Name: monitoring cell-autonomous circadian clock rhythms of gene expression using luciferase bioluminescence reporters
Uploaded: 2012-09-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Cell-autonomous Circadian Clock Rhythms of Gene Expression Using Luciferase Bioluminescence Reporters at JoVE.com

وأيد هذا العمل في جزء من المؤسسة الوطنية للعلوم (IOS-0920417) (ACL).

1. بناء مراسلون وسيفيراز Lentiviral A الثدييات بناء مراسل الإيقاعية يحتوي عادة كاسيت التعبير التي تنصهر مع الساعة البيولوجية أحد المروجين الجين وسيفيراز. ويشيع استخدام استراتيجيات ربط كل وإعادة التركيب القائم على استنساخ الحمض ا?...

1. تعديلات على البروتوكول الحالي أجهزة تسجيل 1.1 و اعتبارات الإنتاجية بسبب توافر التجاري، أصبح LumiCycle (Actimetrics) الأكثر شيوعا جهاز luminometer الآلي في الوقت الحقيقي تسجيل 4،5،9،19،29-31. وتوظف LumiCycle أناب...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> HyClone </td><td> SH30243FS </td><td> لنمو الخلايا العادية </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> إينفيتروجن </td><td> 12100-046 </td><td> لluminometry </td></tr><tr><td> FBS </td><td> HyClone </td><td> SH3091003 </td><td></td></tr><tr><td> القلم / بكتيريا / GLN (100X) </td><td> HyClone </td><td> SV3008201 </td><td></td></tr><tr><td> B-27 </td><td> إينفيتروجن </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> D-وسيفيرين </td><td> Biosynth </td><td> L-8220 </td><td></td></tr><tr><td> بولي يسين-L- </td><td> سيجما </td><td> P4707 </td><td></td></tr><tr><td> Polybrene </td><td> ميليبور </td><td&gt; TR-1003-G </td><td></td></tr><tr><td> Forskolin </td><td> سيجما </td><td> F6886 </td><td></td></tr><tr><td> جميع المواد الكيميائية الأخرى </td><td> سيجما </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> معدات </td></tr><tr><td> زراعة الأنسجة حاضنة </td><td></td><td></td><td> CO2 5٪ عند 37 ° C </td></tr><tr><td> زراعة الأنسجة هود </td><td></td><td></td><td> BSL-2 مصدقة </td></tr><tr><td> ضوء الفلورسنت والمجهر </td><td></td><td></td><td> على النقيض مرحلة اختيارية </td></tr><tr><td> LumiCycle </td><td> Actimetrics </td><td></td><td></td></tr></table>

monitoring cell-autonomous circadian clock rhythms of gene expression using luciferase bioluminescence reporters

في الثدييات، وينظم العديد من جوانب السلوك وعلم وظائف الأعضاء مثل دورات النوم واليقظة والتمثيل الغذائي في الكبد عن طريق الساعات الساعة البيولوجية الداخلية (مراجعة 1،2). والإيقاعية الوقت لحفظ النظام هو الهرمي متعدد مذبذب الشبكة، مع ساعة المركزي الموجود في نواة suprachiasmatic (SCN) مزامنة وتنسيق الساعات خارج SCN والطرفية في أماكن أخرى 1،2. الخلايا الفردية هي وحدات وظيفية للجيل وصيانة إيقاعات الساعة البيولوجية 3،4، وهذه مؤشرات التذبذب من أنواع الأنسجة المختلفة في الكائن الحي على حصة متشابهة بشكل ملحوظ البيوكيميائية آلية تغذية مرتدة سلبي. ومع ذلك، نظرا للتفاعلات على مستوى الشبكة العصبية في SCN ومن خلال العظة، الإيقاعي النظامية على المستوى العضوي، إيقاعات الساعة البيولوجية على المستوى العضوي ليست بالضرورة خلية مستقلة 5-7. دراسات مقارنة للنشاط الحركي التقليدية في الجسم الحي وSCN إإكسبلنتس خارج الجسم، جالذراع التي يوجد مقرها في المقايسات المختبر تسمح لاكتشاف خلية مستقلة العيوب الإيقاعية 5،8. استراتيجيا، خلية النماذج القائمة على أكثر لين العريكة تجريبيا لتوصيف المظهري والاكتشاف السريع للآليات الأساسية على مدار الساعة 5،8-13. لأن الإيقاع اليومي الحيوية، وهناك حاجة إلى قياسات الطولية العالية لقرار الزمنية لتقييم وظيفة على مدار الساعة. في السنوات الأخيرة، أصبح في الوقت الحقيقي باستخدام تسجيل تلألؤ بيولوجي يراعة luciferase كمراسلة تقنية مشتركة لدراسة الإيقاع اليومي في الثدييات 14،15، لأنه يتيح للفحص لاستمرار وديناميات الجزيئية الإيقاعات. لرصد الخلايا المستقلة إيقاعات الساعة البيولوجية في التعبير الجيني، يمكن عرض صحفيين في الخلايا عن طريق وسيفيراز ترنسفكأيشن عابرة 13،16،17 أو تنبيغ مستقرة 5،10،18،19. نحن هنا وصف بروتوكول تنبيغ مستقرة باستخدام الفيروسة البطيئة بوساطة توصيل الجينات. Tانه نظام ناقلات lentiviral متفوقة على الطرق التقليدية مثل ترنسفكأيشن عابرة وانتقال سلالة الجرثومية بسبب كفاءتها وبراعة: أنه يسمح التنفيذ الفعال والتكامل مستقرة في الجينوم المضيف على حد سواء وعدم تقسيم تقسيم الخلايا 20. مرة واحدة يتم إنشاء خط خلية مراسل، يمكن فحص وظيفة ديناميكية على مدار الساعة من خلال تسجيل تلألؤ بيولوجي. وصفنا لأول مرة جيل من (Per2) P-خطوط مراسل د لوك، ومن ثم تقديم بيانات من هذا وصحفيين الإيقاعية الأخرى. في هذه المقايسات، وتستخدم الخلايا الليفية الماوس 3T3 وU2OS خلايا عظمية الإنسان كنماذج الخلوية. نناقش أيضا سبل مختلفة لاستخدام هذه النماذج على مدار الساعة في الدراسات الإيقاعية. ويمكن تطبيق الأساليب المذكورة هنا لمجموعة كبيرة ومتنوعة من أنواع الخلايا لدراسة أساس الخلوية والجزيئية من الساعات الإيقاعية، وربما تكون مفيدة في معالجة المشاكل في النظم البيولوجية الأخرى.

