Name: visualizing bacteria in nematodes using fluorescent microscopy
Uploaded: 2012-10-19T12:00:00
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저자는 사용이 프로토콜과 도구의 발전에 기여 Eugenio Vivas, 커트 Heungens, 에릭 Martens, 찰스 Cowles, 다비 설탕, 에릭 Stabb, 그리고 토드 Ciche 감사하고 싶습니다. KEM 및 JMC는 건강의 국립 연구소 (NIH) 국립 연구 서비스 상 T32 (AI55397 &quot;건강과 질병에 미생물&quot;)에 의해 지원되었다. JMC는 국립 과학 재단 (National Science Foundation) (NSF) 대학원의 연구 활동에 의해 지원되었다. 이 작품은 국립 과학 재단 (National Science Foundation) (IOS-0920631 및 IOS-0950873)의 보조금에 의해 지원되었다.

1. 활용을 통해 형광 박테리아 스트레인의 건설 <ol><li> 받는 사람 부담 (symbiont들이 검토되어 있어야합니다)와 기증자 부담 밤새 성장. 기증 변형, 보통 대장균은 활용을 통해 DNA를 기부 할 수 있어야하고 함께 변화해야 형광 단백질을 인코딩 유전자를 운반 그 (표 2) 플라스미드. 플라스미드에 따라 활용 도우미 부담도 필요할 수 있습니다. 이 경우,이 변형은 하루 아침에 성장?...

