Name: imaging calcium responses in gfp-tagged neurons of hypothalamic mouse brain slices
Uploaded: 2012-08-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices at JoVE.com

نشكر زملائنا الذين شاركوا في أعمال تلخيص هنا. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من جمعية الألمانية للبحوث (SFB 894)، &quot;تحليل التكاملية من الشم &#39;وSchwerpunktprogramm DFG 1392 وفولكس واجن من قبل مؤسسة (TLZ). TLZ أستاذ يشتنبرغ لمؤسسة فولكس واجن.

1. إعداد الحل وجل الاغاروز <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد حل خارج الخلية وفقا للجدول مع الماء المقطر مزدوجة. وسوف تكون درجة الحموضة 7.3 ~ بعد 10 دقيقة مع تحريك كربوجين (95٪ O 2/5٪ CO 2)، والأسمولية 300 الميلي أسمول 8. إذا كنت بحاجة لأعلى ?...

<ol>
	<li>Almholt, K., Arkhammar, P. O., Thastrup, O., Tullin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+visualization+of+the+translocation+of+protein+kinase+Calpha-green+fluorescent+protein+hybrids+and+intracellular+calcium+concentrations.">Simultaneous visualization of the translocation of protein kinase Calpha-green fluorescent protein hybrids and intracellular calcium concentrations.</a> Biochem. J. 337 (Pt 2), 211-218 (1999).</li><li>Bolsover, S., Ibrahim, O., O'Luanaigh, N., Williams, H., Cockcroft, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+fluorescent+Ca2++dyes+with+green+fluorescent+protein+and+its+variants:+problems+and+solutions.">Use of fluorescent Ca2+ dyes with green fluorescent protein and its variants: problems and solutions.</a> Biochem. J. 356, 345-352 (2001).</li><li>Leinders-Zufall, T., Ishii, T., Mombaerts, P., Zufall, F., Boehm, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+requirements+for+the+activation+of+vomeronasal+sensory+neurons+by+MHC+peptides.">Structural requirements for the activation of vomeronasal sensory neurons by MHC peptides.</a> Nat. Neurosci. 12, 1551-1558 (2009).</li><li>Wen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+identification+of+GnRH+receptor+neurons:+a+new+model+for+studying+neural+circuits+underlying+reproductive+physiology+in+the+mouse+brain.">Genetic identification of GnRH receptor neurons: a new model for studying neural circuits underlying reproductive physiology in the mouse brain.</a> Endocrinology. 152, 1515-1526 (2011).</li><li>Hara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+pancreatic+beta-cells+in+the+intact+pancreas.">Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 290, E1041-E1047 (2006).</li><li>Doherty, A. J., Coutinho, V., Collingridge, G. L., Henley, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+internalization+and+surface+expression+of+a+functional,+fluorescently+tagged+G-protein-coupled+glutamate+receptor.">Rapid internalization and surface expression of a functional, fluorescently tagged G-protein-coupled glutamate receptor.</a> Biochem. J. 341 (Pt 2), 415-422 (1999).</li><li>Kurebayashi, N., Harkins, A. B., Baylor, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+fura+red+as+an+intracellular+calcium+indicator+in+frog+skeletal+muscle+fibers.">Use of fura red as an intracellular calcium indicator in frog skeletal muscle fibers.</a> Biophys. J. 64, 1934-1960 (1993).</li><li>Heyward, P. M., Chen, C., Clarke, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropin-releasing+hormone+modifies+action+potential+generation+in+sheep+pars+distalis+gonadotropes.">Gonadotropin-releasing hormone modifies action potential generation in sheep pars distalis gonadotropes.</a> Neuroendocrinology. 58, 646-654 (1993).</li><li>Kneen, M., Farinas, J., Li, Y., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+protein+as+a+noninvasive+intracellular+pH+indicator.">Green fluorescent protein as a noninvasive intracellular pH indicator.</a> Biophys. J. 74, 1591-1599 (1998).</li><li>Wen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+genetically+labeled+gonadotropes.">Functional characterization of genetically labeled gonadotropes.</a> Endocrinology. 149, 2701-2711 (2008).</li><li>Paxinos, G., Franklin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mouse brain in stereotaxic coordinates. , (2001).</li><li>Tirindelli, R., Dibattista, M., Pifferi, S., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+pheromones+to+behavior.">From pheromones to behavior.</a> Physiol. Rev. 89, 921-956 (2009).</li><li>Kelliher, K. R., Wersinger, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+regulation+of+the+sexual+behavior+and+reproductive+physiology+of+the+laboratory+mouse:+effects+and+neural+mechanisms.">Olfactory regulation of the sexual behavior and reproductive physiology of the laboratory mouse: effects and neural mechanisms.</a> ILAR J. 50, 28-42 (2009).</li><li>Yoon, H., Enquist, L. W., Dulac, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+inputs+to+hypothalamic+neurons+controlling+reproduction+and+fertility.">Olfactory inputs to hypothalamic neurons controlling reproduction and fertility.</a> Cell. 123, 669-682 (2005).</li><li>Boehm, U., Zou, Z., Buck, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feedback+loops+link+odor+and+pheromone+signaling+with+reproduction.">Feedback loops link odor and pheromone signaling with reproduction.</a> Cell. 123, 683-695 (2005).</li><li>Wilson, J. M., Dombeck, D. A., Diaz-Rios, M., Harris-Warrick, R. M., Brownstone, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+calcium+imaging+of+network+activity+in+XFP-expressing+neurons+in+the+mouse.">Two-photon calcium imaging of network activity in XFP-expressing neurons in the mouse.</a> J. Neurophysiol. 97, 3118-3125 (2007).</li><li>Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+near-atmospheric+concentrations+of+CO2+by+an+olfactory+subsystem+in+the+mouse.">Detection of near-atmospheric concentrations of CO2 by an olfactory subsystem in the mouse.</a> Science. 317, 953-957 (2007).</li><li>Perez, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transient+receptor+potential+channel+expressed+in+taste+receptor+cells.">A transient receptor potential channel expressed in taste receptor cells.</a> Nat. Neurosci. 5, 1169-1176 (2002).</li><li>Trollinger, D. R., Cascio, W. E., Lemasters, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+loading+of+Rhod+2+into+mitochondria+shows+mitochondrial+Ca2++transients+during+the+contractile+cycle+in+adult+rabbit+cardiac+myocytes.">Selective loading of Rhod 2 into mitochondria shows mitochondrial Ca2+ transients during the contractile cycle in adult rabbit cardiac myocytes.</a> Biochem Biophys. Res. Commun. 236, 738-742 (1997).</li><li>Meshik, X. A., Hyrc, K. L., Goldberg, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+Asante+Calcium+Red+-+a+novel+ratiometric+indicator+with+long+excitation+wavelength.">Properties of Asante Calcium Red - a novel ratiometric indicator with long excitation wavelength.</a> , (2010).</li></ol>

