Name: exploring arterial smooth muscle kv7 potassium channel function using patch clamp electrophysiology and pressure myography
Uploaded: 2012-09-14T13:00:00
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この作品は、アメリカ心臓協会（09PRE2260209）とBKMへアーサー·J·シュミット財団からの国立心臓、肺、血液研究所（NIH R01-HL089564）からKLBと事前博士フェローシップの助成金によって賄われていた。

1。小腸腸間膜血管アーケードの外科的切除<ol><li>吸入によって投与イソフルランで300〜400グラムのSprague-Dawleyラット（4％）を麻酔。 </li><li>小腸腸間膜を露出させるために正中開腹術を行います。露出した腸と腸間膜への外傷を避けるために細心の注意を払って腹部を切開して、小腸および大腸を体外に出す。優しく滅菌ガーゼの上腸間膜をファンアウト。 </li><li>外科的に小腸と盲腸（血?...

<ol>
	<li>Passmore, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KCNQ/M+Currents+in+Sensory+Neurons:+Significance+for+Pain+Therapy.">KCNQ/M Currents in Sensory Neurons: Significance for Pain Therapy.</a> J. Neurosci. 23, 7227-7236 (2003).</li><li>Falloon, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+small+artery+sensitivity+and+morphology+in+pressurized+and+wire-mounted+preparations.">Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparations.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 268, H670-H678 (1995).</li><li>Dunn, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+resistance+artery+sensitivity+to+agonists+under+isobaric+compared+with+isometric+conditions.">Enhanced resistance artery sensitivity to agonists under isobaric compared with isometric conditions.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 266, H147-H155 (1994).</li><li>Buus, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+sensitivity+of+rat+mesenteric+small+arteries+to+agonists+when+studied+as+ring+preparations+or+as+cannulated+preparations.">Differences in sensitivity of rat mesenteric small arteries to agonists when studied as ring preparations or as cannulated preparations.</a> Br. J. Pharmacol. 112, 579-587 (1994).</li><li>Abdelhalim, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+big+endothelin-1+in+comparison+with+endothelin-1+on+the+microvascular+blood+flow+velocity+and+diameter+of+rat+mesentery+in+vivo.">Effects of big endothelin-1 in comparison with endothelin-1 on the microvascular blood flow velocity and diameter of rat mesentery in vivo.</a> Microvasc. Res. 72, 108-112 (2006).</li><li>Altura, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-response+relationships+for+arginine+vasopressin+and+synthetic+analogs+on+three+types+of+rat+blood+vessels:+possible+evidence+for+regional+differences+in+vasopressin+receptor+sites+within+a+mammal.">Dose-response relationships for arginine vasopressin and synthetic analogs on three types of rat blood vessels: possible evidence for regional differences in vasopressin receptor sites within a mammal.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 193, 413-423 (1975).</li><li>Henderson, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin-induced+vasoconstriction:+two+concentration-dependent+signaling+pathways.">Vasopressin-induced vasoconstriction: two concentration-dependent signaling pathways.</a> J. Appl. Physiol. 102, 1402-1409 (2007).</li><li>Mackie, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+KCNQ+potassium+channels+as+novel+targets+for+the+control+of+mesenteric+artery+constriction+by+vasopressin,+based+on+studies+in+single+cells,+pressurized+arteries,+and+in+vivo+measurements+of+mesenteric+vascular+resistance.">Vascular KCNQ potassium channels as novel targets for the control of mesenteric artery constriction by vasopressin, based on studies in single cells, pressurized arteries, and in vivo measurements of mesenteric vascular resistance.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 325, 475-483 (2008).</li><li>Brueggemann, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+selective+cyclooxygenase-2+inhibitors+on+vascular+smooth+muscle+ion+channels+may+account+for+differences+in+cardiovascular+risk+profiles.">Differential effects of selective cyclooxygenase-2 inhibitors on vascular smooth muscle ion channels may account for differences in cardiovascular risk profiles.</a> Mol. Pharmacol. 76, 1053-1061 (2009).</li><li>Brueggemann, L. I., Kaneez, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Patch Clamp Technique. , (2012).</li><li>Berra-Romani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TTX-sensitive+voltage-gated+Na++channels+are+expressed+in+mesenteric+artery+smooth+muscle+cells.">TTX-sensitive voltage-gated Na+ channels are expressed in mesenteric artery smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, H137-H145 (2005).</li></ol>

ここに記載される方法および実験的アプローチが非常に強固であり、細部にまで細心の注意を払って適用されたときに明確かつ再現性のある結果を生成することができます。良い電気生理学的記録及び狭窄/動脈セグメントの拡張は、それぞれ細胞と動脈セグメントの健康に依存しています。細胞調製も同じプロトコルを使用して、日ごとに変化することができる。アイソレーションソリュー...

<table border="1"><tbody><tr><td> 名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td>注釈</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>シグマ</td><td> S5886 </td><td>解剖ソリューション：145 電気生理学のための浴溶液*：140 電気生理学のための内部溶液：10 筋細胞用アイソレーション·ソリューション*：140 圧力筋運動記録法のための浴溶液：145 圧力筋運動記録法のルーメン液：145 </td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>シグマ</td><td> P5405 </td><td>解剖ソリューション：4.7 電気生理学のための浴溶液*：5.36 電気生理学のための内部溶液：135 筋細胞用アイソレーション·ソリューション*：5.36 圧力筋運動記録法のための浴溶液：4.7 圧力筋運動記録法のルーメン液：4.7 </td></tr><tr><td>カリウムのEGTA </td><td>シグマ</td><td> E4378 </td><td>電気生理学のための内部溶液：0.05 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td>シグマ</td><td> H9136 </td><td>電気生理学のための浴溶液*：10 電気生理学のための内部溶液：10 筋細胞用アイソレーション·ソリューション*：10 </td></tr><tr><td>リン酸水素二ナトリウム</td><td>シグマ</td><td> S5136 </td><td>筋細胞用アイソレーション·ソリューション*：0.34 </td></tr><tr><td>リン酸水素カリウム</td><td>シグマ</td><td> P5655 </td><td>筋細胞用アイソレーション·ソリューション*：0.44 </td></tr><tr><td>塩化マグネシウム</td><td>シグマ</td><td> M2393 </td><td>電気生理学のための浴溶液*：1.2 電気生理学のための内部溶液：1 筋細胞用アイソレーション·ソリューション*：1.2 </td></tr><tr><td>塩化カルシウム</td><td>シグマ</td><tD&gt; C7902 </td><td>電気生理学のための浴溶液*：2 筋細胞用アイソレーション·ソリューション*：0.05 </td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> BP331-1 </td><td>解剖ソリューション：1.2 圧力筋運動記録法のための浴溶液：1.2 圧力筋運動記録法のルーメン液：1.2 </td></tr><tr><td>硫酸マグネシウム</td><td>シグマ</td><td> M2643 </td><td>解剖ソリューション：1.17 圧力筋運動記録法のための浴溶液：1.17 圧力筋運動記録法のルーメン液：1.17 </td></tr><tr><td> MOPS </td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> BP308 </td><td>解剖ソリューション：3 圧力筋運動記録法のための浴溶液：3 圧力筋運動記録法のルーメン液：3 </td></tr><tr><td>ピルビン酸</td><td>シグマ</td><td> P4562 </td><td> 2：ソリューションを解剖する 用浴溶液圧力筋運動記録法：2 圧力筋運動記録法のルーメン液：2 </td></tr><tr><td> EDTA二水和物</td><td>リサーチ·オーガニック</td><td> 9572E </td><td>解剖ソリューション：0.02 圧力筋運動記録法のための浴溶液：0.02 圧力筋運動記録法のルーメン液：0.02 </td></tr><tr><td> D-グルコース</td><td>シグマ</td><td> G7021 </td><td>解剖ソリューション：5 電気生理学のための浴溶液*：10 電気生理学のための内部溶液：20 筋細胞用アイソレーション·ソリューション*：10 圧力筋運動記録法のための浴溶液：5 圧力筋運動記録法のルーメン液：5 </td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>シグマ</td><td> A3912 </td><td>解剖解決策：1％ 圧力筋運動記録法のルーメン液：1％ </td></tr><tr><td> pHは</td><td></td><td></td><td> Solutioを解剖するN：7.4 電気生理学のための浴溶液*：7.3 電気生理学用の内部液：7.2 筋細胞用アイソレーション·ソリューション*：7.2 圧力筋運動記録法のための浴溶液：7.4 圧力筋運動記録法のルーメン液：7.4 </td></tr><tr><td>オスモル濃度</td><td></td><td></td><td>解剖ソリューション：300 電気生理学のための浴溶液*：298 電気生理学用の内部液：298 筋細胞用アイソレーション·ソリューション*：298 圧力筋運動記録法のための浴溶液：300 圧力筋運動記録法のルーメン液：300 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> * 11 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 表1実験に用いたソリューションのコンポーネント。 </td></tr></tbody></table>

