Name: human neuroendocrine tumor cell lines as a three-dimensional model for the study of human neuroendocrine tumor therapy
Uploaded: 2012-08-14T13:00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy at JoVE.com

אנחנו מאוד מודים לד&quot;ר Wenjin חן על עזרתה עם תוכנית MATLAB ו מכון הסרטן של המתקן החדש אנליזה פתולוגית בכליה ג&#39;רזי מתקן במיקרוסקופ. כמו כן, אנו מודים על הערותיהם ביקורות והצעות. מחקר זה נתמך על ידי ריימונד ובברלי סאקלר Research Foundation.

<ol>
	<li>Taal, B. G., Visser, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+neuroendocrine+tumours.">Epidemiology of neuroendocrine tumours.</a> Neuroendocrinology. 80, 3-7 (2004).</li><li>Lee, G. Y., Kenny, P. A., Lee, E. H., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+models+of+normal+and+malignant+breast+epithelial+cells.">Three-dimensional culture models of normal and malignant breast epithelial cells.</a> Nat. Methods. 4, 359-365 (2007).</li><li>Friedrich, J., Seidel, C., Ebner, R., Kunz-Schughart, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spheroid-based+drug+screen:+considerations+and+practical+approach.">Spheroid-based drug screen: considerations and practical approach.</a> Nat. Protocol. 4, 309-324 (2009).</li><li>Chan, T. F., Vese, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+contours+without+edges.">Active contours without edges.</a> IEEE Trans Image Process. 10, 266-277 (2001).</li><li>Olert, J., Wiedorn, K. H., Goldmann, T., K&#252;hl, H., Mehraein, Y., Scherthan, H., Niketeghad, F., Vollmer, E., M&#252;ller, A. M., M&#252;ller-Navia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOPE++Fixation:+A+Novel+Fixing+Method+and+Paraffin-embedding+Technique+for+Human+Soft+Tissues.">HOPE Fixation: A Novel Fixing Method and Paraffin-embedding Technique for Human Soft Tissues.</a> Pathology-Research and Practice. 197, 823-826 (2001).</li><li>Baradari, V., Huether, A., H&#246;pfner, M., Schuppan, D., Scher&#252;bl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiproliferative+and+proapoptotic+effects+of+histone+deacetylase+inhibitors+on+gastrointestinal+neuroendocrine+tumor+cells.">Antiproliferative and proapoptotic effects of histone deacetylase inhibitors on gastrointestinal neuroendocrine tumor cells.</a> Endocr. Relat. Cancer. 13, 1237-1250 (2006).</li><li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+Hanging+Drop+Cell+Culture+Protocol+for+Generation+of+3D+Spheroids.">A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids.</a> J. Vis. Exp. (51), e2720 (2011).</li><li>Shaw, K. R., Wrobel, C. N., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+three-dimensional+basement+membrane+cultures+to+model+oncogene-induced+changes+in+mammary+epithelial+morphogenesis.">Use of three-dimensional basement membrane cultures to model oncogene-induced changes in mammary epithelial morphogenesis.</a> J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 9, 297-310 (2004).</li><li>Ivascu, A., Kubbies, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+generation+of+single-tumor+spheroids+for+high-throughput+cell+function+and+toxicity+analysis.">Rapid generation of single-tumor spheroids for high-throughput cell function and toxicity analysis.</a> J. Biomol. Screen. 11, 922-932 (2006).</li><li>Napolitano, A. P., Chai, P., Dean, D. M., Morgan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+Self-Assembly+of+Complex+Cellular+Aggregates+on+Micromolded+Nonadhesive+Hydrogels.">Dynamics of the Self-Assembly of Complex Cellular Aggregates on Micromolded Nonadhesive Hydrogels.</a> Tissue Engineering. 13, 2087-2094 (2007).</li><li>do Amaral, J. B., Rezende-Teixeira, P., Freitas, V. M., Machado-Santelli, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MCF-7+cells+as+a+three-dimensional+model+for+the+study+of+human+breast+cancer.">MCF-7 cells as a three-dimensional model for the study of human breast cancer.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 17, 1097-1107 (2011).</li><li>Hirschhaeuser, F., Menne, H., Dittfeld, C., West, J., Mueller-Klieser, W., Kunz-Schughart, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+tumor+spheroids:+An+underestimated+tool+is+catching+up+again.">Multicellular tumor spheroids: An underestimated tool is catching up again.</a> Journal of Biotechnology. 148, 3-15 (2010).</li></ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

