Name: exploring arterial smooth muscle kv7 potassium channel function using patch clamp electrophysiology and pressure myography
Uploaded: 2012-09-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography at JoVE.com

Bu çalışma KLB ve Amerikan Kalp Derneği (09PRE2260209) ve BKM Arthur J. Schmitt Vakfı&#39;ndan doktora öncesi burslar için Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü (NIH R01-HL089564) bir hibe ile finanse edildi.

1. Küçük Bağırsak Mezenterik Vasküler Arcade Cerrahi eksizyonu <ol><li> Inhalasyonunun izofluran ile 300-400 g Sprague-Dawley sıçan (% 4) anestetize. </li><li> Ince barsak mezenter göstermek için bir orta hat laparotomi gerçekleştirin. Maruz kalan barsak ve mezenter travma önlemek için büyük özen ile karın kesiden küçük ve kalın bağırsak Exteriorize. Yavaşça steril gazlı bez üzerine mezenter dışarı havalandırın. </li><li> Cerrahi tüketim çekum (dikkatlice kenarları boyunca ve arter ...

<ol>
	<li>Passmore, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KCNQ/M+Currents+in+Sensory+Neurons:+Significance+for+Pain+Therapy.">KCNQ/M Currents in Sensory Neurons: Significance for Pain Therapy.</a> J. Neurosci. 23, 7227-7236 (2003).</li><li>Falloon, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+small+artery+sensitivity+and+morphology+in+pressurized+and+wire-mounted+preparations.">Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparations.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 268, H670-H678 (1995).</li><li>Dunn, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+resistance+artery+sensitivity+to+agonists+under+isobaric+compared+with+isometric+conditions.">Enhanced resistance artery sensitivity to agonists under isobaric compared with isometric conditions.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 266, H147-H155 (1994).</li><li>Buus, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+sensitivity+of+rat+mesenteric+small+arteries+to+agonists+when+studied+as+ring+preparations+or+as+cannulated+preparations.">Differences in sensitivity of rat mesenteric small arteries to agonists when studied as ring preparations or as cannulated preparations.</a> Br. J. Pharmacol. 112, 579-587 (1994).</li><li>Abdelhalim, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+big+endothelin-1+in+comparison+with+endothelin-1+on+the+microvascular+blood+flow+velocity+and+diameter+of+rat+mesentery+in+vivo.">Effects of big endothelin-1 in comparison with endothelin-1 on the microvascular blood flow velocity and diameter of rat mesentery in vivo.</a> Microvasc. Res. 72, 108-112 (2006).</li><li>Altura, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-response+relationships+for+arginine+vasopressin+and+synthetic+analogs+on+three+types+of+rat+blood+vessels:+possible+evidence+for+regional+differences+in+vasopressin+receptor+sites+within+a+mammal.">Dose-response relationships for arginine vasopressin and synthetic analogs on three types of rat blood vessels: possible evidence for regional differences in vasopressin receptor sites within a mammal.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 193, 413-423 (1975).</li><li>Henderson, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin-induced+vasoconstriction:+two+concentration-dependent+signaling+pathways.">Vasopressin-induced vasoconstriction: two concentration-dependent signaling pathways.</a> J. Appl. Physiol. 102, 1402-1409 (2007).</li><li>Mackie, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+KCNQ+potassium+channels+as+novel+targets+for+the+control+of+mesenteric+artery+constriction+by+vasopressin,+based+on+studies+in+single+cells,+pressurized+arteries,+and+in+vivo+measurements+of+mesenteric+vascular+resistance.">Vascular KCNQ potassium channels as novel targets for the control of mesenteric artery constriction by vasopressin, based on studies in single cells, pressurized arteries, and in vivo measurements of mesenteric vascular resistance.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 325, 475-483 (2008).</li><li>Brueggemann, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+selective+cyclooxygenase-2+inhibitors+on+vascular+smooth+muscle+ion+channels+may+account+for+differences+in+cardiovascular+risk+profiles.">Differential effects of selective cyclooxygenase-2 inhibitors on vascular smooth muscle ion channels may account for differences in cardiovascular risk profiles.</a> Mol. Pharmacol. 76, 1053-1061 (2009).</li><li>Brueggemann, L. I., Kaneez, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Patch Clamp Technique. , (2012).</li><li>Berra-Romani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TTX-sensitive+voltage-gated+Na++channels+are+expressed+in+mesenteric+artery+smooth+muscle+cells.">TTX-sensitive voltage-gated Na+ channels are expressed in mesenteric artery smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, H137-H145 (2005).</li></ol>

