Name: use of time lapse microscopy to visualize anoxia-induced suspended animation in c. elegans embryos
Uploaded: 2012-12-03T13:00:00
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Vorremmo esprimere il nostro apprezzamento per l&#39;ingresso e commenti dei membri del laboratorio Padilla. Ceppi di nematodi in questo lavoro sono stati forniti dalla genetica Caenorhabditis Center, che è finanziato dalla National NIH Center for Research (NCRR). Prendiamo atto e ringraziamo il Dott. Lon Turnbull per l&#39;assistenza tecnica con la microscopia confocale. Questo lavoro è stato sostenuto da un finanziamento della National Science Foundation (NSF-IOS, CARRIERA) per PAP

1. Preparazione del campione <ol><li> Produrre o ottenere adeguata transgenici C. elegans ceppo di interesse utilizzando metodologie transgeniche o da Caenorhabditis Genetica Image Center (CGC) o un collega. In questo caso stiamo usando ceppo TH32 (pie-1 :: TBG-1 :: GFP; pie-1 :: GFP :: H2B) 5 per visualizzare i cromosomi e centrosomi come marcatori per la divisione cellulare. </li><li> Genera una popolazione sincronizzato utilizzando uno dei tre metodi: 1) si disintegrano adulti ...

<ol>
	<li>Powell-Coffman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+signaling+and+resistance+in+C.+elegans.">Hypoxia signaling and resistance in C. elegans.</a> Trends Endocrinol. Metab. 21 (10), 435-440 (2010).</li><li>Padilla, P. A., Ladage, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suspended+animation,+diapause+and+quiescence:+Arresting+the+cell+cycle+in+C.+elegans.">Suspended animation, diapause and quiescence: Arresting the cell cycle in C. elegans.</a> Cell Cycle. 11, (2012).</li><li>Hu, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dauer.">Dauer.</a> WormBook. , 1-19 (2007).</li><li>Zhou, K. I., Pincus, Z., Slack, F. 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Privazione di ossigeno e Suspended Animation Sebbene l&#39;esposizione alla carenza di ossigeno grave può essere fatale per alcuni organismi, alcuni organismi sono in grado di sopravvivere l&#39;esposizione a anossia. Nel caso di C. elegans, la sopravvivenza di esposizione anossia dipende stadio di sviluppo e la risposta alla anossia è entrata in uno stato di animazione sospesa reversibile in cui sono stati arrestati una serie di processi biologici osservabili. Processi di divisione ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagenti / Accessori </td><td></td><td></td><td> Composizione </td></tr><tr><td> Soluzione di ipoclorito di </td><td></td><td></td><td> 0,7 g KOH, 12 ml NaOCl 5%, portare a 50 ml con DDH 2 0 </td></tr><tr><td> M9 tampone </td><td></td><td></td><td> 3 g KH 2 PO 4, 11 g di Na 2 HPO 4, 5 g NaCl, 1 ml (1 M) MgSO 4 per 1 L DDH 2 O </td></tr><tr><td> Vetro microscopio diapositive </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-343 </td><td> 3 &quot;x1&quot; x1.0 millimetro </td></tr><tr><td> Turno micro coprioggetti </td><td> Scienze della microscopia elettronica </td><td> 72223-01 </td><td> 25 mm Diametro </td></tr><tr><td> Halocarbon olio 700 </td><td> Sigma </td><td> H8898-100ml </td><td></td></tr><tr><td> Anestetico </td><td></td><td></td><td> 0,5% TricAine, 0,05% Tetramisole </td></tr><tr><td> Leiden chiuso perfusione Microincubator </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 650041 </td><td></td></tr><tr><td> UHP azoto </td><td> Calgaz (Air Liquide) </td><td></td><td> &gt; 99,9990% N 2 &lt;2 ppm O 2 </td></tr><tr><td> Tubo in plastica </td><td> VWR </td><td> 89068-468 </td><td> 0,062 &quot;ID x 0.125&quot; OD </td></tr><tr><td> Spinning microscopio confocale disco </td><td> McBain Sistemi </td><td></td><td> Zeiss microscopio ottico invertito, sistema di illuminazione epifluorescenza, CSU-10 Yokogawa scanner confocale, Hamamatsu moltiplicatore elettronico CCD. </td></tr></tbody></table>

use of time lapse microscopy to visualize anoxia-induced suspended animation in c. elegans embryos

Elegans Caenorhabdits è stato ampiamente utilizzato nello studio della resistenza alle sollecitazioni, che è facilitato dalla trasparenza degli stadi adulti ed embrioni nonché dalla disponibilità di mutanti genetici e ceppi transgenici che esprimono una miriade di proteine ​​di fusione 1-4. Inoltre, i processi dinamici come la divisione cellulare può essere visualizzato utilizzando proteine ​​del reporter fluorescente etichettati. Lo studio della mitosi può essere facilitata attraverso l&#39;utilizzo di time-lapse esperimenti in vari sistemi, compresi gli organismi intatti e di conseguenza l&#39;inizio C. embrione elegans è adatto per questo studio. Presentato qui è una tecnica con la quale immagini in vivo di strutture subcellulari in risposta a anossica (99.999% N 2; &lt;2 ppm O 2) lo stress è possibile con un semplice flusso di gas attraverso la configurazione di un potente microscopio. Una camera microincubation viene utilizzato in combinazione con un flusso di azoto e gas attraverso un microscopio confocale disco rotanteper creare un ambiente controllato in cui gli animali possono essere esposte in vivo. Utilizzando GFP-tubulina gamma etichettato e istoni, la dinamica e arresto della divisione cellulare può essere monitorato prima, durante e dopo l&#39;esposizione ad un ambiente privo di ossigeno. I risultati di questa tecnica sono ad alta risoluzione, video e immagini dettagliate delle strutture cellulari all&#39;interno blastomeri di embrioni esposti a deprivazione di ossigeno.

C. elegans embrioni esposti a grave carenza di ossigeno (anossia) sono in grado di sopravvivere con l&#39;arresto di processi biologici tra cui lo sviluppo e la divisione cellulare 7. L&#39;anossia arresto indotto di divisione cellulare può essere monitorata, ad un livello sub-cellulare, utilizzando una camera microincubation in combinazione con flusso di azoto e gas attraverso un microscopio confocale disco rotante per creare un ambiente controllato in cui gli animali possono essere esposte in ...

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Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

Qui descritto è un<em&gt; In vivo</em&gt; Tecnica di immagine strutture subcellulari in animali esposti ad anossia utilizzando un flusso di gas attraverso la camera microincubation in congiunzione con un microscopio confocale disco rotante. Questo metodo è semplice e flessibile abbastanza per soddisfare una varietà di parametri sperimentali e sistemi modello.

L&#39;uso della microscopia Time lapse di visualizzare anossia indotta Suspended Animation in<em&gt; C. elegans</em&gt; Embrioni

Caenorhabdits elegans has been used extensively in the study of stress resistance, which is facilitated by the transparency of the adult and embryo stages ...

Research

JoVE Journal

Biology

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

Monitoraggio Actina Smontaggio con Time-lapse Microscopia

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Biologia

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