Name: imaging calcium responses in gfp-tagged neurons of hypothalamic mouse brain slices
Uploaded: 2012-08-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices at JoVE.com

Biz çalışmalarına katılan meslektaşlarımızın burada özetlenen ederim. Bu çalışma Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 894), DFG Schwerpunktprogramm 1392 &#39;koku duyusunun Bütünleştirici analizi&#39; dan hibe ve Volkswagen Vakfı (TLZ) tarafından desteklenmiştir. TLZ Volkswagen Vakfı Lichtenberg Profesörü.

1. Çözüm ve Agaroz Jel Hazırlanması <ol><li> Çift distile su ile tabloya göre ekstrasellüler çözüm hazırlayın. PH değeri 7.3 olacak ~ carbogen (% 95 O2 /% 5 CO2), osmolarite 300 mOsm 8 ile 10 dk sonra havalandırma. Daha yüksek bir osmolarite gerekli ise, daha fazla glikoz (1 mM 1 mOsm eşit) eklenmesi ile ayarlanabilir. Çözelti, toz partikülleri ve olası bakteriyel kontaminasyon ortadan kaldırmak için bir 0.2 um zar filtresi kullanılarak iki kez süzülür. </li>...

<ol>
	<li>Almholt, K., Arkhammar, P. O., Thastrup, O., Tullin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+visualization+of+the+translocation+of+protein+kinase+Calpha-green+fluorescent+protein+hybrids+and+intracellular+calcium+concentrations.">Simultaneous visualization of the translocation of protein kinase Calpha-green fluorescent protein hybrids and intracellular calcium concentrations.</a> Biochem. J. 337 (Pt 2), 211-218 (1999).</li><li>Bolsover, S., Ibrahim, O., O'Luanaigh, N., Williams, H., Cockcroft, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+fluorescent+Ca2++dyes+with+green+fluorescent+protein+and+its+variants:+problems+and+solutions.">Use of fluorescent Ca2+ dyes with green fluorescent protein and its variants: problems and solutions.</a> Biochem. J. 356, 345-352 (2001).</li><li>Leinders-Zufall, T., Ishii, T., Mombaerts, P., Zufall, F., Boehm, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+requirements+for+the+activation+of+vomeronasal+sensory+neurons+by+MHC+peptides.">Structural requirements for the activation of vomeronasal sensory neurons by MHC peptides.</a> Nat. Neurosci. 12, 1551-1558 (2009).</li><li>Wen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+identification+of+GnRH+receptor+neurons:+a+new+model+for+studying+neural+circuits+underlying+reproductive+physiology+in+the+mouse+brain.">Genetic identification of GnRH receptor neurons: a new model for studying neural circuits underlying reproductive physiology in the mouse brain.</a> Endocrinology. 152, 1515-1526 (2011).</li><li>Hara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+pancreatic+beta-cells+in+the+intact+pancreas.">Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 290, E1041-E1047 (2006).</li><li>Doherty, A. J., Coutinho, V., Collingridge, G. L., Henley, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+internalization+and+surface+expression+of+a+functional,+fluorescently+tagged+G-protein-coupled+glutamate+receptor.">Rapid internalization and surface expression of a functional, fluorescently tagged G-protein-coupled glutamate receptor.</a> Biochem. J. 341 (Pt 2), 415-422 (1999).</li><li>Kurebayashi, N., Harkins, A. B., Baylor, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+fura+red+as+an+intracellular+calcium+indicator+in+frog+skeletal+muscle+fibers.">Use of fura red as an intracellular calcium indicator in frog skeletal muscle fibers.</a> Biophys. J. 64, 1934-1960 (1993).</li><li>Heyward, P. M., Chen, C., Clarke, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropin-releasing+hormone+modifies+action+potential+generation+in+sheep+pars+distalis+gonadotropes.">Gonadotropin-releasing hormone modifies action potential generation in sheep pars distalis gonadotropes.</a> Neuroendocrinology. 58, 646-654 (1993).</li><li>Kneen, M., Farinas, J., Li, Y., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+protein+as+a+noninvasive+intracellular+pH+indicator.">Green fluorescent protein as a noninvasive intracellular pH indicator.</a> Biophys. J. 74, 1591-1599 (1998).</li><li>Wen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+of+genetically+labeled+gonadotropes.">Functional characterization of genetically labeled gonadotropes.</a> Endocrinology. 149, 2701-2711 (2008).</li><li>Paxinos, G., Franklin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mouse brain in stereotaxic coordinates. , (2001).</li><li>Tirindelli, R., Dibattista, M., Pifferi, S., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+pheromones+to+behavior.">From pheromones to behavior.</a> Physiol. Rev. 89, 921-956 (2009).</li><li>Kelliher, K. R., Wersinger, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+regulation+of+the+sexual+behavior+and+reproductive+physiology+of+the+laboratory+mouse:+effects+and+neural+mechanisms.">Olfactory regulation of the sexual behavior and reproductive physiology of the laboratory mouse: effects and neural mechanisms.</a> ILAR J. 50, 28-42 (2009).</li><li>Yoon, H., Enquist, L. W., Dulac, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+inputs+to+hypothalamic+neurons+controlling+reproduction+and+fertility.">Olfactory inputs to hypothalamic neurons controlling reproduction and fertility.</a> Cell. 123, 669-682 (2005).</li><li>Boehm, U., Zou, Z., Buck, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feedback+loops+link+odor+and+pheromone+signaling+with+reproduction.">Feedback loops link odor and pheromone signaling with reproduction.</a> Cell. 123, 683-695 (2005).</li><li>Wilson, J. M., Dombeck, D. A., Diaz-Rios, M., Harris-Warrick, R. M., Brownstone, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+calcium+imaging+of+network+activity+in+XFP-expressing+neurons+in+the+mouse.">Two-photon calcium imaging of network activity in XFP-expressing neurons in the mouse.</a> J. Neurophysiol. 97, 3118-3125 (2007).</li><li>Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+near-atmospheric+concentrations+of+CO2+by+an+olfactory+subsystem+in+the+mouse.">Detection of near-atmospheric concentrations of CO2 by an olfactory subsystem in the mouse.</a> Science. 317, 953-957 (2007).</li><li>Perez, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transient+receptor+potential+channel+expressed+in+taste+receptor+cells.">A transient receptor potential channel expressed in taste receptor cells.</a> Nat. Neurosci. 5, 1169-1176 (2002).</li><li>Trollinger, D. R., Cascio, W. E., Lemasters, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+loading+of+Rhod+2+into+mitochondria+shows+mitochondrial+Ca2++transients+during+the+contractile+cycle+in+adult+rabbit+cardiac+myocytes.">Selective loading of Rhod 2 into mitochondria shows mitochondrial Ca2+ transients during the contractile cycle in adult rabbit cardiac myocytes.</a> Biochem Biophys. Res. Commun. 236, 738-742 (1997).</li><li>Meshik, X. A., Hyrc, K. L., Goldberg, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+Asante+Calcium+Red+-+a+novel+ratiometric+indicator+with+long+excitation+wavelength.">Properties of Asante Calcium Red - a novel ratiometric indicator with long excitation wavelength.</a> , (2010).</li></ol>

Sinirbilim bir önemli soru beynin sosyal bilgiler nasıl işlediğini anlamak. Sosyal tanıma için gerekli bilgilerin bir baskın kaynağı koku veya pheromonal sinyalleri tarafından kodlanmıştır. Nöronal burun nüfus ve özellikle beyin, hipotalamus sinyallerin tanınması ile bu sinyallerin tespiti, birçok sosyal süreçler ve etki hormonlar ve diğer nöroendokrin faktörler 13-16 anahtar bir rol oynamaktadır. Birden çok fonksiyonlu nöronlar çekirdekler içeren hipotalamus gibi beyin bölgeleri...

There was a typo in the abstract of <a href="http://www.jove.com/video/4213">Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices</a>.

Erratum: Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Kedi. N ° </td></tr><tr><td> Agar </td><td> Sigma </td><td> A1296 </td></tr><tr><td> Fura-red/AM </td><td> Invitrogen </td><td> F-3021 </td></tr><tr><td> Pluronic F-127 </td><td> Sigma </td><td> P2443 </td></tr><tr><td> Dimetil sülfoksit </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP231 </td></tr><tr><td> Titreşimli-Blade Mikroskobik damanı V 50 </td><td> Zeiss </td><td> 9770170 </td></tr><tr><td> Mikroskobik damanı V 50 için Aygıt CU 65 Soğutma </td><td> Zeiss </td><td> 9920120 </td></tr><tr><td> O 2 / CO 2 İnkübatör, CB210-UL </td><td> Cilt </td><td> 0019389 </td></tr><tr><td> Süper yapıştırıcı, Loctite 406TM </td><td> Henckel </td><td> 142580 </td></tr><tr><td> İkili spatula, kaşık şekilli </td><td>Bochem </td><td> 3182 </td></tr><tr><td> Microspoon spatula, kaşık şekilli </td><td> Bochem </td><td> 3344 </td></tr><tr><td> Bahar Makas, Moria-Vannas-Wolff - 7mm Bıçakları </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15370-52 </td></tr><tr><td> Bahar Makas, Vannas - 3mm Bıçakları </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15000-00 </td></tr><tr><td> Wagner Makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 14071-12 </td></tr><tr><td> Tıbbi Forseps, Dumont 7b </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11270-20 </td></tr><tr><td> Büyük Dikdörtgen Açık Banyo Odası (RC-27) </td><td> Warner Instruments </td><td> 64-0238 </td></tr><tr><td> Konfokal Mikroskop BioRad Işıltı 2100 </td><td> Zeiss </td><td> na </td></tr></tbody></table>

imaging calcium responses in gfp-tagged neurons of hypothalamic mouse brain slices

Beyinde bilgi kodlama, kesin moleküler adımları yanı sıra hipotalamus kalır gibi beyin bölgelerinin çok fonksiyonlu çekirdekler belirli nöronların aktivitesi açısından merkezi bir soru altında yatan mekanizmalar hakkında bilgimiz çok büyük bir artış olmasına rağmen. Bu sorun, çeşitli nevrohormondur sinyal iletim cascades düzenlenmesinde rol oynayan moleküler bileşenlerin tanımlanmasını içerir. Hücre içi Ca2 + yükselmesi iki sinyal iletim seviyesinde ve sinaptik de nöron duyarlılık düzenlenmesinde önemli bir rol oynamaktadır. Yeni araçlar, belirli bir promotör kontrolü altında yeşil floresan protein (GFP) ifade ederek beyin nöronlarının sayısız nöronlar belirlemenize yardımcı olmak için ortaya çıkmıştır. Hem mekansal ve zamansal olarak uyaran-indüklenen izlemek için Ca 2 GFP etiketli nöronlar, olmayan bir yeşil floresan Ca 2 + göstergesi boya n + yanıtlarıeeds kullanılır. Buna ek olarak, konfokal mikroskopi doku içindeki derinliği farklı düzlemlerde nöronlar görselleştirmek ve out-of-odak floresans sınırlamak için kabiliyeti nedeniyle doku dilimleri görüntüleme bireysel nöronların bir favori yöntemidir. Nöronlar 1 GFP-etiketli rasyometrik Ca 2 + gösterge fura-2 kombinasyon halinde kullanılmıştır. Ancak, boya ultraviyole (UV) ışık tarafından heyecanlı. UV ışık lazer ve sınırlı optik penetrasyon derinliği maliyeti birçok laboratuvarda kullanımı engellemiştir. Ayrıca, GFP floresan fura-2 sinyalleri 2 etkileyebilir. Bu nedenle, bir kırmızı floresan Ca 2 + gösterge boyası kullanmaya karar verdi. Fura-kırmızı büyük Strokes vites bir tek uyarılma dalgaboyu kullanılarak GFP ile kombinasyon halinde kırmızı renkli floresans analiz izin verir. Biz olfaktör nöronlar 3 GFP etiketli birlikte fura-kırmızı kullanarak önceden iyi sonuçlar vardı. Olfaktör doku dilimleri için protokoller e işe yaradıqually iyi hipotalamik nöronlar 4. Ca 2 tabanlı Fura-kırmızı + görüntüleme de başarıyla GFP etiketli pankreatik β-hücreleri ve HEK hücre 5,6 olarak ifade GFP etiketli reseptörleri ile kombine edildi. Fura-kırmızı küçük bir cilvesi göstergesi kalsiyum 7 bağlar kez 650 nm&#39;de onun floresans yoğunluğunu azaltır olmasıdır. Bu nedenle, düşük Ca2 + konsantrasyon ile dinlenme nöronların floresan nispeten yüksek yoğunluğuna sahiptir. Unutulmamalıdır, diğer kırmızı Ca 2 +-göstergesi boyalar var veya şu anda geliştirilmekte olan, farklı nöron ve beyin bölgelerinde daha iyi ya da daha iyi sonuçlar verebilir.

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices at JoVE.com

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

Bu protokol, biz görüntüleme Ca son gelişmeleri güncellemek<sup&gt; 2 +</supBir kırmızı floresan Ca kullanarak beyin dokusunda dilimler GFP etiketli nöronlar&gt; sinyalleri<sup&gt; 2 +</sup&gt; Gösterge boyası.

Hipotalamik Fare Beyin Dilimleri GFP etiketli Nöronlar in Görüntüleme Kalsiyum Cevapları

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Identified by Green Fluorescent Protein (GFP) in Hypothalamic Slices

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone GnRH Neurons Identified by Green Fluorescent Protein GFP in Hypothalamic Slices

Çift Somatik Kayıtlar Gonadotropin-Releasing Hipotalamik Dilimleri Yeşil Floresan Protein (GFP) Belirlenmiş Hormon (GnRH) Nöronlar

Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) is a small neuropeptide that regulates pituitary release of luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating ...

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

Koku-uyarılmış Cevaplarının Kalsiyum Görüntüleme Drosophila Antennal Lob

The antennal lobe is the primary olfactory center in the insect brain and represents the anatomical and functional equivalent of the vertebrate olfactory ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Kalsiyum Görüntüleme için akut subventricular dilimi Dilimleri hazırlanması

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

Fare Akut Beyin Dilimleri Neuroblast Göç vivo Doğum Sonrası Elektroporasyonla ve Time-lapse Görüntüleme

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

Nöronal Dendrites beyin dilimleri içinde iki fotonlu kalsiyum görüntüleme

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

Ratiometric kalsiyum görüntüleme Caenorhabditis Elegans davranışlar içinde bireysel nöronların

It has become increasingly clear that neural circuit activity in behaving animals differs substantially from that seen in anesthetized or immobilized ...

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

Ex Vivo Endokrin Drosophila içinde sinyal beyin yanıt-e doğru görüntülenmesi için kalsiyum görüntüleme

Organ-to-organ communication by endocrine signaling, for example, from the periphery to the brain, is essential for maintaining homeostasis. As a model ...

Ballistic Labeling of Pyramidal Neurons in Brain Slices and in Primary Cell Culture

Beyin Dilimlerinde ve Birincil Hücre Kültüründe Piramidal Nöronların Balistik Etiketlemesi

It has been reported that the size and shape of dendritic spines is related to their structural plasticity. To identify the morphological structure of ...

In vivo Calcium Imaging of Mouse Geniculate Ganglion Neuron Responses to Taste Stimuli

Tadı Uyaranlara Fare Genikül Ganglion Nöron Yanıtlarının In vivo Kalsiyum Görüntülemesi

Within the last ten years, advances in genetically encoded calcium indicators (GECIs) have promoted a revolution in in vivo functional imaging. Using ...

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

In vivo Fare Kalitesiz Zeytinde Kalsiyum Görüntüleme

Inferior olive (IO), a nucleus in the ventral medulla, is the only source of climbing fibers that form one of the two input pathways entering the ...