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	<li>Holterman, M., van der Wurff, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phylum-wide+analysis+of+SSU+rDNA+reveals+deep+phylogenetic+relationships+among+nematodes+and+accelerated+evolution+toward+crown+clades.">Phylum-wide analysis of SSU rDNA reveals deep phylogenetic relationships among nematodes and accelerated evolution toward crown clades.</a> Mol. Biol. Evol. 23, 1792-1800 (2006).</li><li>Lambshead, P. J. D., Boucher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marine+nematode+deep-sea+biodiversity+-+hyperdiverse+or+hype.">Marine nematode deep-sea biodiversity - hyperdiverse or hype.</a> J. Biogeogr. 30, 475-485 (2003).</li><li>Poinar, G. O. J., Thomas, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+Achromobacter+nematophilus+Poinar+and+Thomas+(Achromobacteraceae:+Eubacteriales)+in+the+development+of+the+nematode,+DD-136+(Neoaplectana+sp.+Steinernematidae).">Significance of Achromobacter nematophilus Poinar and Thomas (Achromobacteraceae: Eubacteriales) in the development of the nematode, DD-136 (Neoaplectana sp. Steinernematidae).</a> Parasitol. 56, 385-390 (1966).</li><li>Herbert, E. E., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Friend+and+foe:+the+two+faces+of+Xenorhabdus+nematophila.">Friend and foe: the two faces of Xenorhabdus nematophila.</a> Nat. Rev. Microbiol. 5, 634-646 (2007).</li><li>Kaya, H. K., Gaugler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entomopathogenic+nematodes.">Entomopathogenic nematodes.</a> Annu. Rev. Entomol. 38, 181-206 (1993).</li><li>Bird, A. F., Akhurst, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nature+of+the+intestinal+vesicle+in+nematodes+of+the+family+Steinernematidae.">The nature of the intestinal vesicle in nematodes of the family Steinernematidae.</a> Int. J. Parasitol. 13, 599-606 (1983).</li><li>Martens, E. C., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Steinernema+carpocapsae+intestinal+vesicle+contains+a+subcellular+structure+with+which+Xenorhabdus+nematophila+associates+during+colonization+initiation.">The Steinernema carpocapsae intestinal vesicle contains a subcellular structure with which Xenorhabdus nematophila associates during colonization initiation.</a> Cell. Microbiol. 7, 1723-1735 (2005).</li><li>Snyder, H. A., Stock, S. P., Kim, S. K., Flores-Lara, Y., Forst, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+colonization+and+release+process+of+Xenorhabdus+nematophila+and+the+morphology+and+ultrastructure+of+the+bacterial+receptacle+of+its+nematode+host,+Steinernema+carpocapsae.">New insights into the colonization and release process of Xenorhabdus nematophila and the morphology and ultrastructure of the bacterial receptacle of its nematode host, Steinernema carpocapsae.</a> Appl. Environ. Microbiol. 73, 5338-5346 (2007).</li><li>Abebe, E., Abebe-Akele, F., Morrison, J., Cooper, V., Thomas, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+insect+pathogenic+symbiosis+between+a+Caenorhabditis+and+Serratia.">An insect pathogenic symbiosis between a Caenorhabditis and Serratia.</a> Virulence. 2, 158-161 (2011).</li><li>Abebe, E., Jumba, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+entomopathogenic+Caenorhabditis+briggsae.">An entomopathogenic Caenorhabditis briggsae.</a> J. Exp. Biol. 213, 3223-3229 (2010).</li><li>Torres-Barragan, A., Suazo, A., Buhler, W. G., Cardoza, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+entomopathogenicity+and+bacterial+associates+of+the+nematode+Oscheius+carolinensis.">Studies on the entomopathogenicity and bacterial associates of the nematode Oscheius carolinensis.</a> Biol. Control. 59, 123-129 (2011).</li><li>Ye, W. M., Torres-Barragan, A., Cardoza, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscheius+carolinensis+n.+sp+(Nematoda:+Rhabditidae),+a+potential+entomopathogenic+nematode+from+vermicompost.">Oscheius carolinensis n. sp (Nematoda: Rhabditidae), a potential entomopathogenic nematode from vermicompost.</a> Nematology. 12, 121-135 (2010).</li><li>Zhang, C., Liu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterorhabditidoides+chongmingensis+gen.+nov.,+sp.+nov.+(Rhabditida:+Rhabditidae),+a+novel+member+of+the+entomopathogenic+nematodes.">Heterorhabditidoides chongmingensis gen. nov., sp. nov. (Rhabditida: Rhabditidae), a novel member of the entomopathogenic nematodes.</a> J. Invertebr. Pathol. 98, 153-168 (2008).</li><li>Martens, E. C., Heungens, K., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+colonization+events+in+the+mutualistic+association+between+Steinernema+carpocapsae+nematodes+and+Xenorhabdus+nematophila+bacteria.">Early colonization events in the mutualistic association between Steinernema carpocapsae nematodes and Xenorhabdus nematophila bacteria.</a> J. Bacteriol. 185, 3147-3154 (2003).</li><li>Ciche, T. A., Ensign, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+the+insect+pathogen,+Photorhabdus+luminescens,+which+end+of+a+nematode+is+out.">For the insect pathogen, Photorhabdus luminescens, which end of a nematode is out.</a> Appl. Environ. Microbiol. 69, 1890-1897 (2003).</li><li>Ciche, T. A., Kim, K. S., Kaufmann-Daszczuk, B., Nguyen, K. C., Hall, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+invasion+and+matricide+during+Photorhabdus+luminescens+transmission+by+Heterorhabditis+bacteriophora+nematodes.">Cell invasion and matricide during Photorhabdus luminescens transmission by Heterorhabditis bacteriophora nematodes.</a> Appl. Environ. Microbiol. 74, 2275-2287 (2008).</li><li>Easom, C. A., Joyce, S. A., Clarke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+genes+involved+in+the+mutualistic+colonization+of+the+nematode+Heterorhabditis+bacteriophora+by+the+bacterium+Photorhabdus+luminescens.">Identification of genes involved in the mutualistic colonization of the nematode Heterorhabditis bacteriophora by the bacterium Photorhabdus luminescens.</a> BMC Microbiol. 10, 45 (2010).</li><li>Somvanshi, V. S., Kaufmann-Daszczuk, B., Kim, K. S., Mallon, S., Ciche, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photorhabdus+phase+variants+express+a+novel+fimbrial+locus,+mad,+essential+for+symbiosis.">Photorhabdus phase variants express a novel fimbrial locus, mad, essential for symbiosis.