Name: exploring arterial smooth muscle kv7 potassium channel function using patch clamp electrophysiology and pressure myography
Uploaded: 2012-09-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من خلال منحة من القلب والرئة والدم المعهد (NIH-R01 HL089564) لKLB وقبل الدكتوراه المنح الدراسية من جمعية القلب الأمريكية (09PRE2260209) وآرثر لمؤسسة J. شميت BKM.

1. جراحية استئصال الأمعاء الصغيرة مساريقي مركز الألعاب الأوعية الدموية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير ل300-400 ز سبراغ داولي الفئران مع isoflurane (4٪) تدار عن طريق الإستنشاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء البطن خط الوسط لفضح مساريق الصغيرة الأمعا?...

<ol>
	<li>Passmore, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KCNQ/M+Currents+in+Sensory+Neurons:+Significance+for+Pain+Therapy.">KCNQ/M Currents in Sensory Neurons: Significance for Pain Therapy.</a> J. Neurosci. 23, 7227-7236 (2003).</li><li>Falloon, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+small+artery+sensitivity+and+morphology+in+pressurized+and+wire-mounted+preparations.">Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparations.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 268, H670-H678 (1995).</li><li>Dunn, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+resistance+artery+sensitivity+to+agonists+under+isobaric+compared+with+isometric+conditions.">Enhanced resistance artery sensitivity to agonists under isobaric compared with isometric conditions.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 266, H147-H155 (1994).</li><li>Buus, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+sensitivity+of+rat+mesenteric+small+arteries+to+agonists+when+studied+as+ring+preparations+or+as+cannulated+preparations.">Differences in sensitivity of rat mesenteric small arteries to agonists when studied as ring preparations or as cannulated preparations.</a> Br. J. Pharmacol. 112, 579-587 (1994).</li><li>Abdelhalim, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+big+endothelin-1+in+comparison+with+endothelin-1+on+the+microvascular+blood+flow+velocity+and+diameter+of+rat+mesentery+in+vivo.">Effects of big endothelin-1 in comparison with endothelin-1 on the microvascular blood flow velocity and diameter of rat mesentery in vivo.</a> Microvasc. Res. 72, 108-112 (2006).</li><li>Altura, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-response+relationships+for+arginine+vasopressin+and+synthetic+analogs+on+three+types+of+rat+blood+vessels:+possible+evidence+for+regional+differences+in+vasopressin+receptor+sites+within+a+mammal.">Dose-response relationships for arginine vasopressin and synthetic analogs on three types of rat blood vessels: possible evidence for regional differences in vasopressin receptor sites within a mammal.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 193, 413-423 (1975).</li><li>Henderson, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin-induced+vasoconstriction:+two+concentration-dependent+signaling+pathways.">Vasopressin-induced vasoconstriction: two concentration-dependent signaling pathways.</a> J. Appl. Physiol. 102, 1402-1409 (2007).</li><li>Mackie, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+KCNQ+potassium+channels+as+novel+targets+for+the+control+of+mesenteric+artery+constriction+by+vasopressin,+based+on+studies+in+single+cells,+pressurized+arteries,+and+in+vivo+measurements+of+mesenteric+vascular+resistance.">Vascular KCNQ potassium channels as novel targets for the control of mesenteric artery constriction by vasopressin, based on studies in single cells, pressurized arteries, and in vivo measurements of mesenteric vascular resistance.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 325, 475-483 (2008).</li><li>Brueggemann, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+selective+cyclooxygenase-2+inhibitors+on+vascular+smooth+muscle+ion+channels+may+account+for+differences+in+cardiovascular+risk+profiles.">Differential effects of selective cyclooxygenase-2 inhibitors on vascular smooth muscle ion channels may account for differences in cardiovascular risk profiles.</a> Mol. Pharmacol. 76, 1053-1061 (2009).</li><li>Brueggemann, L. I., Kaneez, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Patch Clamp Technique. , (2012).</li><li>Berra-Romani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TTX-sensitive+voltage-gated+Na++channels+are+expressed+in+mesenteric+artery+smooth+muscle+cells.">TTX-sensitive voltage-gated Na+ channels are expressed in mesenteric artery smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, H137-H145 (2005).</li></ol>