exploring arterial smooth muscle kv7 potassium channel function using patch clamp electrophysiology and pressure myography

抵抗動脈の壁内の平滑筋細胞の収縮や弛緩が動脈径を決定して、それによって血管を通る血液の流れを制御し、全身血圧に貢献しています。収縮過程は主に順番にイオントランスポーターやチャネルの多様によって制御され細胞質カルシウム濃度（[Ca 2 +] cytの）によって規制されています。イオンチャネルは、血管収縮または血管拡張をもたらすために血管作動性ホルモンによって活性化されるシグナル伝達経路における共通の中間体である。とイオンチャネルはしばしば故意治療薬または意図せずに（不要な心血管系の副作用を誘発するなど ）（ 例えば 、カルシウムチャネル遮断薬は血管拡張と低血圧を誘発するために使用）が対象とされています。 KV7（KCNQ）電圧活性化カリウムチャネルは、最近の重要な生理学的および治療ターグとして関与している平滑筋収縮を調節するためのETS。両方の生理学的信号伝達において、治療薬の作用でKV7チャネルの特定の役割を解明するために、我々は、彼らの活動をそのまま動脈のコンテキストでの貢献を評価するだけでなく、細胞レベルで変調されているかを研究する必要があります。 ラット腸間膜動脈は、有用なモデル系を提供する。動脈は簡単に、解剖し、結合組織を除去し、パッチクランプ電気生理学のために隔離動脈筋細胞を調製するために使用される、またはカニューレを挿入し、相対的に生理的条件下での血管収縮剤/血管拡張反応の測定に加圧することができる。ここでは、測定値の両方のタイプのために使用するメソッドを記述し、実験的なデザインは血管緊張の調節におけるこれらのイオンチャネルの役割の明確な理解を提供するために統合することができる方法のいくつかの例を提供します。

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Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

収縮/拡張器応答の測定と並行して孤立した動脈筋細胞（電気生理学的手法をクランプするパッチを使用）（圧力筋運動記録法を用いて）でKV7（KCNQ）カリウムチャネル活性の測定は、血管平滑筋生理学でKV7チャネルの役割に関する重要な情報を明らかにすることができますし、薬理学。

パッチクランプ電気生理学および圧力筋運動記録法を用いた動脈平滑筋KV7カリウムチャネル機能を探る

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

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改善されたパッチクランプ記録のための圧力 - 研磨ピペット

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焦点のCa 2 +</sup平滑筋の>過渡検出

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Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

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ヒト臍帯動脈平滑筋細胞の単離（HUASMC）

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