</a> Mol. Microbiol. 77, 1021-1038 (2010).</li><li>Martens, E. C., Russell, F. M., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Xenorhabdus+nematophila+metabolic+mutants+yields+insight+into+stages+of+Steinernema+carpocapsae+nematode+intestinal+colonization.">Analysis of Xenorhabdus nematophila metabolic mutants yields insight into stages of Steinernema carpocapsae nematode intestinal colonization.</a> Mol. Microbiol. 51, 28-45 (2005).</li><li>Sugar, D. R., Murfin, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+variation+and+host+interactions+of+Xenorhabdus+bovienii+SS-2004,+the+entomopathogenic+symbiont+of+Steinernema+jollieti+nematodes.">Phenotypic variation and host interactions of Xenorhabdus bovienii SS-2004, the entomopathogenic symbiont of Steinernema jollieti nematodes.</a> Env. Microbiol. 14, 924-939 (2012).</li><li>Cowles, C. E., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Xenorhabdus+nematophila+nilABC+genes+confer+the+ability+of+Xenorhabdus+spp.+to+colonize+Steinernema+carpocapsae+nematodes.">The Xenorhabdus nematophila nilABC genes confer the ability of Xenorhabdus spp. to colonize Steinernema carpocapsae nematodes.</a> J. Bacteriol. 190, 4121-4128 (2008).</li><li>Heungens, K., Cowles, C. E., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Xenorhabdus+nematophila+genes+required+for+mutualistic+colonization+of+Steinernema+carpocapsae+nematodes.">Identification of Xenorhabdus nematophila genes required for mutualistic colonization of Steinernema carpocapsae nematodes.</a> Mol. Microbiol. 45, 1337-1353 (2002).</li><li>Goetsch, M., Owen, H., Goldman, B., Forst, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+PixA+inclusion+body+protein+of+Xenorhabdus+nematophila.">Analysis of the PixA inclusion body protein of Xenorhabdus nematophila.</a> J. Bacteriol. 188, 2706-2710 (2006).</li><li>Bhasin, A., Chaston, J. M., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutational+Analyses+Reveal+Overall+Topology+and+Functional+Regions+of+NilB,+a+Bacterial+Outer+Membrane+Protein+Required+for+Host+Association+in+a+Model+of+Animal-Microbe+Mutualism.">Mutational Analyses Reveal Overall Topology and Functional Regions of NilB, a Bacterial Outer Membrane Protein Required for Host Association in a Model of Animal-Microbe Mutualism.</a> J. Bacteriol. 194, 1763-1776 (2012).</li><li>Ciche, T. A., Goffredi, S. K., Reddy, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in General and Molecular Microbiology. , 394-419 (2007).</li><li>Goodrich-Blair, H., Clarke, D., Grewal, P. S., Ciche, T. A., Stock, S. P., Boemare, N., Vandenberg, J., Glazar, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Insect Pathogens, Molecular Approaches and Techniques. , 239-269 (2009).</li><li>Stock, S. P., Goodrich-Blair, H., Lacey, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Techniques in Invertebrate Pathology. , 375-425 (2012).</li><li>Martens, E. C., Gawronski-Salerno, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenorhabdus+nematophila+requires+an+intact+iscRSUA-hscBA-fdx+locus+to+colonize+Steinernema+carpocapsae+nematodes.">Xenorhabdus nematophila requires an intact iscRSUA-hscBA-fdx locus to colonize Steinernema carpocapsae nematodes.</a> J. Bacteriol. 185, 3678-3682 (2003).</li><li>Vivas, E. I., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenorhabdus+nematophilus+as+a+model+for+host-bacterium+interactions:+rpoS+is+necessary+for+mutualism+with+nematodes.">Xenorhabdus nematophilus as a model for host-bacterium interactions: rpoS is necessary for mutualism with nematodes.</a> J. Bacteriol. 183, 4687-4693 (2001).</li><li>White, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+obtaining+infective+nematode+larvae+from+cultures.">A method for obtaining infective nematode larvae from cultures.</a> Science. 66, 302-303 (1927).</li><li>Ciche, T. A., Ensign, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+the+insect+pathogen+Photorhabdus+luminescens,+which+end+of+a+nematode+is+out.">For the insect pathogen Photorhabdus luminescens, which end of a nematode is out.</a> Appl. Environ. Microbiol. 69, 1890-1897 (2003).</li><li>Sicard, M., Brun, N. L. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+native+Xenorhabdus+on+the+fitness+of+their+Steinernema+hosts:+contrasting+types+of+interaction.">Effect of native Xenorhabdus on the fitness of their Steinernema hosts: contrasting types of interaction.</a> Parasitol. Res. 91, 520-524 (2003).</li><li>Lambertsen, L., Sternberg, C., Molin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mini-Tn7+transposons+for+site-specific+tagging+of+bacteria+with+fluorescent+proteins.">Mini-Tn7 transposons for site-specific tagging of bacteria with fluorescent proteins.</a> Environ. Microbiol. 6, 726-732 (2004).</li><li>Miller, W. G., Leveau, J. H., Lindow, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+gfp+and+inaZ+broad-host-range+promoter-probe+vectors.">Improved gfp and inaZ broad-host-range promoter-probe vectors.</a> Mol. Plant Microbe Int. 13, 1243-1250 (2000).</li><li>Teal, T. K., Lies, D. P., Wold, B. J., Newman, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiometabolic+stratification+of+Shewanella+oneidensis+biofilms.">Spatiometabolic stratification of Shewanella oneidensis biofilms.</a> Appl. Environ. Microbiol. 72, 7324-7330 (2006).</li><li>Bao, Y., Lies, D. P., Fu, H., Roberts, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+Tn7-based+system+for+the+single-copy+insertion+of+cloned+genes+into+chromosomes+of+Gram-negative+bacteria.">An improved Tn7-based system for the single-copy insertion of cloned genes into chromosomes of Gram-negative bacteria.</a> Gene. 109, 167-168 (1991).</li><li>Woodring, J. L., Kaya, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steinernematid+and+Heterorhabditid+Nematodes:+A+Handbook+of+Biology+and+Techniques.">Steinernematid and Heterorhabditid Nematodes: A Handbook of Biology and Techniques.</a> Southern Cooperative Series Bulletin 331. , (1988).</li></ol>