Burada açıklanan yöntemler ve deneysel yaklaşımlar oldukça sağlam ve titiz ile uygulandığında net ve tekrarlanabilir sonuçlar üretebilir. İyi elektrofizyolojik kayıtlar ve daralma / arterlerin dilatasyon sırasıyla hücreler ve arter segmentinin sağlığına bağlıdır. Hücre hazırlıklar hatta aynı protokolü kullanarak, günden güne değişebilir. İzolasyon Solutions en fazla 2 hafta için kullanılabilir, fakat hücre hazırlama kalitesi iki takip eden günlerde düşük ise yeni izolasyon çöz...

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Sodyum klorür </td><td> Sigma </td><td> S5886 </td><td> Kesme Çözüm: 145 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 140 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 10 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 140 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 145 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 145 </td></tr><tr><td> Potasyum klorür </td><td> Sigma </td><td> P5405 </td><td> Kesme Çözüm: 4.7 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 5.36 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 135 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 5.36 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 4.7 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 4.7 </td></tr><tr><td> Potasyum EGTA </td><td> Sigma </td><td> E4378 </td><td> Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 0.05 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma </td><td> H9136 </td><td> Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 10 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 10 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 10 </td></tr><tr><td> Disodyum hidrojen fosfat </td><td> Sigma </td><td> S5136 </td><td> Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 0.34 </td></tr><tr><td> Potasyum hidrojen fosfat </td><td> Sigma </td><td> P5655 </td><td> Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 0.44 </td></tr><tr><td> Magnezyum Klorür </td><td> Sigma </td><td> M2393 </td><td> Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 1.2 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 1 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 1.2 </td></tr><tr><td> Kalsiyum Klorür </td><td> Sigma </td><td&gt; C7902 </td><td> Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 2 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 0.05 </td></tr><tr><td> Sodyum fosfat </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP331-1 </td><td> Kesme Çözüm: 1.2 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 1.2 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 1.2 </td></tr><tr><td> Magnezyum Sülfat </td><td> Sigma </td><td> M2643 </td><td> Kesme Çözüm: 1.17 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 1.17 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 1.17 </td></tr><tr><td> MOPS </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP308 </td><td> Kesme Çözüm: 3 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 3 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 3 </td></tr><tr><td> Piruvik asit </td><td> Sigma </td><td> P4562 </td><td> Kesme Çözüm: 2 Banyolu çözümbasıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi: 2 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 2 </td></tr><tr><td> EDTA dihidrat </td><td> Araştırma Organics </td><td> 9572E </td><td> Kesme Çözüm: 0.02 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 0.02 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 0.02 </td></tr><tr><td> D-Glikoz </td><td> Sigma </td><td> G7021 </td><td> Kesme Çözüm: 5 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 10 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 20 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 10 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 5 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 5 </td></tr><tr><td> Sığır serum albümini </td><td> Sigma </td><td> A3912 </td><td> Kesme Çözüm: 1% Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 1% </td></tr><tr><td> pH </td><td></td><td></td><td> Eriyik Diseksiyonn: 7.4 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 7.3 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 7.2 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 7.2 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 7.4 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 7.4 </td></tr><tr><td> Ozmolarite </td><td></td><td></td><td> Kesme Çözüm: 300 Elektrofizyoloji için Banyo çözüm *: 298 Elektrofizyoloji İç çözeltisi: 298 Miyositlerin izolasyonu çözüm *: 298 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Hamamı çözüm: 300 Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi için Lümen çözüm: 300 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> * 11 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tablo 1. Deneyde kullanılan çözümler Bileşenleri. </td></tr></tbody></table>

exploring arterial smooth muscle kv7 potassium channel function using patch clamp electrophysiology and pressure myography

Direnç arterlerinin duvarları içinde düz kas hücrelerinin kasılması ya da gevşeme arter çapı belirler ve böylece damar yoluyla kan akışını kontrol eder ve sistemik kan basıncını katkıda bulunur. Daralma süreci öncelikle iyon taşıyıcıları ve çeşitli kanallar tarafından kontrol sırayla olduğunu sitozolik kalsiyum konsantrasyonu ([Ca 2 +] cyt) tarafından düzenlenir. İyon kanalları vazokonstriksiyon veya vazodilatasyon etkisi için vazoaktif hormonların aktive sinyal transdüksiyon yollarının sık ara vardır. Ve iyon kanalları genellikle ya kasten terapötik ajanlar veya bilmeyerek (istenmeyen kardiyovasküler yan etkilere neden örneğin) (örneğin kalsiyum kanal blokerleri vazodilatasyon ve düşük kan basıncı ikna etmek için kullanılır) hedeflenir. KV7 (KCNQ) voltaj bağımlı potasyum kanalları son zamanlarda önemli fizyolojik ve terapötik targı suçlanmışdüz kas kasılması düzenlenmesi için ets. Fizyolojik sinyal transdüksiyon hem de terapötik ajanların eylemleri KV7 kanal spesifik rolü aydınlatmak için, hem de dokunulmamış arter bağlamında etkisini değerlendirmek olarak etkinliğinin hücresel düzeyde modüle edilmektedir nasıl çalışma gerekir. Sıçan mezenter arterleri kullanışlı bir model sistem sağlar. Arterler kolayca diseke bağ dokusu temizlenir ve yama kelepçe elektrofizyoloji için izole arteriyel miyositler hazırlamak için kullanılan veya kanüle ve nispeten fizyolojik koşullar altında vazokonstriktör / vazodilatör yanıtları ölçümleri için basınç olabilir. Burada ölçümler her iki tür için kullanılan yöntemleri açıklamak ve deneysel tasarım vasküler tonusun düzenlenmesinde bu iyon kanallarının rolleri net bir şekilde anlaşılmasını sağlamak için entegre edilebilir nasıl bazı örnekler verir.

Watch this Scientific Journal Video about Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography at JoVE.com

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Yılanı / dilatör yanıtları (basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak) ölçümleri ile paralel izole arteriyel miyositler (yama elektrofizyolojik teknikler kelepçe kullanarak) KV7 (KCNQ) potasyum kanal aktivitenin ölçümleri vasküler düz kas fizyolojisi KV7 kanalları rolleri hakkında önemli bilgiler ortaya çıkarmak ve olabilir farmakoloji.

Patch Clamp Elektrofizyoloji ve Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak arteriyel düz kas KV7 Potasyum Kanal Fonksiyon Exploring

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Kaliks Patch Kelepçe Kapasitans Kayıtlar Yöntemleri

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Xenopus Oosit ifade İyon Kanalları Patch Kelepçe Kaydı

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Geliştirilmiş Patch-kelepçe kayıt için Basınç-parlatma Pipetler

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Odak Ca 2 +</supDüz kas> Geçici Algılama

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ ...

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC

İnsan Umblikal Arter düz kas hücrelerinin izolasyonu (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

Görüntüleme ve Patch-Kelepçe Elektrofizyoloji için dev Liposome Hazırlık

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak Murine Direnç Arter Fonksiyon değerlendirilmesi

Pressure myograph systems are  exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized  to a suitable transmural pressure. The  ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

Tek kanallı bir hücre-bağlı Patch-clamp kayıt

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

Reconstitution of a Transmembrane Protein, the Voltage-gated Ion Channel, KvAP, into Giant Unilamellar Vesicles for Microscopy and Patch Clamp Studies

Bir transmembran proteinin yeniden oluşturulması, Mikroskop ve yama kelepçe Çalışmaları Dev tek-katmanlı keseler içine Voltaj kapılı iyon kanalı, KvAP,

Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) are a popular biomimetic system for studying membrane associated phenomena. However, commonly used protocols to grow ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

Farmakoloji Araştırma İzole Doku Banyo-uygulamalarda Düz Kas Fonksiyon Ölçümü

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...