Name: isolation of cardiomyocyte nuclei from post-mortem tissue
Uploaded: 2012-07-10T13:00:00
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我々は、フローサイトメトリーの支援についてはマルセロ·トロに感謝したい。本研究では、スウェーデンのハートと肺財団、欧州委員会FP7 &quot;CardioCell&quot;、スウェーデンの研究評議会、AFA保険やALFによってサポートされていました。 OBは、ドイツ学術振興によってサポートされていました。

1。心臓核の単離<ol><li> 1％BSA / PBSコーティング溶液10mlとコート遠心管（Beckmanの遠心チューブ＃363664）。チューブにフタをし、それらがチューブローテーターで30分間回転させましょう。コー​​ティング溶液を除去し、遠心チューブの空気乾燥した（マウスの心臓ごとに管が異なる種からの単一のマウスの心臓、交互に最大5つのマウスの心臓や心臓の組織の1グラムの分析のために必要と?...

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	<li>Ang, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+of+conventional+approaches+to+identify+myocyte+nuclei+in+histologic+sections+of+the+heart.">Limitations of conventional approaches to identify myocyte nuclei in histologic sections of the heart.</a> American journal of physiology. Cell physiology. , 298-1603 (2010).</li><li>Bergmann, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+cardiomyocyte+nuclei+and+assessment+of+ploidy+for+the+analysis+of+cell+turnover.">Identification of cardiomyocyte nuclei and assessment of ploidy for the analysis of cell turnover.</a> Experimental cell research. 327, 188-194 (2011).</li><li>Bergmann, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+Cardiomyocyte+Renewal+in+Humans.">Evidence for Cardiomyocyte Renewal in Humans.</a> Science. 324, 98-102 (1126).</li><li>Walsh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+cell+cycle+control+and+growth+estimation.">Cardiomyocyte cell cycle control and growth estimation.</a> Cardiovascular Research. , 1-31 (2010).</li><li>Spalding, K., Bhardwaj, R. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIRPA+is+a+specific+cell-surface+marker+for+isolating+cardiomyocytes+derived+from+human+pluripotent+stem+cells.">SIRPA is a specific cell-surface marker for isolating cardiomyocytes derived from human pluripotent stem cells.</a> Nature. 29, 1011-1018 (2011).</li><li>Hattori, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nongenetic+method+for+purifying+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Nongenetic method for purifying stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Nature Methods. 7, 61-66 (2010).</li><li>Fransioli, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+c-kit-Positive+Cell+Response+to+Pathological+Challenge+in+the+Myocardium.">Evolution of the c-kit-Positive Cell Response to Pathological Challenge in the Myocardium.</a> Stem Cells. 26, 1315-1324 (2008).</li><li>Elliott, D. 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H., Kim, K. K., Pajak, L., Franklin, M., Field, L. 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Vis. Exp. (20), e914 (2008).</li></ol>

心筋細胞核の正確な識別は、心筋2,3の再生過程の分析のために重要である。新鮮な組織から心筋細胞を分離する従来の手法は、主に細胞外マトリックスタンパク質の酵素消化と低速遠心分離により間質細胞からの後続の精製に基づいています。胚性幹細胞（ESC）から生きている心筋細胞のさらなる精製は、そのようなSIRPA 9またはミトコンドリアの染料10などの表面マ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 1。溶解バッファー </td></tr><tr><td> 試薬の名前 </td></tr><tr><td> 0.32Mスクロース</td></tr><tr><td> 10mMトリス-HCl液（pH = 8） </td></tr><tr><td> 5mMのCaCl 2を </td></tr><tr><td> 5mMの酢酸マグネシウム</td></tr><tr><td> 2.0mMのEDTA </td></tr><tr><td> 0.5mMのEGTA </td></tr><tr><td> 1mMのDTT </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> 2。ショ糖バッファ </td></tr><tr><td> 試薬の名前 </td></tr><tr><td> 2.1 Mのショ糖</td></tr><tr><td> 10mMトリス-HCl液（pH = 8） </td></tr><tr><td> 5mMの酢酸マグネシウム</td></tr><tr><td> 1mMのDTT </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> 3。核貯蔵緩衝液（NSBプラス） </td></tr><tR&gt; <td> 試薬の名前 </td></tr><tr><td> 0.44 Mショ糖</td></tr><tr><td> 10mMトリス-HCl液（pH = 7.2） </td></tr><tr><td> 70mMのKClを</td></tr><tr><td> 10mMのMgCl 2 </td></tr><tr><td> 1.5 mMのスペルミン</td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> 試薬および器具 </td><td> 会社 </td></tr><tr><td>アイソタイプウサギIgG-ChIP用グレード、＃ab37415 </td><td>アブカム</td></tr><tr><td>ウサギ抗-PCM-1抗体、＃HPA023374 </td><td>アトラス抗体</td></tr><tr><td>ロバ秒。抗体、抗ウサギアレクサ488弗素、＃-21206または同等秒。蛍光抗体</td><td>ライフテクノロジーズ</td></tr><tr><td> DRAQ5 </td><td> Biostatus </td></tr><tr><td>セルストレーナーは30μm、70μmと100μm </td><td> BDバイオサイエンス</td></tr><tr><td>ガラスdouncer（40ml）および&quot;L&quot;を乳棒</td><td> VWR（ウィートン工業株式会社） </td></tr><tr><td> T-25ウルトラタラックスホモジナイザー</td><td> IKAドイツ</td></tr><tr><td>分散ツールS25 N-18 G </td><td> IKAドイツ</td></tr><tr><td>ベックマン·アヴァンティ遠心</td><td>ベックマン·コールター</td></tr><tr><td>ファルコンチューブ15ミリリットルと50ミリリットル</td><td> VWR </td></tr><tr><td>ベックマン遠心チューブ＃363664 </td><td>ベックマン·コールター</td></tr><tr><td> JS13.1フリースイングローター</td><td>ベックマン·コールター</td></tr><tr><td>流入メーター</td><td>ベックマン·コールター</td></tr><tr><td>チューブローテーター</td><td> VWR </td></tr></tbody></table>