여기에 설명 된 프로토콜은 선충류 호스트 (그림 1) 내 세균의 광학 감지하는 방법을 제공합니다. 이 방법은 선충류 호스트 (그림 3)에서 박테리아의 생체 분석 있도록 nematodes의 광학 투명성과 휘황 라벨 박테리아 할 수있는 능력을 활용합니다. 특히,이 방법은 호스트 내에서 세균 현지화를 식별합니다. 박테리아의 존재에 대한 선충류 인구 및 점수를 계산함으로써,...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> 지질 한천 (무균) </td><td></td><td></td><td> 8g 영양 국물, 15g의 한천, 5g 효모 추출물, 890 ML 물 10 ML 0.2 g / ML MgCl 2. 6H 2 0, 96 ML 옥수수 시럽 솔루션 * 4 ML 옥수수 기름 * 번호판을 붓는 동안 미디어를 저어 * autoclaving 후 살균 성분을 추가 </td></tr><tr><td> 옥수수 시럽 솔루션 (무균) </td><td></td><td></td><td> 7 ML 옥수수 시럽, 89 ML 물 믹스와 압력솥 </td></tr><tr><td> 달걀 솔루션 </td><td></td><td></td><td> 16.6 ML 12 % 차아 염소산 나트륨, 5 ML 5M 코, 80 ML 물 </td></tr><tr><td> Lysogeny 국물 (무균) </td><td></td><td></td><td> 5g 효모 추출물, 10g의 tryptone, 5g 소금, 1 L의 물 믹스와 압력솥 </td></tr><tr><td> Microfuge </td><td> 어부 </td><td> 13-100-675 </td><td> microfuge 튜브를 가지고 모든 microfuge는 작동합니다 </td></tr><tr><td> 원심 분리기 </td><td> Beckman </td><td> 366802 </td><td> 15 ML 50 ML 원뿔 튜브를 가지고 대형 테이블 탑 원심 분리기 </td></tr><tr><td> 멸균 60mm X 15mm 페트리 접시 </td><td> 어부 </td><td> 0875713 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ML의 원심 분리기 튜브 </td><td> 어부 </td><td> 05-539-6 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ML의 원심 분리기 튜브 </td><td> 어부 </td><td> 05-531-6 </td><td></td></tr><tr><td> 멸균 100mm X 20mm 페트리 접시 </td><td> 어부 </td><td> 0875711Z </td><td> 표준 배양 접시보다 더 </td></tr><tr><td> 24 잘 판 </td><td> Greiner 바이오 한 &lt;/ TD&gt; <td> 662000-06 </td><td></td></tr><tr><td> 현미경 </td><td></td><td></td><td> 현미경은 형광과 florescent 기능이 호환 필요 </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> 전자 현미경 과학 </td><td> 15,710 </td><td></td></tr><tr><td> PBS (무균) </td><td></td><td></td><td> 8g NaCL 0.2 g KCL 1.44 g 그렇단 2 HPO 4 0.24 g KH 2 PO 4 1 L의 물 7.4와 물 1 L과 압력솥의 산도에 조정 </td></tr><tr><td> Microfuge 관 </td><td> 어부 </td><td> 05-408-138 </td><td> 2 ML 1.5 ML 튜브 </td></tr><tr><td> 셰이커 </td><td></td><td></td><td> 액체가 부드럽게 이동하는 원인이 모든 흔드는는 작동합니다 </td></tr><tr><td> Diaminopimelic 산 </td><td> 시그마 </td><td&gt; D-1377 </td><td> 필요한 경우 농도 또는 1 mm까지 미디어를 보완 </td></tr></tbody></table>

