Name: an assay for permeability of the zebrafish embryonic neuroepithelium
Uploaded: 2012-10-24T12:00:00
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이 작품은 국립 정신 건강 연구소와 국립 과학 재단 (National Science Foundation)에서 지원되었습니다. 전문가 생선 축산에 대한 많은 유용한 토론과 건설적인 비판, 그리고 올리버 Paugois에 대한 Sive 연구소 회원에게 특별 감사드립니다.

1. Microinjection 준비 <ol><li> 셔터 계기 바늘 풀러를 사용하여 모세관 튜브를 당겨 microinjection의 바늘을 준비합니다. </li><li> 형광 염료와로드 microinjection의 바늘 (FITC-Dextran). </li><li> micromanipulator 및 microinjection 장치에 바늘을 탑재합니다. </li><li> 조심스럽게 폭 약 2 μm로 집게를 사용하여 microinjection의 바늘을 부러 그러나, 이렇게하면 microinjector 설정에 따라 달라집니다. 우리 microinjection의 바늘이 구?...

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	<li>Harrington, M. J., Hong, E., Brewster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+neurulation:+first+impressions+do+not+count.">Comparative analysis of neurulation: first impressions do not count.</a> Mol. Reprod. Dev. 76, 954-965 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+of+vertebrate+neurulation+and+a+re-evaluation+of+teleost+neural+tube+formation.">Strategies of vertebrate neurulation and a re-evaluation of teleost neural tube formation.</a> Mech. Dev. 121, 1189-1197 (2004).</li><li>Salehi, Z., Mashayekhi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+cerebrospinal+fluid+on+neural+cell+survival+in+the+developing+chick+cerebral+cortex:+an+in+vivo+study.">The role of cerebrospinal fluid on neural cell survival in the developing chick cerebral cortex: an in vivo study.</a> Eur. J. Neurol. 13, 760-764 (2006).</li><li>Martin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+embryonic+brain+development+in+rats+requires+the+trophic+influence+of+cerebrospinal+fluid.">Early embryonic brain development in rats requires the trophic influence of cerebrospinal fluid.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 27, 733-740 (2009).</li><li>Lehtinen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid+provides+a+proliferative+niche+for+neural+progenitor+cells.">The cerebrospinal fluid provides a proliferative niche for neural progenitor cells.</a> Neuron. 69, 893-905 (2011).</li><li>Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+cerebrospinal+fluid+regulates+neuroepithelial+survival,+proliferation,+and+neurogenesis+in+chick+embryos.">Embryonic cerebrospinal fluid regulates neuroepithelial survival, proliferation, and neurogenesis in chick embryos.</a> Anat. Rec. A. Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 284, 475-484 (2005).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Totally+tubular:+the+mystery+behind+function+and+origin+of+the+brain+ventricular+system.">Totally tubular: the mystery behind function and origin of the brain ventricular system.</a> Bioessays. 31, 446-458 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li><li>Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+neuroepithelial+barrier+by+Claudin5a+is+essential+for+zebrafish+brain+ventricular+lumen+expansion.">Establishment of a neuroepithelial barrier by Claudin5a is essential for zebrafish brain ventricular lumen expansion.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 1425-1430 (2010).</li><li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+brain+ventricle+injection.">Zebrafish brain ventricle injection.</a> J. Vis. Exp. , (2009).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M., Sprague, J., Doerry, E., Douglas, S., Grp, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Information+Network+(ZFIN):+a+resource+for+genetic,+genomic+and+developmental+research.">The Zebrafish Information Network (ZFIN): a resource for genetic, genomic and developmental research.</a> Nucleic Acids Research. 29, 87-90 (2001).</li></ol>

우리는 주어진 분자 무게의 주입 염료에 대한 결정으로 생활 배아 zebrafish의 뇌의 투자율을 수량화 할 수있는 능력을 보여줍니다. 배아 zebrafish의 neuroepithelium는 분자 가중치를 서로 다른의 염료에 differentially 투과성있는 것으로 관찰 염료가 paracellular 투자율을 통해 이동하는 것이 좋습니다. 그러나, 우리는 관찰 투자율에 transcellular 공헌의 가능성을 배제 할 수 없습니다. 이 기술은 튜브의 내부와 ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> Dextran, Fluorescein, 음이온, 리신 고칠 수 </td><td> Invitrogen </td><td> D7136, D7137, D1822, D1820, D1845 </td></tr><tr><td> Tricaine 분말 </td><td> 시그마 </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> 모세관 튜브 </td><td> FHC 주식회사 </td><td> 30-30-1 </td></tr></tbody></table>

