Name: exploring arterial smooth muscle kv7 potassium channel function using patch clamp electrophysiology and pressure myography
Uploaded: 2012-09-14T13:00:00
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이 작품은 KLB와 미국 심장 협회 (09PRE2260209)와 BKM에 아서 J. 슈미트 재단의 사전 박사 장학금으로 국립 심장, 폐, 및 혈액 연구소 (NIH R01-HL089564)의 교부금으로 운용되었다.

1. 작은 창자 장간막 혈관 아케이드의 외과 절단 <ol><li> 흡입에 의해 관리 isoflurane과 300-400g Sprague-Dawley 쥐 (4 %)를 마취. </li><li> 작은 창자 장간막을 표시 할 수있는 중간 선 개복술을 수행합니다. 노출 된 장과 장간막에 외상을 방지하기 위해 세심한주의와 복부 절개를 통해 크고 작은 창자를 외면 화하다. 부드럽게 멸균 거즈 위에 장간막을 좋아합니다. </li><li> 수술 절제 맹장 (주의 여백을 따라 ?...

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	<li>Passmore, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KCNQ/M+Currents+in+Sensory+Neurons:+Significance+for+Pain+Therapy.">KCNQ/M Currents in Sensory Neurons: Significance for Pain Therapy.</a> J. Neurosci. 23, 7227-7236 (2003).</li><li>Falloon, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+small+artery+sensitivity+and+morphology+in+pressurized+and+wire-mounted+preparations.">Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparations.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 268, H670-H678 (1995).</li><li>Dunn, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+resistance+artery+sensitivity+to+agonists+under+isobaric+compared+with+isometric+conditions.">Enhanced resistance artery sensitivity to agonists under isobaric compared with isometric conditions.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 266, H147-H155 (1994).</li><li>Buus, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+sensitivity+of+rat+mesenteric+small+arteries+to+agonists+when+studied+as+ring+preparations+or+as+cannulated+preparations.">Differences in sensitivity of rat mesenteric small arteries to agonists when studied as ring preparations or as cannulated preparations.</a> Br. J. Pharmacol. 112, 579-587 (1994).</li><li>Abdelhalim, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+big+endothelin-1+in+comparison+with+endothelin-1+on+the+microvascular+blood+flow+velocity+and+diameter+of+rat+mesentery+in+vivo.">Effects of big endothelin-1 in comparison with endothelin-1 on the microvascular blood flow velocity and diameter of rat mesentery in vivo.</a> Microvasc. Res. 72, 108-112 (2006).</li><li>Altura, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-response+relationships+for+arginine+vasopressin+and+synthetic+analogs+on+three+types+of+rat+blood+vessels:+possible+evidence+for+regional+differences+in+vasopressin+receptor+sites+within+a+mammal.">Dose-response relationships for arginine vasopressin and synthetic analogs on three types of rat blood vessels: possible evidence for regional differences in vasopressin receptor sites within a mammal.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 193, 413-423 (1975).</li><li>Henderson, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin-induced+vasoconstriction:+two+concentration-dependent+signaling+pathways.">Vasopressin-induced vasoconstriction: two concentration-dependent signaling pathways.</a> J. Appl. Physiol. 102, 1402-1409 (2007).</li><li>Mackie, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+KCNQ+potassium+channels+as+novel+targets+for+the+control+of+mesenteric+artery+constriction+by+vasopressin,+based+on+studies+in+single+cells,+pressurized+arteries,+and+in+vivo+measurements+of+mesenteric+vascular+resistance.">Vascular KCNQ potassium channels as novel targets for the control of mesenteric artery constriction by vasopressin, based on studies in single cells, pressurized arteries, and in vivo measurements of mesenteric vascular resistance.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 325, 475-483 (2008).</li><li>Brueggemann, L. 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여기에서 설명한 방법과 실험 방법은 아주 강력하고 세부 사항에 세심한주의를 적용 할 경우 명확하고 재현 결과를 생성 할 수 있습니다. 좋은 electrophysiological 레코딩 및 수축 / 동맥 세그먼트의 팽창은 각각 셀 및 동맥 세그먼트의 건강에 따라 달라집니다. 셀 준비는 동일한 프로토콜을 사용하여, 날마다 다를 수 있습니다. 절연 솔루션은 최대 2 주까지 사용할 수 있지만 셀 준비의 품질은 두 결과...

<table border="1"><tbody><tr><td> 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> 나트륨 염화물 </td><td> 시그마 </td><td> S5886 </td><td> 해부 솔루션 : 145 전기 생리학에 대한 목욕 솔루션 * : 140 전기 생리학에 대한 내부 솔루션 : 10 근세포에 대한 절연 솔루션 * : 140 압력 myography을위한 목욕 솔루션 : 145 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 145 </td></tr><tr><td> 염화칼륨 </td><td> 시그마 </td><td> P5405 </td><td> 해부 솔루션 : 4.7 전기 생리학에 대한 목욕 솔루션 * : 5.36 전기 생리학에 대한 내부 솔루션 : 135 근세포에 대한 절연 솔루션 * : 5.36 압력 myography을위한 목욕 솔루션 : 4.7 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 4.7 </td></tr><tr><td> 칼륨 EGTA </td><td> 시그마 </td><td> E4378 </td><td> 전기 생리학에 대한 내부 솔루션 : 0.05 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 시그마 </td><td> H9136 </td><td> 전기 생리학에 대한 목욕 솔루션 * : 10 전기 생리학에 대한 내부 솔루션 : 10 근세포에 대한 절연 솔루션 * : 10 </td></tr><tr><td> 나트륨 수소 인산염 </td><td> 시그마 </td><td> S5136 </td><td> 근세포에 대한 절연 솔루션 * : 0.34 </td></tr><tr><td> 칼륨 수소 인산 </td><td> 시그마 </td><td> P5655 </td><td> 근세포에 대한 절연 솔루션 * : 0.44 </td></tr><tr><td> 염화 마그네슘 </td><td> 시그마 </td><td> M2393 </td><td> 전기 생리학에 대한 목욕 솔루션 * : 1.2 전기 생리학에 대한 내부 솔루션 : 1 근세포에 대한 절연 솔루션 * : 1.2 </td></tr><tr><td> 칼슘 염화물 </td><td> 시그마 </td><tD&gt; C7902 </td><td> 전기 생리학에 대한 목욕 솔루션 * : 2 근세포에 대한 절연 솔루션 * : 0.05 </td></tr><tr><td> 인산 나트륨 </td><td> 피셔 과학 </td><td> BP331-1 </td><td> 해부 솔루션 : 1.2 압력 myography을위한 목욕 솔루션 : 1.2 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 1.2 </td></tr><tr><td> 황산 마그네슘 </td><td> 시그마 </td><td> M2643 </td><td> 해부 솔루션 : 1.17 압력 myography을위한 목욕 솔루션 : 1.17 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 1.17 </td></tr><tr><td> 걸레 </td><td> 피셔 과학 </td><td> BP308 </td><td> 해부 솔루션 : 3 압력 myography을위한 목욕 솔루션 : 3 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 3 </td></tr><tr><td> Pyruvic 산 </td><td> 시그마 </td><td> P4562 </td><td> 해부 솔루션 : 2 에 대한 목욕 솔루션압력 myography : 2 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 2 </td></tr><tr><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 이수화 </td><td> 연구 유기물 </td><td> 9572E </td><td> 해부 솔루션 : 0.02 압력 myography을위한 목욕 솔루션 : 0.02 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 0.02 </td></tr><tr><td> D-포도당 </td><td> 시그마 </td><td> G7021 </td><td> 해부 솔루션 : 5 전기 생리학에 대한 목욕 솔루션 * : 10 전기 생리학에 대한 내부 솔루션 : 20 근세포에 대한 절연 솔루션 * : 10 압력 myography을위한 목욕 솔루션 : 5 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 5 </td></tr><tr><td> 소 혈청 알부민 </td><td> 시그마 </td><td> A3912 </td><td> 해부 솔루션 : 1 % 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 1 % </td></tr><tr><td> 피에이치 </td><td></td><td></td><td> Solutio을 해부N : 7.4 전기 생리학에 대한 목욕 솔루션 * : 7.3 전기 생리학에 대한 내부 솔루션 : 7.2 근세포에 대한 절연 솔루션 * : 7.2 압력 myography을위한 목욕 솔루션 : 7.4 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 7.4 </td></tr><tr><td> Osmolarity </td><td></td><td></td><td> 해부 솔루션 : 300 전기 생리학에 대한 목욕 솔루션 * : 298 전기 생리학에 대한 내부 솔루션 : 298 근세포에 대한 절연 솔루션 * : 298 압력 myography을위한 목욕 솔루션 : 300 압력 myography에 대한 루멘 솔루션 : 300 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> * 11 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 표 1. 실험에 사용되는 솔루션의 구성 요소. </td></tr></tbody></table>

exploring arterial smooth muscle kv7 potassium channel function using patch clamp electrophysiology and pressure myography