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Cell-autonomous Circadian Clock Rhythms of Gene Expression Using Luciferase Bioluminescence Reporters at JoVE.com

Monitoring Cell-autonomous Circadian Clock Rhythms of Gene Expression Using Luciferase Bioluminescence Reporters

الساعة البيولوجية تعمل الساعات داخل الخلايا الفردية، أي أنها خلية مستقلة. هنا، نحن تصف طرق لتوليد نماذج على مدار الساعة خلية المستقلة باستخدام غير الغازية، وسيفيراز التكنولوجيا القائمة على تلألؤ بيولوجي في الوقت الحقيقي. خلايا مراسل توفير لين العريكة، ونظم نموذج وظيفي لدراسة علم الأحياء الإيقاعية.

رصد الخلية التي تتمتع بحكم ذاتي إيقاعات الساعة اليومية في التعبير الجيني باستخدام مراسلون ضوء بارد وسيفيراز

In mammals, many aspects of behavior and physiology such as sleep-wake cycles and liver metabolism are regulated by endogenous circadian clocks ...

Research

JoVE Journal

Biology

Bacterial Gene Expression Analysis Using Microarrays

التحليل الجرثومي التعبير الجيني عن طريق ميكروأرس]

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

التحضير لزراعة الخلايا المكونة للدم الابتدائية من نخاع عظام الفئران لElectroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

باستخدام الجينات Electroporation MXcell بولسير النظام لTransfect الخلايا الأولية ذات الكفاءة العالية

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

باستخدام خلية مكافحة الآلي لتبسيط دراسات التعبير الجيني : ضربة قاضية سيرنا من IL - 4 التعبير الجيني في الخلايا التابعة Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

إعادة إعماره في المختبر من أحدث T. castaneum تيلوميراز

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

تحليل الحمض النووي الريبي العالمي التجميعي على مستوى خلية واحدة نقص الأكسجة التالي

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

قياس معدل الأيض في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; باستخدام قياس التنفس

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

رصد الباطنة شبكية الكالسيوم باستخدام<em&gt; Gaussia</em&gt; luciferase المراسل SERCaMP

The endoplasmic reticulum (ER) contains the highest level of intracellular calcium, with concentrations approximately 5,000-fold greater than cytoplasmic ...

Detection of Intracellular Gene Expression in Live Cells of Murine, Human and Porcine Origin Using Fluorescence-labeled Nanoparticles

الكشف عن التعبير الجيني بين الخلايا في الخلايا الحية من الفئران، الإنسان ولحم الخنزير المنشأ عن طريق النانوية المسمى الإسفار

The reprogramming of somatic cells to induced pluripotent stem cells (iPS) has successfully been performed in different mammalian species including mouse, ...

Rapid Analysis of Circadian Phenotypes in Arabidopsis Protoplasts Transfected with a Luminescent Clock Reporter

تحليل سريع من الظواهر الإيقاعية في نبات الأرابيدوبسيس جبلة مجردة Transfected مع ساعة مراسل الفلورسنت

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable ...