><td> खरगोश विरोधी - पीसीएम 1 प्रतिपिण्ड, HPA023374 # </td><td> एटलस एंटीबॉडी </td></tr><tr><td> गधा सेकंड. एंटीबॉडी, विरोधी - खरगोश एलेक्सा 488 Fluor, # एक 21,206 या समकक्ष सेकंड. फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी </td><td> जीवन टेक्नोलॉजीज </td></tr><tr><td> DRAQ5 </td><td> Biostatus </td></tr><tr><td> सेल strainers 30 माइक्रोन, 70 माइक्रोन और 100 माइक्रोन </td><td> बी.डी. बायोसाइंसेज </td></tr><tr><td> ग्लास (40 मिलीलीटर) douncer और&quot;एल&quot; मूसली </td><td> VWR (इंडस्ट्रीज इंक व्हीटॉन) </td></tr><tr><td> T-25 अल्ट्रा Turrax Homogenizer </td><td> IKA जर्मनी </td></tr><tr><td> उपकरण S25 N-18 जी Dispersing </td><td> IKA जर्मनी </td></tr><tr><td> अवंती अपकेंद्रित्र Beckman </td><td> Beckman कल्टर </td></tr><tr><td> फाल्कन ट्यूबों 15 मिलीग्राम और 50 मिलीग्राम </td><td> VWR </td></tr><tr><td> के Beckman अपकेंद्रित्र 363,664 # ट्यूबें </td><td> Beckman कल्टर </td></tr><tr><td> JS13.1 मुक्त झूल रोटर </td><td> Beckman कल्टर </td></tr><tr><td> बाढ़ कोशिकामापी </td><td> Beckman कल्टर </td></tr><tr><td> ट्यूब अंग को घुमानेवाली पेशी </td><td> VWR </td></tr></tbody></table>

isolation of cardiomyocyte nuclei from post-mortem tissue

Cardiomyocyte नाभिक की पहचान ऊतक वर्गों में चुनौती रहा है के रूप में सबसे रणनीतियों cytoplasmic प्रोटीन मार्कर एक पर ही निर्भर हैं. प्रसार और apoptosis जैसे हृदय myocytes में दुर्लभ घटनाओं हृदय myocyte नाभिक का एक सटीक पहचान homeostasis में और रोग 2 परिस्थितियों में सेलुलर नवीकरण का विश्लेषण करने की आवश्यकता है. यहाँ, हम पोस्टमार्टम ऊतक से घनत्व और pericentriolar 1 सामग्री (PCM-1) और बाद में प्रवाह cytometry छँटाई के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ अवसादन immunolabeling द्वारा cardiomyocyte नाभिक अलग तरीका प्रदान करते हैं. इस रणनीति के एक उच्च throughput विश्लेषण और ताजा ऊतक और जमे हुए अभिलेखीय सामग्री पर समान रूप से अच्छी तरह से काम करने के लाभ के साथ अलगाव की अनुमति देता है. यह पहले से ही biobanks में एकत्र सामग्री का अध्ययन करने के लिए यह संभव बनाता है. इस तकनीक को लागू प्रजातियों में से एक विस्तृत रेंज में परीक्षण और कार्बन 14-3 डेटिंग, सेल cy जैसे कई बहाव के अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त हैcle 4 विश्लेषण, thymidine analogues के दृश्य (जैसे BrdU और IDU) 4, transcriptome और epigenetic विश्लेषण.

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Isolation of Cardiomyocyte Nuclei from Post-mortem Tissue

कार्डिएक नाभिक घनत्व अवसादन के माध्यम से अलग कर रहे हैं और pericentriolar 1 सामग्री (PCM-1) की पहचान करने और प्रवाह cytometry से cardiomyocyte नाभिक तरह के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ immunolabeled.

Cardiomyocyte नाभिक का पोस्टमार्टम ऊतक से अलगाव

Identification of cardiomyocyte nuclei has been challenging in tissue sections as most strategies rely only on cytoplasmic marker proteins1. Rare events ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

मानव islets के मरीजों को आंशिक रूप से Pancreatectomized से अलगाव

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

मानव प्रोस्टेट कैंसर के नमूनों से कैंसर स्टेम कोशिकाओं के अलगाव

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation and Profiling of MicroRNA-containing Exosomes from Human Bile

अलगाव और की रूपरेखा MicroRNA युक्त मानव पित्त से Exosomes

Exosome research in the last three years has greatly extended the scope towards identification and characterization of biomarkers and their therapeutic ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

शब्द अपरा की भ्रूण झिल्ली से प्राथमिक मानव Decidual कोशिकाओं का अलगाव

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

वयस्क चूहे से एट्रियल मायोसाइट्स का अलगाव

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

Electromechanical Assessment of Optogenetically Modulated Cardiomyocyte Activity

ऑप्टोजेनेटिकल मॉडुलेटेड कार्डियोमायोसाइट गतिविधि का विद्युत मूल्यांकन

Over the past two decades, optogenetic tools have been established as potent means to modulate cell-type specific activity in excitable tissues, including ...

Model of Ischemic Heart Disease and Video-Based Comparison of Cardiomyocyte Contraction Using hiPSC-Derived Cardiomyocytes

इस्कीमिक हृदय रोग का मॉडल और हिग्प्स-व्युत्पन्न कार्डियोमायोसाइट्स का उपयोग करके कार्डियोमायोसाइट संकुचन की वीडियो-आधारित तुलना

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with ...

Isolation of Viable Adipocytes and Stromal Vascular Fraction from Human Visceral Adipose Tissue Suitable for RNA Analysis and Macrophage Phenotyping

आरएनए विश्लेषण और मैक्रोफेज फेनोटाइपिंग के लिए उपयुक्त मानव आंत वसा ऊतक से व्यवहार्य एडिपोसाइट्स और स्ट्रोमल संवहनी अंश का अलगाव

Visceral adipose tissue (VAT) is an active metabolic organ composed mainly of mature adipocytes and stromal vascular fraction (SVF) cells, which release ...

Ultrasound-Guided Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocyte Implantation in Myocardial Infarcted Mice

मायोकार्डियल इन्फ्रैक्टेड चूहों में अल्ट्रासाउंड-निर्देशित प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल-व्युत्पन्न कार्डियोमायोसाइट्स प्रत्यारोपण

The key objective of cell therapy after myocardial infarction (MI) is to effectively enhance the cell grafted rate, and human induced pluripotent stem ...

Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart

पोस्ट-मायोकार्डियल रोधगलन वयस्क माउस हार्ट से सिंगल-सेल आरएनए अनुक्रमण के लिए एक गैर-कार्डियोमायोसाइट सेल निलंबन की तैयारी

Myocardial infarction (MI) is one of the most common cardiovascular diseases, with increasing mortality worldwide. Non-cardiomyocytes account for more ...