والسؤال الكبير هو في علم الأعصاب لفهم كيفية عمل الدماغ بمعالجة المعلومات الاجتماعية. يتم ترميز مصدر الغالبة من المعلومات اللازمة للاعتراف الاجتماعي من خلال حاسة الشم أو إشارات pheromonal. الكشف عن هذه الإشارات العصبية من قبل السكان في الأنف والاعتراف الإشارات في الدماغ?...

There was a typo in the abstract of <a href="http://www.jove.com/video/4213">Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices</a>.

Erratum: Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم </td><td> شركة </td><td> القط. N ° </td></tr><tr><td> أجار </td><td> سيجما </td><td> A1296 </td></tr><tr><td> Fura-red/AM </td><td> إينفيتروجن </td><td> F-3021 </td></tr><tr><td> بلورونيك F-127 </td><td> سيجما </td><td> P2443 </td></tr><tr><td> ثنائي ميثيل سلفوكسيد </td><td> فيشر العلمية </td><td> BP231 </td></tr><tr><td> تهتز بليد مشراح الوبر V 50 </td><td> زايس </td><td> 9770170 </td></tr><tr><td> CU جهاز التبريد 65 لمشراح الوبر V 50 </td><td> زايس </td><td> 9920120 </td></tr><tr><td> O 2 / CO حاضنة 2، CB210-UL </td><td> غلاف </td><td> 0019389 </td></tr><tr><td> سوبر الغراء، LOCTITE 406TM </td><td> هنكل </td><td> 142580 </td></tr><tr><td> ضعف ملاعق، شكل ملعقة </td><td>Bochem </td><td> 3182 </td></tr><tr><td> ملاعق Microspoon، شكل ملعقة </td><td> Bochem </td><td> 3344 </td></tr><tr><td> مقص الربيع، موريا، Vannas-ولف - شفرات 7MM </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 15370-52 </td></tr><tr><td> مقص الربيع، Vannas - شفرات 3MM </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 15000-00 </td></tr><tr><td> فاغنر مقص </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 14071-12 </td></tr><tr><td> الملقط الطبية، دومون 7B </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 11270-20 </td></tr><tr><td> غرفة كبيرة مستطيلة حمام مفتوح (RC-27) </td><td> وارنر الصكوك </td><td> 64-0238 </td></tr><tr><td> مبائر التألق BioRad مجهر 2100 </td><td> زايس </td><td> NA </td></tr></tbody></table>

imaging calcium responses in gfp-tagged neurons of hypothalamic mouse brain slices

على الرغم من الزيادة الهائلة في معرفتنا عن الآليات الكامنة والترميز للمعلومات في الدماغ، والسؤال المركزي بشأن الخطوات الدقيقة الجزيئية فضلا عن نشاط الخلايا العصبية محددة في نواة متعددة الوظائف للمناطق الدماغ مثل منطقة ما تحت المهاد لا تزال قائمة. هذه المشكلة يتضمن تحديد المكونات الجزيئية المشاركة في تنظيم مختلف الاجهزة هرمون عصبي نقل الإشارة. من الكالسيوم داخل الخلايا ترتفع 2 + تلعب دورا هاما في تنظيم حساسية الخلايا العصبية، سواء على مستوى نقل الإشارة في مواقع ومتشابك. ظهرت أدوات جديدة للمساعدة في تحديد الخلايا العصبية في الدماغ لا يحصى من الخلايا العصبية بالإعراب عن بروتين الفلورية الخضراء (GFP) تحت سيطرة المروج معينة. لرصد كل من المكان والزمان التحفيز التي يسببها الكالسيوم 2 + الردود في GFP الموسومة الخلايا العصبية، وهي منظمة غير الفلورية الخضراء كا 2 + ن مؤشر صبغلاستخدامها eeds. وبالإضافة إلى ذلك، المجهري متحد البؤر هو وسيلة مفضلة من الخلايا العصبية الفردية في التصوير شرائح الأنسجة بسبب قدرته على تصور الخلايا العصبية في الطائرات متميزة من عمق داخل الأنسجة والحد من خارج التركيز مضان. كا 2 + مؤشر ratiometric FURA-2 وقد استخدم في تركيبة مع GFP الموسومة الخلايا العصبية 1. ومع ذلك، هو متحمس الصبغة بواسطة ضوء (UV) فوق البنفسجية. أعاقت تكلفة من الليزر وعمق الاختراق محدودة الضوئية للضوء UV استخدامه في العديد من المختبرات. وعلاوة على ذلك، قد GFP مضان تتداخل مع الإشارات FURA-2 2. لذلك، قررنا استخدام أحمر فلوري الكالسيوم مؤشر + 2 صباغة. التحول السكتات ضخمة من FURA متعدد الألوان الحمراء يسمح تحليل مضان أحمر في تركيبة مع GFP باستخدام الطول الموجي الإثارة واحد. كان لدينا نتائج جيدة في السابق باستخدام FURA الحمراء في تركيبة مع GFP الموسومة الخلايا العصبية الشمية 3. يبدو أن بروتوكولات لشرائح الأنسجة للعمل حاسة الشم هكذلك qually في الخلايا العصبية طائي 4. FURA الحمراء يعتمد كا 2 + وأيضا الجمع بين التصوير بنجاح مع خلايا البنكرياس β-GFP الموسومة وGFP الموسومة المستقبلات في الخلايا أعرب HEK 5،6. A هوس القليل من FURA الحمراء هو أن كثافة مضان في 650 نانومتر يقلل مرة واحدة في مؤشر يربط الكالسيوم 7. ولذلك، فإن مضان من الخلايا العصبية يستريح مع انخفاض تركيز الكالسيوم + 2 لديه كثافة عالية نسبيا. تجدر الإشارة إلى أن الأحمر أخرى CA 2 +-مؤشر الأصباغ موجودة أو يتم تطويرها حاليا، التي قد تعطي نتائج أفضل أو تحسين في الخلايا العصبية المختلفة، ومناطق الدماغ.

