Name: ex vivo culturing of whole, developing drosophila brains
Uploaded: 2012-07-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains at JoVE.com

Biz el yazması üzerine tavsiye, yararlı tartışmalar ve yorumlar için laboratuarımızda tüm üyelerine teşekkür etmek istiyorum. Biz de özellikle biz yeniden deneylerde yetiştiricilik için beyinlerini parçalayıp önce 1.5 saat APF kadar beklemeniz mükemmel bir öneri için Marta Koch ve Bassem Hassan teşekkür etmek istiyorum. Biz de onların konfokal mikroskop kullanımı için NHGRI görüntüleme tesisi teşekkür ederim. Bu çalışma NINDS İntramural Araştırma Programı, Ulusal Sağlık Enstitüsü (Z01 NS003106) Temel Nörobilim Programı tarafından desteklenmiştir.

Ortam hazırlanışı <ol><li> Filtre-sterilizasyon Schneider&#39;in Drosophila Medya% 10 Fetal Bovine Serum ve% 1 penisilin / streptomisin ile desteklenmiş tarafından eksiksiz bir medya hazırlayın. </li><li> Medya her zaman taze hazırlanmalıdır. Alternatif olarak, önceden dondurulmuş ortam taze bir alikotu her kullanımdan önce çözülür edilebilir. </li><li> Kültür öncesinde, 10 mikrogram / ml insülin ve medyaya 2 mcg / ml ecdysone ekleyin. Uyuşturucu konsantre stok olarak hazırlanır ve k...

<ol>
	<li>Trunova, S., Baek, B., Giniger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cdk5+regulates+the+size+of+an+axon+initial+segment-like+compartment+in+mushroom+body+neurons+of+the+Drosophila+central+brain.">Cdk5 regulates the size of an axon initial segment-like compartment in mushroom body neurons of the Drosophila central brain.</a> J. Neurosci. 31 (29), 10451-10462 (2011).</li><li>Nakada, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accumulation+of+anchored+proteins+forms+membrane+diffusion+barriers+during+neuronal+polarization.">Accumulation of anchored proteins forms membrane diffusion barriers during neuronal polarization.</a> Nat. Cell Biol. 5 (7), 626-632 (2003).</li><li>Schmid, G., Strosznajder, J. B., Wesierska-Gadek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+the+p53+tumor+suppressor+protein+family+and+Cdk5:+novel+therapeutic+approaches+for+the+treatment+of+neurodegenerative+disease+using+selective+Cdk+inhibitors.">Interplay between the p53 tumor suppressor protein family and Cdk5: novel therapeutic approaches for the treatment of neurodegenerative disease using selective Cdk inhibitors.</a> Mol Neurobiol. 34 (1), 27-50 (2006).</li><li>Kahsai, L., Zars, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+and+memory+in+Drosophila:+behavior,+genetics,+and+neural+system.">Learning and memory in Drosophila: behavior, genetics, and neural system.</a> Int. Rev. Neurobiol. 99, 139-167 (2011).</li><li>Lee, T., Lee, A., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+Drosophila+mushroom+bodies:+sequential+generation+of+three+distinct+types+of+neurons+from+a+neuroblast.">Development of the Drosophila mushroom bodies: sequential generation of three distinct types of neurons from a neuroblast.</a> Development. 126, 4065-4076 (1999).</li><li>Watts, R. J., Hoopfer, E. D., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+pruning+during+Drosophila+metamorphosis:+evidence+for+local+degeneration+and+requirement+of+the+ubiquitin-proteasome+system.">Axon pruning during Drosophila metamorphosis: evidence for local degeneration and requirement of the ubiquitin-proteasome system.</a> Neuron. 38 (6), 871-885 (2003).</li><li>Lee, T., Marticke, S., Sung, C., Robinow, S., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-autonomous+requirement+of+the+USP/EcR-B+ecdysone+receptor+for+mushroom+body+neuronal+remodeling+in+Drosophila.">Cell-autonomous requirement of the USP/EcR-B ecdysone receptor for mushroom body neuronal remodeling in Drosophila.</a> Neuron. 28 (3), 807-818 (2000).</li><li>Connell-Crowley, L., Le Gall, M., Vo, D. J., Giniger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cyclin-dependent+kinase+Cdk5+controls+multiple+aspects+of+axon+patterning+in+vivo.">The cyclin-dependent kinase Cdk5 controls multiple aspects of axon patterning in vivo.</a> Curr. Biol. 10 (10), 599-602 (2000).</li><li>Truman, J. W., Riddiford, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine+insights+into+the+evolution+of+metamorphosis+in+insects.">Endocrine insights into the evolution of metamorphosis in insects.</a> Annu. Rev. Entomol. 47, 467-500 (2002).</li><li>Noguchi, T., Miller, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+actin+dynamics+in+individualization+during+spermatogenesis+in+Drosophila+melanogaster.">A role for actin dynamics in individualization during spermatogenesis in Drosophila melanogaster.</a> Development. 130, 1805-1816 (2003).</li><li>Siller, K. H., Serr, M., Steward, R., Hays, T. S., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+Drosophila+brain+neuroblasts+reveals+a+role+for+Lis1/dynactin+in+spindle+assembly+and+mitotic+checkpoint+control.">Live imaging of Drosophila brain neuroblasts reveals a role for Lis1/dynactin in spindle assembly and mitotic checkpoint control.</a> Mol. Biol. Cell. 16 (11), 5127-5140 (2005).</li><li>Brown, H. L. D., Cherbas, L., Cherbas, P., Truman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+time-lapse+imaging+and+dominant+negative+receptors+to+dissect+the+steroid+receptor+control+of+neuronal+remodeling+in+Drosophila.">Use of time-lapse imaging and dominant negative receptors to dissect the steroid receptor control of neuronal remodeling in Drosophila.</a> Development. 133, 275-288 (2006).</li><li>Williamson, W. R., Hiesinger, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Developing+and+Adult+Drosophila+Brains+and+Retinae+for+Live+Imaging.">Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging.</a> J. Vis. Exp. (37), e1936 (2010).</li></ol>