אנחנו הוכיחו שיטה פשוטה, אמינה, לשעתקו לגיבוש אליפטית תאיים 3D של האדם תאים סרטניים נוירואנדוקריניים באמצעות agarose מצופים 24 גם הצלחות. ההצלחה של שיטה זו הוא היכולת לקבל אליפטית אחת עם גודל אחיד וצורה אחידה ביום 6 החל מספר קבוע של תאים. הצעד העיקרי הוא תסיסה איטית של צלחת עם תאים נטו של 16-24 שעות לאחר ציפוי 1. שיטה זו יכולה לחול גם על המשותף השד האנושי סרטן תאים קו MCF-7, המעי הגס האנושי אדנוקרצינומה תאים קו HT-29, ריאה אנושית לא קטנים תא קרצינומה של תאים בשורה H1299 של התא האנושי העוברית הכליות קו HEK-293. הם יכולים ליצור spheroids 3D אחידים וקומפקטי עבור המסך תרופה טיפולית (מידע לא מוצג). אף על פי מספר שיטות מדווחים על יצירת spheroids 3D, 7-10 שיטת דיווח כאן אינו מחייב צלחות מיוחדות או ריאגנטים פשוטה ובכך וחסכונית. Demonstrat הנתונים שלנו לא פורסםדואר כי spheroids 3D נטו גדל על agarose לחקות בגידול xenograft vivo NET גאומטרית ו מולקולרי, בהשוואה לתאים monolayer 2 ד. זה דומה למה דווחה על spheroids 3D אחרים העשויים על שורות תאים סרטניים אנושיים. 11,12 הגבלה של מודל 3D התא התרבות היא שזה לא יכול להחליף לחלוטין בדיקות ביעילות vivo בשום תרופות או טיפולים רפואיים בגלל את spheroids 3D הם כמו גידולים avascular, שהוא שונה בגידול vivo בהיבט זה. עם זאת, שיטה זו תסייע לגשר על הפער והערכות של סמי מרפא נטו במבחנה כדי in vivo בהיבטים מסוימים. מכתים immunofluorescence על spheroids תאיים קשה מאוד לבצע בשל גודל גיאומטריה גדול של spheroids 3D צפים הגבלה של מיקרוסקופ confocal. כאן אנו להמחיש שיטה לעיבוד הטבעה HistoGel עבור פרפיןהטבעה, המתיר מכתים immunohistochemical של השקופיות מחולקות למדורים סדרתי של spheroids 3D. חוץ מזה, תוכנית מותאמת אישית מפותחת שלנו MATLAB עוזר מדויק reproducibly לאמוד את גודל spheroids, הצג את יעילות התרופה ביעילות, יכול להיות משולב בתוך המסך תפוקה גבוהה בפיתוח תרופות עבור חולים נטו.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> DMEM/F12 מדיה </td><td> Gibco </td><td> 10565-018 </td><td></td></tr><tr><td> TrypLE </td><td> Gibco </td><td> 12604 </td><td></td></tr><tr><td> 24 גם צלחות </td><td> בז </td><td> 353047 </td><td></td></tr><tr><td> תא 70 mM מסננת </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 22363548 </td><td></td></tr><tr><td> איטום סטרילית קלטת </td><td> Nunc </td><td> 236366 </td><td></td></tr><tr><td> Trichostatin </td><td> סיגמא </td><td> T8552 </td><td></td></tr><tr><td> Orbital שאכר </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 11-402-12 </td><td></td></tr></tbody></table>

human neuroendocrine tumor cell lines as a three-dimensional model for the study of human neuroendocrine tumor therapy