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices at JoVE.com

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

في هذا البروتوكول، نقوم بتحديث التقدم الذي أحرز مؤخرا في كاليفورنيا التصوير<sup&gt; 2 +</sup&gt; الإشارات من الخلايا العصبية في GFP الموسومة شرائح أنسجة المخ باستخدام أحمر فلوري كاليفورنيا<sup&gt; 2 +</sup&gt; مؤشر صباغة.

الردود الكالسيوم في الخلايا العصبية التصوير GFP الموسومة تحت المهاد البصري من شرائح مخ الفأر

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Identified by Green Fluorescent Protein (GFP) in Hypothalamic Slices

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone GnRH Neurons Identified by Green Fluorescent Protein GFP in Hypothalamic Slices

المزدوج من تسجيلات الجسدية لإفراز هرمون موجهة الغدد التناسلية (GnRH) الخلايا العصبية التي تم تحديدها بواسطة بروتين الفلورية الخضراء (GFP) في شرائح طائية

Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) is a small neuropeptide that regulates pituitary release of luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating ...

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

التصوير الكالسيوم من الردود، رائحة أثار في ذبابة الفاكهة لوب Antennal

The antennal lobe is the primary olfactory center in the insect brain and represents the anatomical and functional equivalent of the vertebrate olfactory ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

إعداد شرائح الحاد المنطقة Subventricular للتصوير الكالسيوم

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

تصوير الكالسيوم اثنين-فوتون في Dendrites العصبية في الدماغ شرائح

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

تصوير راتيوميتريك الكالسيوم من الخلايا العصبية الفردية في التصرف ايليجانس كاينورهابديتيس

It has become increasingly clear that neural circuit activity in behaving animals differs substantially from that seen in anesthetized or immobilized ...

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

السابقين فيفو تصوير الكالسيوم لتصور استجابات الدماغ للإشارات الغدد الصماء في المورفولوجية

Organ-to-organ communication by endocrine signaling, for example, from the periphery to the brain, is essential for maintaining homeostasis. As a model ...

Ballistic Labeling of Pyramidal Neurons in Brain Slices and in Primary Cell Culture

وضع العلامات البالستية للخلايا العصبية الهرمية في شرائح الدماغ وفي ثقافة الخلايا الأولية

It has been reported that the size and shape of dendritic spines is related to their structural plasticity. To identify the morphological structure of ...

In vivo Calcium Imaging of Mouse Geniculate Ganglion Neuron Responses to Taste Stimuli

في تصوير الكالسيوم في الجسم الحي من الماوس Geniculate استجابات الخلايا العصبية العقدية لتذوق المحفزات

Within the last ten years, advances in genetically encoded calcium indicators (GECIs) have promoted a revolution in in vivo functional imaging. Using ...

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

في الجسم الحي تصوير الكالسيوم في الزيتون السفلي الماوس

Inferior olive (IO), a nucleus in the ventral medulla, is the only source of climbing fibers that form one of the two input pathways entering the ...

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

الكشف عن G البروتين إلى جانب مستقبلات التعبير في الخلايا العصبية Vagal الماوس Afferent باستخدام Multix في الموقع التهجين

This study describes a protocol for the multiplex in situ hybridization (ISH) of the mouse jugular-nodose ganglia, with a particular emphasis on detecting ...