<html> Mutasyonlar ve transgenlerin ifadesi de dahil olmak üzere doku yapısı ve fonksiyonları, kronik genetik manipülasyonlar, tipik olarak ayırmak çok zor olabilir ve ani etkilerini ve geç dolaylı sonuçları karışımından oluşur. Farmakoloji ile genetik yöntemler tamamlayan bir fenotip arkasında zaman tabii sorgulama kolaylaştırabilir. Örneğin, bu Drosophila 10 spermatogenezisin sırasında farklı sitoskeletal bileşenlerin katkılarını kesme için güçlü bir yaklaşım olmu?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Nihai konsantrasyon </td></tr><tr><td> Schneider&#39;in Drosophila Medya </td><td> Invitrogen </td><td> 21720-024 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal sığır serumu (ısıyla inaktive edilmiş) </td><td> Invitrogen </td><td> 10082-147 </td><td> % 10 </td></tr><tr><td> Penisilin / streptomisin </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td> % 1 </td></tr><tr><td> Ensülin </td><td> Invitrogen </td><td> 12585-014 </td><td> 10μg/ml </td></tr><tr><td> Ecdysone </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H5142 </td><td> 2μg/ml </td></tr><tr><td> Roscovitine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R7772 </td><td> 100μM </td></tr><tr><td> Olomoucine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> O0886 </td><td> 100μM </td></tr><tr><td> Normal Keçi Serumu </td><td> Invitrogen </td><td> 50062Z </td><td> % 1 </td></tr><tr><td> Bovine Serum Albumin </td><td> Fisher Scientific </td><td> M9501 </td><td> % 1 </td></tr><tr><td> Formaldehit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D4551 </td><td> 4% </td></tr><tr><td> Triton-X 100 </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP151 </td><td> % 0.5 </td></tr><tr><td> Fosfat Tamponlu Salin </td><td> Invitrogen </td><td> 70011-044 </td><td> 1X </td></tr><tr><td> Vectashield </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> H1000 </td&gt; <td></td></tr><tr><td> Millicell Hücre Kültürü Uçlar </td><td> Millipore </td><td> PI8P01250 </td><td></td></tr><tr><td> Multidish, iyi 4 </td><td> Thermo Scientific </td><td> 176740 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont # 5 Forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11251-20 </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskop Slaytlar </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-544-7 </td><td></td></tr><tr><td> Cam Kapak </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-548-5M </td><td></td></tr></tbody></table>