الأساليب والنهج التجريبي الموصوفة هنا هي قوية جدا ويمكن أن تسفر عن نتائج واضحة وقابلة للتكرار عندما يطبق مع الاهتمام بالتفاصيل الدقيقة. التسجيلات الكهربية جيدة وانقباض / تمدد الشرايين قطاعات تعتمد على صحة الخلايا وشرائح الشريان، على التوالي. يمكن الاستعدادات الخلي...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> سيجما </td><td> S5886 </td><td> تشريح الحل: 145 الحل نوم للالكهربية *: 140 الداخلية الكهربية حل ل: 10 الحل العزلة عن myocytes *: 140 الحل لتخطيط العضل حمام الضغط: 145 الحل لتخطيط العضل ضغط التجويف: 145 </td></tr><tr><td> البوتاسيوم كلوريد </td><td> سيجما </td><td> P5405 </td><td> تشريح الحل: 4.7 الحل نوم للالكهربية *: 5،36 الداخلية الكهربية حل ل: 135 الحل العزلة عن myocytes *: 5،36 الحل لتخطيط العضل حمام الضغط: 4.7 الحل لتخطيط العضل ضغط التجويف: 4.7 </td></tr><tr><td> البوتاسيوم EGTA </td><td> سيجما </td><td> E4378 </td><td> الداخلية حل لالكهربية: 0.05 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> سيجما </td><td> H9136 </td><td> الحل نوم للالكهربية *: 10 الداخلية الكهربية حل ل: 10 الحل العزلة عن myocytes *: 10 </td></tr><tr><td> الصوديوم الهيدروجين الفوسفات </td><td> سيجما </td><td> S5136 </td><td> الحل العزلة عن myocytes *: 0.34 </td></tr><tr><td> البوتاسيوم الهيدروجين الفوسفات </td><td> سيجما </td><td> P5655 </td><td> الحل العزلة عن myocytes *: 0.44 </td></tr><tr><td> المغنيسيوم كلوريد </td><td> سيجما </td><td> M2393 </td><td> الحل نوم للالكهربية *: 1.2 الداخلية حل لالكهربية: 1 الحل العزلة عن myocytes *: 1.2 </td></tr><tr><td> كلوريد الكالسيوم </td><td> سيجما </td><tد&gt; C7902 </td><td> الحل نوم للالكهربية *: 2 الحل العزلة عن myocytes *: 0.05 </td></tr><tr><td> فوسفات الصوديوم </td><td> فيشر العلمية </td><td> BP331-1 </td><td> تشريح الحل: 1.2 الحل لتخطيط العضل حمام الضغط: 1.2 الحل لتخطيط العضل ضغط التجويف: 1.2 </td></tr><tr><td> كبريتات المغنيسيوم </td><td> سيجما </td><td> M2643 </td><td> تشريح الحل: 1.17 الحل لتخطيط العضل حمام الضغط: 1.17 الحل لتخطيط العضل ضغط التجويف: 1.17 </td></tr><tr><td> اجتماعات الأطراف </td><td> فيشر العلمية </td><td> BP308 </td><td> تشريح الحل: 3 الحل لتخطيط العضل الضغط حمام: 3 الحل لتخطيط العضل ضغط التجويف: 3 </td></tr><tr><td> حمض البيروفيك </td><td> سيجما </td><td> P4562 </td><td> تشريح الحل: 2 الحل نوم للتخطيط العضل الضغط: 2 الحل لتخطيط العضل ضغط التجويف: 2 </td></tr><tr><td> EDTA ثنائي الماء </td><td> البحث العضوية </td><td> 9572E </td><td> تشريح الحل: 0.02 الحل لتخطيط العضل حمام الضغط: 0.02 الحل لتخطيط العضل ضغط التجويف: 0.02 </td></tr><tr><td> D-غلوكوز </td><td> سيجما </td><td> G7021 </td><td> تشريح الحل: 5 الحل نوم للالكهربية *: 10 الداخلية الكهربية حل ل: 20 الحل العزلة عن myocytes *: 10 الحل لتخطيط العضل الضغط حمام: 5 الحل لتخطيط العضل ضغط التجويف: 5 </td></tr><tr><td> الأبقار مصل الزلال </td><td> سيجما </td><td> A3912 </td><td> تشريح الحل: 1٪ التجويف حل لتخطيط العضل الضغط: 1٪ </td></tr><tr><td> درجة الحموضة </td><td></td><td></td><td> تشريح محلولن: 7.4 الحل نوم للالكهربية *: 7.3 الداخلية حل لالكهربية: 7.2 الحل العزلة عن myocytes *: 7.2 الحل لتخطيط العضل حمام الضغط: 7.4 الحل لتخطيط العضل ضغط التجويف: 7.4 </td></tr><tr><td> الأسمولية </td><td></td><td></td><td> تشريح الحل: 300 الحل نوم للالكهربية *: 298 الداخلية الكهربية حل ل: 298 الحل العزلة عن myocytes *: 298 الحل لتخطيط العضل حمام الضغط: 300 الحل لتخطيط العضل ضغط التجويف: 300 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> * 11 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> الجدول 1. مكونات الحلول المستخدمة في التجربة. </td></tr></tbody></table>

exploring arterial smooth muscle kv7 potassium channel function using patch clamp electrophysiology and pressure myography