저항 동맥의 벽 내의 평활근 세포의 수축이나 이완이 동맥 직경을 결정함으로써 혈관을 혈액의 흐름을 제어하고 조직 혈압에 기여한다. 수축 과정은 주로 이온 수송 및 채널의 다양한 의해 제어 차례에 cytosolic 칼슘 농도 ([칼슘 2 +] cyt)에 의해 조절된다. 이온 채널은 혈관 수축 또는 vasodilation에 영향을 미치도록 vasoactive 호르몬에 의해 활성화 신호 전달 경로의 일반적인 중간체 있습니다. 그리고 이온 채널은 종종 두 의도적으로 치료 대리인 또는 실수 (원치 않는 심장 혈관 부작용을 유발하는 등) (예 : 칼슘 채널 차단제가 vasodilation과 낮은 혈압을 유도하기 위해 사용)에 의해 타겟팅 할 수 있습니다. Kv7 (KCNQ) 전압 활성화 칼륨 채널은 최근에 중요한 생리 및 치료 targ으로 연루되어있다부드러운 근육 수축의 조절을위한 ETS. 생리적 신호 전달 모두와 치료 대리인의 행동에 Kv7 채널의 특정 역할을 명료하게하다하기 위해, 우리는뿐만 아니라 그대로 동​​맥의 맥락에서의 공헌을 평가로서 활동이 세포 수준에서 조절이 얼마나 공부를해야합니다. 쥐 창 자간 막 동맥 유용한 모델 시스템을 제공합니다. 동맥은 쉽게 해부하는 결합 조직의 청소 및 패치 클램프 전기 생리학에 대한 격리 된 동맥 근세포를 준비하는 데 사용하거나, cannulated 상대적으로 생리적 조건 하에서 혈관 수축 제라 / vasodilator 응답 측정을 위해 가압 될 수 있습니다. 여기 측정의 두 가지 유형에 사용되는 방법을 설명하고 실험 디자인 혈관 톤의 규정에 이러한 이온 채널의 역할을 명확하게 이해를 제공하기 위해 통합 될 수있는 방법의 예를 제공합니다.

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Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

압축시키는 것 / 확장시키는 반응 (압력 myography를 사용하여)의 측정 병렬 절연 동맥 근세포 (패치가 el​​ectrophysiological 기술 클램프 사용)에서 Kv7 (KCNQ) 칼륨 채널 활동의 측정은 혈관 평활근의 생리학에 Kv7 채널의 역할에 대한 중요한 정보를 공개 할 수 있습니다 약리학.

패치 클램프 전기 생리학 및 압력 Myography를 사용하여 간선 평활근 Kv7 칼륨 채널 기능을 탐색

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

칼리에서 패치 클램프 커패시턴스 레코딩을위한 방법

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

연구

생물학

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Xenopus Oocytes의 표현 이온 채널 패치 클램프 녹음

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

향상된 패치 - 클램프 녹음 압력 연마 Pipettes

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

초점 칼슘 2 +</sup평활근에서> 과도 감지

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ ...

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC

인간의 탯줄 아티 평활근 세포 절연 (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

이미징 및 패치 클램프 전기 생리학에 대한 거대한 리포좀 준비

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

압력 Myography를 사용 쥐과 저항 동맥의 기능을 평가

Pressure myograph systems are  exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized  to a suitable transmural pressure. The  ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

1 채널의 세포 부착 된 패치 클램프 녹음

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

Reconstitution of a Transmembrane Protein, the Voltage-gated Ion Channel, KvAP, into Giant Unilamellar Vesicles for Microscopy and Patch Clamp Studies

횡단 단백질의 재구성, 현미경 및 패치 클램프 연구 거대한 단일 층 소포에 전압 게이트 이온 채널, KvAP,

Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) are a popular biomimetic system for studying membrane associated phenomena. However, commonly used protocols to grow ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...