גידולים נוירואנדוקריניים (סלים) הם גידולים נדירים, עם שכיחות של 2 ל -100, 000 אנשים בשנה, והם מהווים 0.5% מכלל ממאירויות אדם. 1 מלבד ניתוח למיעוט מהחולים המציגים עם מחלה מקומית, יש הישרדות יתרון קטן, אם בכלל, של טיפול מערכתי. לכן, יש צורך גדול כדי להבין טוב יותר את הביולוגיה של NETS, ובפרט להגדיר מטרות טיפוליות חדשות עבור חולים עם גידולים נוירואנדוקריניים nonresectable או גרורתי. תרבית תאים 3D הופכת השיטה הפופולרית לסינון תרופות בשל הרלוונטיות שלה בדוגמנות בארגון vivo microenvironment רקמת הגידול. 2,3 את spheroids תאיים 3D יכול לספק מידע רב ערך במועד יותר זול יותר מאשר ישירות שתמשיך מ 2 ד תא ניסויים תרבות לחיה (Murine) מודלים. כדי להקל על גילוי חדש הרפוי של פט NETients, פיתחנו מודל במבחנה 3D spheroids תאיים באמצעות שורות תאים אנושיות נטו. התאים נטו מצופה על צלחת לא דבק 24-agarose גם מצופה ו מודגרות בתנאים פיזיולוגיים (5% CO 2, 37 ° C) עם תסיסה איטית מאוד שעות 16-24 לאחר ציפוי. התאים יוצרים spheroids תאיים החל ביום ה -3 או 4 ה. Spheroids הופכים כדורית יותר מיום ליום ה 6, ובשלב זה של טיפולים תרופתיים הם יזמו. היעילות של טיפולים תרופתיים על spheroids נטו פיקוח המבוסס על צורה מורפולוגיה, והגודל של spheroids עם מיקרוסקופ שלב לעומת האור. גודל של spheroids מוערכת באופן אוטומטי באמצעות תוכנית אישית מפותחת MATLAB מבוסס על אלגוריתם מתאר פעיל. יתר על כן, אנו מראים שיטה פשוטה לעבד הטבעה HistoGel אלה spheroids 3D, המאפשר שימוש בטכניקות היסטולוגית ו immunohistochemical סטנדרטיים. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; זהו הדו&quot;ח הראשון על יצירת spheroids 3D באמצעות שורות תאים נטו לבחון את ההשפעה של תרופות טיפוליות. יש לנו גם ביצע היסטולוגיה אלה spheroids 3D, ומוצג דוגמה להשפעה של תרופה אחת על צמיחה התפשטות של spheroids נטו. התוצאות שלנו תומכות כי spheroids נטו הם בעלי ערך למחקרים נוספים של ביולוגיה NET ופיתוח תרופות.

Watch this Scientific Journal Video about Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy at JoVE.com

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

אנו מציגים פלטפורמה פשוטה agarose כיסוי לגדול spheroids תאיים 3D באמצעות נוירואנדוקריניים שורות תאים סרטניים. שיטה זו מספקת דרך נוחה מאוד לבחון את ההשפעה של תרופות טיפוליות על תאים סרטניים נוירואנדוקריניים. זה יכול גם לעזור לנו לקבוע אדם spheroids סרטניים נוירואנדוקריניים לטיפול בסרטן.

האדם תאים סרטניים נוירואנדוקריניים קווים כמו מודל תלת ממדי לחקר הטיפול האנושי גידול נוירואנדוקריניים

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

רומן ברזולוציה גבוהה<em&gt; בvivo</em&gt; טכניקת הדמיה כדי לחקור את התגובה דינמית של מבנים תוך גולגולתי לצמיחה גידול וTherapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

דגם תרבות רקמות תלת ממדי למחקר עיקרי עצם אדם מח וממאיר שלו

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

הפעלת יתר רעיל גירוי של המוח כMicroslices<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם של שבץ

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

כימות של הפולשנות תאי סרטן השד תוך שימוש במודל תלת ממדים (3D)

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

מודל שיתוף תרבות תלת-ממדי לגידול אינטראקציה-סטרומה

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

הערכה של תת-יקוציט חדירת גידול בדגם גידול תת עורי

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Establishment of a Human Multiple Myeloma Xenograft Model in the Chicken to Study Tumor Growth, Invasion and Angiogenesis

הקמת מודל xenograft מיאלומה נפוצה אדם בעוף לחקר צמיחת גידול, פלישה ואנגיוגנזה

Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Assay (3D) תלת ממדי גידול ספרואיד הפלישה

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Dynamic Lung Tumor Tracking for Stereotactic Ablative Body Radiation Therapy

מעקב גידול ריאות דינמי לstereotactic פולשני גוף קרינת תרפיה

Physicians considering stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) for the treatment of extracranial cancer targets must be aware of the sizeable ...

A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs

A Glioblastoma האדם דגם תרבות פרוסה Organotypic לחקר גידול תאים סרטניים ואפקטים ספציפיים לחולה של תרופות אנטי פולשניות

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor ...