Name: measurement of antibody effects on cellular function of isolated cardiomyocytes
Uploaded: 2013-03-08T12:00:00
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心血管疾患における体液性免疫応答（ - この作品は、ドイツ学術振興協会（DFG）のSonderforschungsbereich Transregio 19（SFB/TR19、C2）は、経済技術プロジェクトZIM-KF 2727801MD0連邦省とイノベーションのコンピテンスセンターでサポートされていたZIK-ハイキング、教育研究、ドイツ連邦省BMBF FKZ 03Z2CN12）。動物とハウジングとの実験は、実験動物学（ゲゼルシャフトエリーゼのためVersuchstierkunde、GV-SOLAS条約）と欧州実験動物学協会（FELASA）連合学会の勧告に従って行われた。

1。患者サンプルからのIgGアイソ<ol><li>空のエコノパックカラムに2ミリリットル患者EDTA血漿当たり3ミリリットル抗IgGセファロースを充填することにより、ミニ免疫吸着カラムを準備します。 IgGの分離は、患者血漿の少なくとも2ミリリットルを必要とします。 </li><li>抗IgGセファロースの上にフィルターを置き、カラムの下部先端を開き、約1滴/秒の流速に到達するためにフィルタを押しカ?...

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	<li>Roger, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2011+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics--2011 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 123 (4), e18 (2011).</li><li>Caforio, A. L., Vinci, A., Iliceto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-heart+autoantibodies+in+familial+dilated+cardiomyopathy.">Anti-heart autoantibodies in familial dilated cardiomyopathy.</a> Autoimmunity. 41 (6), 462 (2008).</li><li>Yoshikawa, T., Baba, A., Nagatomo, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+mechanisms+underlying+dilated+cardiomyopathy.">Autoimmune mechanisms underlying dilated cardiomyopathy.</a> Circ. J. 73 (4), 602 (2009).</li><li>Felix, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+effects+of+immunoadsorption+and+subsequent+immunoglobulin+substitution+in+dilated+cardiomyopathy:+Three-month+results+from+a+randomized+study.">Hemodynamic effects of immunoadsorption and subsequent immunoglobulin substitution in dilated cardiomyopathy: Three-month results from a randomized study.</a> Journal of the American College of Cardiology. 35 (6), 1590 (2000).</li><li>Staudt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+immunoglobulin+G3+subclass+in+dilated+cardiomyopathy:+results+from+protein+A+immunoadsorption.">Role of immunoglobulin G3 subclass in dilated cardiomyopathy: results from protein A immunoadsorption.</a> Am. Heart J. 150 (4), 729 (2005).</li><li>Nikolaev, V. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescence+method+for+the+rapid+detection+of+functional+beta1-adrenergic+receptor+autoantibodies+in+heart+failure.">A novel fluorescence method for the rapid detection of functional beta1-adrenergic receptor autoantibodies in heart failure.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 50 (5), 423 (2007).</li><li>Jahns, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+activating+human+beta1-adrenergic+receptors+are+associated+with+reduced+cardiac+function+in+chronic+heart+failure.">Autoantibodies activating human beta1-adrenergic receptors are associated with reduced cardiac function in chronic heart failure.</a> Circulation. 99 (5), 649 (1999).</li><li>Gocayne, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+structure+of+rat+cardiac+beta-adrenergic+and+muscarinic+cholinergic+receptors+obtained+by+automated+DNA+sequence+analysis:+further+evidence+for+a+multigene+family.">Primary structure of rat cardiac beta-adrenergic and muscarinic cholinergic receptors obtained by automated DNA sequence analysis: further evidence for a multigene family.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 84 (23), 8296 (1987).</li><li>Jaenicke, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+complete+sequence+of+the+human+beta-myosin+heavy+chain+gene+and+a+comparative+analysis+of+its+product.">The complete sequence of the human beta-myosin heavy chain gene and a comparative analysis of its product.</a> Genomics. 8 (2), 194 (1990).</li><li>Piper, H. M., Volz, A., Schwartz, P., Piper, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Culture Techniques in Heart and Vessel Research. , (1990).</li><li>Kubin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+endothelial+cells+remodel+cultured+adult+cardiomyocytes+and+increase+their+survival.">Microvascular endothelial cells remodel cultured adult cardiomyocytes and increase their survival.</a> Am. J. Physiol. 276 (6 Pt. 2), H2179 (1999).</li><li>Grynkiewicz, G., Poenie, M., Tsien, R. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+application+of+in+vitro+methods+to+safety+pharmacology.">The application of in vitro methods to safety pharmacology.</a> Fundam. Clin. Pharmacol. 16 (3), 209 (2002).</li><li>Kajzar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+physiological+conditions+for+cell+analyses:+forces+of+heart+muscle+cells+suspended+between+elastic+micropillars.">Toward physiological conditions for cell analyses: forces of heart muscle cells suspended between elastic micropillars.</a> Biophys. J. 94 (5), 1854 (2008).</li></ol>

提示された方法は不明起源のDCM患者において、機能的に有効な心臓の自己抗体を検出するのに適した方法を提供しています。他の方法と比較して、cAMPレベル6への影響により、β1-アドレナリン受容体に対して機能アクティブ抗体の検出を、例えば 、我々の手法は、特定のエピトープとは無関係です。もちろん、文献に記載されている他のエピトープの独立したアッセイは、パ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/機器の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td> Immunosorba保存液</td><td>フレゼニウスメディカルケア</td><td> 903609211 </td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼタイプ2 </td><td>細胞系</td><td> LS004176 </td><td></td></tr><tr><td> BSA、脂肪酸フリー</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> A6003 </td><td></td></tr><tr><td>ラミニン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> L2020 </td><td></td></tr><tr><td>のFura-2 AM </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> F0888 </td><td> DMSO中で1 mg / mlの</td></tr><tr><td>エコノパッククロマトグラフィーカラム</td><td> BioRad社</td><td> 732-1010 </td><td></td></tr><tr><td>スペクトラ/ポアバイオセルロースエステル透析MEMBRAN電子</td><td> Spectrumlabs </td><td> 131417 </td><td></td></tr><tr><td> 4ウェルチェンカバーガラス</td><td>ヌンク</td><td> 155383 </td><td></td></tr><tr><td>筋細胞のカルシウムと収縮レコーディングシステム</td><td> IonOptix </td><td></td><td></td></tr><tr><td> IonWizard 6.0解析ソフトウェア</td><td> IonOptix </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

measurement of antibody effects on cellular function of isolated cardiomyocytes

拡張型心筋症（DCM）は、若年成人1で心不全のための主要な原因の一つです。有毒物質に対する遺伝的気質と博覧会は、患者の約3分の1で、この病気の原因を知られているが、DCMの起源は、主に不明なままである。これらの患者の相当数は、心臓エピトープに対する自己抗体が検出されており、2,3病の発症と進行に重要な役割を果たすことが疑われている。心筋自己抗体の重要性は、免疫吸着3月5日で自己抗体を除去した後、DCM患者において観察された血行動態の改善によって強調される。特定の種々の抗原は、すでに2,3同定されており、これらのターゲットに対する抗体は免疫アッセイによって検出することができる。しかし、これらのアッセイは、刺激（したがって、機能的に有効な）と自己抗体をブロッキングを区別することはできません。 evidenが高まっているこの区別は6,7重要であることをCE。またcardiotropic抗体の数のターゲットはまだ正体不明であるため、免疫アッセイでは検出できないことが想定される。したがって、我々はそれぞれの抗原とは独立し、機能的に活性なcardiotropic抗体の検出のための方法を確立した。法の背景には、通常哺乳類8,9間に心臓のタンパク質の機能領域について観測と高い相同性があります。これは、ヒト抗原に対する抗体が心臓になる成体ラットの心筋細胞のDCM患者からのIgGのテストを許可する非ヒト標的細胞と交差反応することを示唆している。本手法は3つのステップで構成されています：最初に、IgGは免疫吸着カラム（PlasmaSelect、テーテロー、ドイツ）から入手セファロース結合抗IgG抗体を用いて患者血漿から分離されています。第二に、成体心筋細胞は、APを使用してランゲンドルフ灌流装置にコラゲナーゼ灌流によって分離されているrotocolは、以前の作品から、10,11を変更しました 。得られた心筋細胞は容易に細胞内カルシウム（Ca 2 +）の内容12を観察するための細胞内に持ち込むことのできるカルシウム選択的蛍光色素、ラミニンコートチャンバーcoverglassesに取り付け、のFura-2で染色されています。最後のステップでは、細胞短縮とCa 2上の患者IgGの効果フィールドの+過渡刺激心筋細胞は、商業筋細胞のカルシウムと標準蛍光逆に接続されている収縮性監視システム（IonOptix、ミルトン、MA、USA）を使用してオンラインで監視されている顕微鏡。

フィールドでの携帯変力作用を測定するための二つの例は以下のとおりである筋細胞のCa 2 +および収縮記録システムを用いて成体心筋細胞を（ 図2）を刺激した。 図3は、制御測定の印象を与え、 図4の間cardiodepressive抗体の効果DCMを使用した患者の図が示されている。 どちらの例でも、初期の細胞短縮とCa 2 + EBで灌流...

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Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes

提示された方法は、細胞の短縮と分離したラットの心筋細胞の細胞内カルシウムトランジェントの隔離患者の免疫の影響を分析することで、にかかわらず、特定の抗原の、拡張型心筋症患者の血漿中で機能的な効果cardiotropic自己抗体を検出する方法を提供します。

隔離された心筋細胞の細胞機能に対する抗体の効果測定

Dilated cardiomyopathy  (DCM) is one of the main causes for heart failure in younger adults1.  Although genetic disposition and exposition to toxic ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

細胞質のCaの測定 2 +絶縁収縮リンパ管における

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

免疫・感染学

A Microplate Assay to Assess Chemical Effects on RBL-2H3 Mast Cell Degranulation: Effects of Triclosan without Use of an Organic Solvent

RBL-2H3マスト細胞脱顆粒に対する化学的影響を評価するために、マイクロプレートアッセイ：有機溶剤を使用せずに、トリクロサンの影響

Mast cells play important roles in allergic disease and immune defense against parasites. Once activated (e.g. by an allergen), they degranulate, a ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

赤血球上の抗体誘導性補体活性化の定量的検出のための方法

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

PM10における粒子結合のBet V 1アレルゲンのフローサイトメトリー分析

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Peptide Scanning-assisted Identification of a Monoclonal Antibody-recognized Linear B-cell Epitope

モノクローナル抗体認識リニアB細胞エピトープのペプチドスキャンアシスト識別

The identification of an antigenic epitope by the immune system allows for the understanding of the protective mechanism of neutralizing antibodies that ...

Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes

腹腔内のブドウ糖負荷試験、肥満や呼吸器アウトカムに対する代謝が異常の影響を研究する肺機能の測定や肺の固定

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

マウス骨髄と腹腔マクロファージ活性化抗体を用いた薬剤効果の評価

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

マウスの唾液腺機能の測定法

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Construction of Synthetic Phage Displayed Fab Library with Tailored Diversity

合成のバクテリオファージの建設は合わせた多様性と fab 抗体ライブラリーを表示

Demand for monoclonal antibodies (mAbs) in basic research and medicine is increasing yearly. Hybridoma technology has been the dominant method for mAb ...

Effect of Anti-c-fms Antibody on Osteoclast Formation and Proliferation of Osteoclast Precursor In Vitro

破骨細胞形成と培養破骨細胞前駆体の増殖に及ぼす抗 c-fms 抗体

Bone remodeling is a complex process and it involves periods of deposition and resorption. Bone resorption is a process by which bone is broken down by ...