visualizing bacteria in nematodes using fluorescent microscopy

Symbioses은 두 개 이상의 생물의 함께 사는 삶의 모든 왕국 전역에 널리 퍼져 있습니다. 지구상에서 가장 유비쿼터스 생물의 두 바와 같이, nematodes와 세균은 다양한 종류의 유익 1-3 병원성에 공생 협회의 다양한 배열을 형성하고 있습니다. 하나의 협회는 Xenorhabdus 박테리아와 공생 4의 모델 시스템으로 떠오르고있다 Steinernema nematodes, 사이의 상호 이익 관계입니다. Steinernema의 nematodes은 곤충에게 5 죽이기 위해 세균 symbiont을 사용하여 entomopathogenic 있습니다. 곤충 호스트 사이의 전송을 위해, 박테리아가 선충류의 infective의 청소년 단계 6-8의 장을 식민지화. 최근 몇 가지 다른 선충류 종은 곤충에게 9-13를 죽이고 박테리아를 활용하는 표시되었으며, 조사는 이러한 시스템에 nematodes와 박테리아 사이의 상호 작용을 조사하기 시작했습니다 &lt;&gt; 9 논의하게 될 것입니다. 우리는 현미경으로 볼 nematodes의 광학 투명성을 활용 이내 또는 선충류 호스트에 세균 symbiont의 시각화하기위한 방법을 설명합니다. 박테리아는 형광 현미경하여 시각화를 허용하는 형광 단백질을 표현하는 설계되었습니다. 많은 plasmids는 각각 다른 파장 (예 : 녹색 또는 빨간색), 그리고받는 세균 symbiont에 기증 대장균의 변종에서 plasmids의 활용에 형광 단백질을 인코딩 유전자가 박테리아의 광범위한 성공적으로 수행하는 사용할 수 있습니다. 설명 방법은 Steinernema carpocapsae와 Xenorhabdus nematophila 14 층 사이의 연결을 조사하기 위해 개발되었습니다. 비슷한 방법은 다른 선충류 - 세균 협회 9, 15-18을 조사하는 데 사용하고 접근 방식은 따라서 일반적으로 적용되었습니다. 메트로폴리스석탄 통은 협회와 식민지 14, 16, 19 과정의 성격에 통찰력을 제공, 개발의 여러 단계에서 nematodes에서 박테리아의 존재 및 현지화의 특성 수 있습니다. 현미경 분석은 조직 14, 16, 19-21를 호스팅하는 박테리아의 인구 및 현지화에서 식민지 주파수를 모두 보여줍니다. 여기에는 sonication 22 또는 식민지의 평균 수준을 제공 할 수있는 23, 연삭 등의 선충류의 인구, 내 세균을 모니터링하는 다른 방법에 비해 장점이지만, 예를 들어,있는 인구에서 낮은 symbiont로드의 높은 빈도로 인구 차별하지 않을 수 있습니다 높은 symbiont로드의 낮은 주파수. 식민지의 phenotypes 21 세균 돌연변이를 검사하거나 특성화 때 주파수 및 colonizing 박테리아의 부하를 차별하는 것은 특히 중요 할 수 있습니다24. 사실, 형광 현미경은 식민지 17, 18의 결함에 대한 세균의 돌연변이의 높은 처리량 검사에 사용하고, sonication 22, 25-27 및 개인 선충류의 해부 28, 29 등의 다른 방법보다 덜 힘든 것입니다되었습니다.

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Visualizing Bacteria in Nematodes using Fluorescent Microscopy

사이의 mutualism을 공부하려면<em&gt; Xenorhabdus</em&gt; 박테리아와<em&gt; Steine​​rnema</em&gt; nematodes, 방법은 세균의 존재와 nematodes 내 위치를 모니터링하기 위해 개발되었습니다. 다른 시스템에 적용 할 수있는 실험 방법은, 엔지니어링 박테리아가 투명 선충류에서 형광 현미경 박테리아를 사용하여 녹색 형광 단백질과 시각화를 표현하는 수반.

형광 현미경을 사용하여 Nematodes에 박테리아를 머릿속으로

 
Symbioses, the living together of two or more organisms, are widespread throughout all kingdoms of life. As two of the most ubiquitous organisms on ...

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