ex vivo culturing of whole, developing drosophila brains

Biz bütün Drosophila beyinleri ex vivo kültürlenmesi için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu akut farmakolojik ve hücresel süreçlerin canlı görüntüleme izin vererek hücre biyolojisi ve merkezi beyin yapılarının gelişimini araştırmak için kronik genetik manipülasyonlar için bir kontrpuan olarak kullanılabilir. Tekniğinin bir örneği olarak, önce bizim laboratuar 1 ile çalışmak, daha önce tanınmayan Subselüler bölmesi Drosophila merkezi beynin akson aksonal ve somatodendritik bölmeler arasında yattığını göstermiştir. Aksonun ilk segmenti (AIS) 2 olarak adlandırılan bu bölmeye gelişimi, nöron spesifik siklin-bağımlı kinaz, Cdk5 bağlı genetik olarak gösterildi. Biz Cdk5-spesifik farmakolojik inhibitörleri roscovitine ve olomoucine 3 ile yabani tip Drosophila larva beyinleri ex vivo tedavi aktin örgütü akut değişikliklere neden olur, ve burada göstermekGenetik olarak Cdk5 aktivitesi eksikliği görülen mutantlarının değişiklikler taklit hücre yüzey proteini Fasciclin 2, lokalizasyonunu. Ex vivo kültürü tekniği ikinci bir örneği, embriyonik mantar gövdesi (MB) larva yetişkine kadar metamorfoz sırasında gamma nöronların bağlantıların remodeling için sağlanmıştır. Mantar vücudu koku öğrenme ve sinek 4 bellek merkezidir ve bu gama nöronlar yetişkin innervasyon desen 5 kurmak için bir sonraki timepoint yeniden uzatması dalları daha sonra pupa gelişimi sırasında aksonal ve dendritik dalları budamak ve. MB Bu nöronların budama ecdysone reseptör B1 7 de hareket ederek, ecdysone, bir steroid hormon tarafından tetiklenen bir mekanizma ile, nörit dalları 6 lokal dejenerasyonu ile meydana gösterilmiştir ve bu aktivite bağımlı olmuştur ubikuitin-proteazom sistemi 6. Ex vivo kültür Bizim yöntemi b yapabilirsinize daha da gelişimsel yeniden mekanizmasını sorgulamak için kullanılır. Biz ex vivo kültür ortamında, MB gama nöronlar in vivo benzer bir zamanlaması ile gelişimsel budama işlemi değinmeyecek bulundu. Bu hücreler başkalaşım geri dönüşümsüz olarak işlemesi amacıyla doku explanting önce 1.5 saat puparium oluşumundan sonra beklemek, ancak, önemli idi; kültüründe çok az veya hiç metamorfoz yol pupariation başlangıcında hayvanların diseksiyonu. Böylece, uygun bir modifikasyonu ile ex vivo kültürü yaklaşımı ve merkezi beyin biyoloji açıdan kararlı şekilde dinamik incelemek için uygulanabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains at JoVE.com

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Bu makalede, bir taklit hangi bir yöntem açıklanır<em&gt; In vivo</emBir&gt; gelişme<em&gt; Drosophila</emBir de&gt; mantar vücut<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kültür sistemi.

Tüm ex vivo ekimi ise, Gelişmekte Drosophila Brains

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

Gelişmekte olan Fare Retina in vivo Elektroporasyon olarak

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Nörobilim

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Eşzamanlı<em&gt; Ex vivo</emİki retina&gt; Fonksiyonel Test tarafından<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogram Sistemi

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

Basit Bir adım Yetişkin Tüm montaj Hazırlama Diseksiyon Protokolü<em&gt; Drosophila</em&gt; Brain

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Eski Utero Elektroporasyon ve embriyonik fare beyni canlı görüntüleme, GABAergic Interneurons geçiş için Organotypic dilim kültürleri

GABAergic interneurons (INs) are critical components of neuronal networks that drive cognition and behavior. INs destined to populate the cortex migrate ...

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

Ex Vivo Endokrin Drosophila içinde sinyal beyin yanıt-e doğru görüntülenmesi için kalsiyum görüntüleme

Organ-to-organ communication by endocrine signaling, for example, from the periphery to the brain, is essential for maintaining homeostasis. As a model ...

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

Drosophila melanogaster Larval ve yetişkin beyin metabolik Analizi

This protocol describes a method for measuring the metabolism in Drosophila melanogaster larval and adult brains. Quantifying metabolism in whole organs ...

Konfokal Görüntülerle Fare Retina OCT Fibergram Hizalaması

Alignment of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina

Yazar Spotlight: Gelişmiş Glokom Tanı ve Tedavisi için In Vivo ve Ex Vivo Retinal Görüntülemedeki Gelişmeler 

Görünür Işık Optik Koherens Tomografi Fibergramlarının Aynı Fare Retinasının Konfokal Görüntüleri ile Hizalanması

In recent years, in vivo retinal imaging, which provides non-invasive, real-time, and longitudinal information about biological systems and processes, has ...

Preparation for Ex Vivo Color Fundus Photography 

Ex Vivo Color Fundus Fotoğrafçılığına Hazırlık 