isolation of cardiomyocyte nuclei from post-mortem tissue

ほとんどの戦略は、唯一の細胞マーカータンパク質1に依存しているとして、心筋細胞の核の同定は、組織切片に挑戦されています。そのような増殖およびアポトーシスとして心筋細胞では稀なイベントは、心筋細胞核の正確な同定は、恒常性と病理学的状態2の細胞の更新を分析する必要があります。ここでは、中心体周辺物質1（PCM-1）およびそれ以降のフローサイトメトリー選別に対する抗体を用いた密度の堆積作用と免疫標識によって死後組織から心筋細胞核を単離する方法を提供します。この戦略は、新鮮な組織と凍結アーカイブ材料にも同様の作業の利点を有するハイスループット解析と分離することができます。これにより、既にバイオバンクで収集された材料を研究することができます。この手法は適用可能で、種の広い範囲でテストし、そのような炭素14年代測定3、セル-CYなどの複数のダウンストリームアプリケーションに適していますCLE分析4、チミジン類似体の可視化（例えば、BrdUとIDU）4、トランスクリプトームとエピジェネティクス解析。

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Isolation of Cardiomyocyte Nuclei from Post-mortem Tissue

心臓核密度沈降を介して分離し、フローサイトメトリーにより心筋細胞核を識別し、ソートするための中心体周辺物質1（PCM-1）に対する抗体で免疫標識されています。

事後組織から心筋細胞核の分離

Identification of cardiomyocyte nuclei has been challenging in tissue sections as most strategies rely only on cytoplasmic marker proteins1. Rare events ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

部分的に膵臓を摘出された患者からのヒト膵島の単離

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

医学

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

ヒト前立腺癌サンプルからがん幹細胞の単離

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation and Profiling of MicroRNA-containing Exosomes from Human Bile

ヒト胆汁からマイクロRNA含有エキソソームの単離とプロファイリング

Exosome research in the last three years has greatly extended the scope towards identification and characterization of biomarkers and their therapeutic ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

用語胎盤の胎児膜から主のひと脱落膜細胞の分離

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

成体マウスからの心房筋細胞の単離

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

Electromechanical Assessment of Optogenetically Modulated Cardiomyocyte Activity

光遺伝学的変調型心筋細胞活性の電気機械評価

Over the past two decades, optogenetic tools have been established as potent means to modulate cell-type specific activity in excitable tissues, including ...

Model of Ischemic Heart Disease and Video-Based Comparison of Cardiomyocyte Contraction Using hiPSC-Derived Cardiomyocytes

hiPSC由来心筋細胞を用いた虚血性心疾患のモデルと心筋細胞収縮の映像的比較

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with ...

Isolation of Viable Adipocytes and Stromal Vascular Fraction from Human Visceral Adipose Tissue Suitable for RNA Analysis and Macrophage Phenotyping

RNA解析およびマクロファージ表現型解析に適したヒト内臓脂肪組織からの生存脂肪細胞および間質血管画分の単離

Visceral adipose tissue (VAT) is an active metabolic organ composed mainly of mature adipocytes and stromal vascular fraction (SVF) cells, which release ...

Ultrasound-Guided Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocyte Implantation in Myocardial Infarcted Mice

心筋梗塞マウスにおける超音波ガイド下多能性幹細胞由来心筋細胞移植術

The key objective of cell therapy after myocardial infarction (MI) is to effectively enhance the cell grafted rate, and human induced pluripotent stem ...

Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart

心筋梗塞後の成体マウス心臓からのシングルセルRNAシーケンシングのための非心筋細胞懸濁液の調製

Myocardial infarction (MI) is one of the most common cardiovascular diseases, with increasing mortality worldwide. Non-cardiomyocytes account for more ...