an assay for permeability of the zebrafish embryonic neuroepithelium

뇌 심실 시스템은 vertebrates 사이에 보존되어 있으며 뇌 개발의 초기 단계에서 형성과 동물의 삶을 통해 유지 뇌 심실라는 상호 충치의 일련의로 구성되어 있습니다. 뇌 심실 시스템은 vertebrates에서 발견하고, 심실은 중앙 루멘은 뇌척수 (CSF) 1,2로 채워 때, 신경 튜브 형성 한 후 개발을하고 있습니다. CSF는 정상적인 두뇌 개발과 기능 3-6을 위해 필수적이며 단백질 풍부한 액체이다. 신경 튜브가 폐쇄 된 후 zebrafish에서 뇌 심실 인플레이션은 약 18 시간 게시물 수정을 (hpf)에서 시작됩니다. 여러 프로세스가 neuroepithelium 형성, 투자율 및 CSF의 생산을 조절 긴밀한 접합 형성 등의 뇌 뇌실 형성와 연결되어 있습니다. 우리는이 모든 과정에 영향을 미치는, 오세영가 K-ATPase는 뇌 심실 인플레이션 필요하다고 보여claudin의 5A 꼭 접합부 형성 9 필요한 반면 에스 7,8. 또한, 우리는 마이 오신의 억제를 통해 배아 neuroepithelium의 &quot;휴식&quot;을 보여 뇌 심실 인플레이션과 연결되어 있습니다. zebrafish의 뇌 심실 인플레이션 동안 투자율의 규정을 조사하기 위해, 우리는 심실 염료 유지 분석을 개발했습니다. 이 방법은 휘황 중추 신경계에 라벨을, 거실 zebrafish의 배아, 이전에 우리 연구소 10 개발 기술에 뇌 뇌실 주입을 사용합니다. 태아는 다음 뇌 심실과 neuroepithelium을 통해 형광 염료 이동으로 시간이 지남에 따라 이미징 있습니다. 거리 염료 전면 정량 멀리 시간이 지남에 따라 neuroepithelium의 기초 (비 luminal) 측에서 이동하고 neuroepithelial 투자율의 측정 (그림 1)입니다. 우리는 염료 70 kDa과 작은이 neuroepithelium을 통해 이동한다는 관찰하고 detecte 할 수 있습니다24 hpf (그림 2)에서 배아 zebrafish의 뇌 이외의 D. 이 염료 유지 분석은 개발 기간 동안 다른 시간에 서로 다른 유전 배경을 다양한 neuroepithelial 투자율을 분석하는 데 사용, 환경 섭동 후 할 수 있습니다. 또한 CSF의 병적 인 축적을 조사에 유용 할 수 있습니다. 전반적으로,이 기법은 수사관 개발과 질병 중 투자율의 역할과 규정을 분석 할 수 있습니다.

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An Assay for Permeability of the Zebrafish Embryonic Neuroepithelium

우리는 배아 zebrafish의 뇌의 투자율의 라이브 전체 동물 양적 측정을 설명합니다. 기술은 신경 튜브 내강 내에서 서로 다른 분자 무게의 중추 신경계와 분자를 보유 할 수있는 능력을 분석하고 심실의 움직임을 단정 지을. 이 방법은 개발과 질병 중 상피 투자율과 성숙의 차이를 결정하는 데 유용합니다.

Zebrafish 배아 Neuroepithelium의 투과율에 대한 분석

The brain ventricular system is conserved among vertebrates and is composed of a series of interconnected cavities called brain ventricles, which form ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Neurosphere 분석을 사용하여 마우스 배아 신경 줄기 세포 문화 구축

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

연구

신경과학

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Neuroblast 분석 : 유동세포계측법을 사용하여 차별화 신경 줄기 세포에서 자손의 연결 전구 세포의 생성과 강화에 대한 분석

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

개발 Neuroepithelium의 세포 문제의 고해상도 라이브 영상

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Manual Drainage of the Zebrafish Embryonic Brain Ventricles

Zebrafish 배아 뇌 심실의 수동 배수

Cerebrospinal fluid  (CSF) is a protein rich fluid contained within the brain ventricles. It is  present during early vertebrate embryonic development and ...

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

생체 마우스 Neuroepithelium에서 단일 세포 분열의 라이브 영상

We developed a system that integrates live imaging of fluorescent markers and culturing slices of embryonic mouse neuroepithelium. We took advantage of ...

Patch Clamp Recordings from Embryonic Zebrafish Mauthner Cells

배아 Zebrafish의 MAUTHNER 세포에서 패치 클램프 녹음

Mauthner cells (M-cells) are large  reticulospinal neurons located in the hindbrain of teleost fish. They are key  neurons involved in a characteristic ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

개발 마우스 배아의 피질 유사 분열의 라이브 영상

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

본래 Neuroepithelium에서 마우스 강한 감각 뉴런의 천공 패치 클램프 녹음 : 확인 된 부 취제 수용체를 발현 뉴런의 기능 분석

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

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의 로코 속도에 에탄올의 효과를 측정하는 분석<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

의 기록 세포 내 전압 응답에 대한 전기 생리 방법<em&gt; 초파리</em&gt; 빛 자극에 광수와의 interneurons<em&gt; 생체</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...