انكماش أو التخفيف من خلايا العضلات الملساء في جدران الشرايين المقاومة يحدد قطر الشريان وبالتالي تسيطر على تدفق الدم عبر الأوعية ويساهم في ضغط الدم النظامية. وينظم عملية انكماش في المقام الأول تركيز الكالسيوم عصاري خلوي ([CA 2 +] CYT)، والذي هو بدوره يسيطر عليها مجموعة متنوعة من نقل أيون والقنوات. القنوات الأيونية هي وسيطة مشتركة في مسارات نقل الإشارة تفعيلها من خلال الهرمونات فعال في الأوعية تضيق الأوعية أو لإحداث توسع الأوعية. وغالبا ما يتم استهداف القنوات الأيونية من العوامل العلاجية عمدا إما (مثل حاصرات قنوات الكالسيوم تستخدم للحث على توسع الأوعية وانخفاض ضغط الدم) أو عن غير قصد (مثل للحث على غير المرغوب فيه الآثار الجانبية القلبية الوعائية). وقد تم مؤخرا Kv7 (KCNQ) قنوات البوتاسيوم الجهد تنشيط تورط بأنها مهمة targ الفسيولوجية والعلاجيةETS لتنظيم تقلص العضلات الملساء. لتوضيح أدوار محددة من Kv7 القنوات في كل من نقل الإشارة والفسيولوجية في أعمال العوامل العلاجية، ونحن بحاجة لدراسة كيفية نشاطهم هو التضمين على المستوى الخلوي، فضلا عن مساهمتها تقييم في سياق الشريان سليمة. الشرايين المساريقي الفئران توفير نظام نموذجا مفيدا. ويمكن الشرايين تشريح بسهولة، وتنظيفها من النسيج الضام، وتستخدم لإعداد myocytes الشرايين معزولة عن التصحيح المشبك الكهربية، أو مقنى وضغط لقياسات مضيق للأوعية / عائي الردود في ظل الظروف الفسيولوجية نسبيا. نحن هنا تصف الأساليب المستخدمة لكلا النوعين من القياسات وتقديم بعض الأمثلة للكيفية التي يمكن أن تكون متكاملة في التصميم التجريبي لتوفير فهم أوضح للأدوار هذه القنوات الأيونية في تنظيم نغمة الأوعية الدموية.

Watch this Scientific Journal Video about Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography at JoVE.com

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

يمكن قياس Kv7 (KCNQ) البوتاسيوم في النشاط قناة myocytes الشرايين معزولة (باستخدام تقنيات التصحيح المشبك الكهربية) بالتوازي مع قياسات المضيقة / موسع الردود (باستخدام تخطيط العضل الضغط) يكشف عن معلومات مهمة حول دور كل من القنوات في الأوعية الدموية Kv7 علم وظائف الأعضاء والعضلات الملساء علم الصيدلة.

استكشاف الشرياني العضلات الملساء قناة البوتاسيوم Kv7 الدالة باستخدام المشبك التصحيح الكهربية وتخطيط العضل الضغط

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

أساليب لتصحيح تسجيلات السعة المشبك من كاليكس

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

التصحيح تسجيل المشبك من القنوات ايون معبرا عنه البويضات القيطم

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

الضغط تلميع الماصات لتسجيل باتش تحسين المشبك

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

تنسيق كا 2 + الكشف العابر في العضلات الملساء

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ ...

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC

عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

إعداد الحويصلية عملاق التصوير والتصحيح، المشبك الكهربية

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

تقييم الشريان المقاومة الفئران وظيفة عن طريق الضغط تخطيط العضل

Pressure myograph systems are  exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized  to a suitable transmural pressure. The  ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

قناة واحدة الخلية المرفقة تسجيل التصحيح، المشبك

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

Reconstitution of a Transmembrane Protein, the Voltage-gated Ion Channel, KvAP, into Giant Unilamellar Vesicles for Microscopy and Patch Clamp Studies

إعادة تشكيل البروتين عبر الغشاء، وايون القناة بوابات الجهد، KvAP، إلى العملاق Unilamellar الحويصلات للفحص المجهري وتصحيح الدراسات المشبك

Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) are a popular biomimetic system for studying membrane associated phenomena. However, commonly used protocols to grow ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

قياس السلس وظيفة العضلات في الأنسجة المعزولة حمام تطبيقات لأبحاث الصيدلة

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...