Name: mass cytometry: protocol for daily tuning and running cell samples on a cytof mass cytometer
Uploaded: 2012-11-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer at JoVE.com

نود أن نشكر الدكتور ايفان والدكتور نيويل Bendall شون للوقوف على آرائهم. نود أيضا أن نشكر DVS العلوم والدكتور شون Bendall لعينة من الخرز البوليسترين موضوع متعدد اللانثينيدات التي تحتوي على. ونحن ممتنون للتمويل من المنحة NIH 2 U19 AI057229.

يجب أن تكون ثابتة جميع العينات الخلية لCyTOF وpermeabilized. وهذا يتيح قدر أكبر من دخول intercalator DNA التي تحتوي على الإيريديوم، ويمنع أيضا تحلل الخلايا خلال غسل الماء MilliQ والخطوات إعادة تعليق على الفور من قبل عن طريق الحقن في عداد الكريات الشامل. <p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:...

<ol>
	<li>Bandura, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+cytometry:+Technique+for+real+time+single+cell+multitarget+immunoassay+based+on+inductively+coupled+plasma+Time-of-Flight+mass+spectrometry.">Mass cytometry: Technique for real time single cell multitarget immunoassay based on inductively coupled plasma Time-of-Flight mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 81, 6813-6822 (2009).</li><li>Lou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer-based+elemental+tags+for+sensitive+bioassays.">Polymer-based elemental tags for sensitive bioassays.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 46, 6111-6114 (2007).</li><li>Majonis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curious+results+with+palladium-+and+platinum-carrying+polymers+in+mass+cytometry+bioassays+and+an+unexpected+application+as+a+dead+cell+stain.">Curious results with palladium- and platinum-carrying polymers in mass cytometry bioassays and an unexpected application as a dead cell stain.</a> Biomacromolecules. 12, 3997-4010 (2011).</li><li>Leipold, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+mass+cytometry+methods+for+bacterial+discrimination.">Development of mass cytometry methods for bacterial discrimination.</a> Anal. Biochem. 419, 1-8 (2011).</li><li>Bendall, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+mass+cytometry+of+differential+immune+and+drug+responses+across+a+human+hematopoietic+continuum.">Single-cell mass cytometry of differential immune and drug responses across a human hematopoietic continuum.</a> Science. 332, 687-696 (2011).</li><li>Newell, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytometry+by+Time-of-Flight+shows+combinatorial+cytokine+expression+and+virus-specific+cell+niches+within+a+continuum+of+CD8++T+cell+phenotypes.">Cytometry by Time-of-Flight shows combinatorial cytokine expression and virus-specific cell niches within a continuum of CD8+ T cell phenotypes.</a> Immunity. 36, 142-152 (2012).</li></ol>

على مدى العقود القليلة الماضية، كان التدفق الخلوي مضان طريقة العمود الفقري لتحليل الخلايا واحدة، سواء من حيث التعبير والسطح في المقايسات الفنية. ومع ذلك فقد حد لقضايا التداخل الطيفي لصبغات الفلورسنت عدد علامات في وقت واحد. في حين تم الإبلاغ عن التجارب باستخدام أكثر ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> CyTOF TM الشامل عداد الكريات </td><td> DVS العلوم </td><td></td><td></td></tr><tr><td> غسل الحل </td><td> DVS العلوم </td><td> 201071 </td><td> الهيدروفلوريك حمض 0.05٪ في الماء </td></tr><tr><td> ضبط الحل </td><td> DVS العلوم </td><td> 201072 </td><td> 0.5 جزء في المليون لا، خدمات العملاء، السل، TM، الأشعة تحت الحمراء، تتبع حامض النيتريك </td></tr><tr><td> الخرز البوليسترين الاتحاد الأوروبي التي تحتوي على </td><td> DVS العلوم </td><td> 201073 </td><td> يحتوي الطبيعية وفرة النظائر الاتحاد الأوروبي؛ الخرز المقدمة في حوالي 1 مليون / مل </td></tr><tr><td> متعددة اللانثينيدات التي تحتوي على (لا / العلاقات العامة / السل / تيم / لو) - الخرز البوليسترين </td><td> DVS العلوم </td><td> لم المتاحة تجاريا </td><td> يحتوي الطبيعية وفرة النظائر من اللانثينيدات المدرجة </td></tr><tr><td> حمض النيتريك (مركزة) </td><td> فيشر العلمية </td><td> A467-500 </td><td> أوبتيما تتبع معدن نقي ICP-MS الصف </td></tr><tr><td> البوليسترين جولة القاع أنبوب مع الخلية مصفاة متوسطة 5mL </td><td> BD </td><td> 352235 </td><td> تستخدم لتصفية عينات الخلايا قبل الحقن </td></tr><tr><td> وضع القواعد وJect tuberkulin حقنة-1ML </td><td> هينكه ساس وولف </td><td> 4010-200V0 </td><td> خالية من السيليكون، واللثي خالية </td></tr><tr><td> وضع القواعد وJect حقنة-3 مل </td><td> هينكه ساس وولف </td><td> 4010.000V0 </td><td> خالية من السيليكون، واللثي خالية </td></tr><tr><td> MilliQ المياه </td><td></td><td></td><td> 18 MΩ المياه النقية، ويجب ألا تكون مخزنة في الزجاج أو زجاجات من البلاستيك التي تم غسلها بالمنظفات التجارية (بسبب مستويات عالية من الباريوم الحاضر). </td></tr><tr><td> الذكرranox </td><td> سيغما الدريخ </td><td> Z273236 </td><td> حمض المنظفات </td></tr><tr><td> غاز الأرجون </td><td> PRAXAIR </td><td> AR-T 5.0UH </td><td> 99.999٪ فائق النقاء </td></tr></tbody></table>

mass cytometry: protocol for daily tuning and running cell samples on a cytof mass cytometer

في السنوات الأخيرة، وتحليل السريع للخلايا واحدة وعادة أجريت باستخدام التدفق الخلوي والأجسام المضادة التي تحمل علامات fluorescently. ومع ذلك فقد حد مسألة التداخل الطيفي للانبعاثات fluorophore عدد من التحقيقات في وقت واحد. في المقابل، فإن كتلة CyTOF جديدة عداد الكريات من قبل الأزواج العلوم DVS السائل نظام إدخال وحيدة الخلية إلى 1 ICP-MS. وبدلا من fluorophores، تقترن البوليمرات التي تحتوي على نظائر المعادن مخلبية عالي التخصيب إلى الأجسام المضادة أو تحقيقات أخرى محددة. 2-5 بسبب نقاء المعدن والقرار الجماعي للعداد الكريات الشامل، وليس هناك &quot;تداخل الأطياف&quot; من النظائر المجاورة، وبالتالي لا حاجة للمصفوفات التعويض. بالإضافة إلى ذلك، ونظرا لاستخدام المعادن اللانثينيدات، وليس هناك خلفية البيولوجية وبالتالي لا يعادل تألق ذاتي. مع نافذة تمتد الشامل الكتلة الذرية 103-203، نظريا يمكن تمييز ما يصل الى 100 في وقت واحد التسميات. حاليا، أكثر من 35 قنوات متاحة باستخدام الكواشف مخلبية المتاحة من العلوم DVS، مما يسمح للتشريح لم يسبق لها مثيل من الملف المناعية من العينات. 6-7 عيوب لكتلة الخلوي تتضمن شرط صارمة لنظائر المعادن منفصلة في التحقيق (لا يعادل مبعثر إلى الأمام أو الجانب)، وحقيقة أنها هي تقنية المدمرة (أي إمكانية لاستعادة الفرز). التكوين الحالي للعداد الكريات الشامل لديها أيضا معدل نقل خلية من خلايا فقط ~ 25٪، مما يتطلب إدخال عدد أكبر من الخلايا. الأداء اليومي الأمثل للعداد الكريات الشامل يتطلب العديد من الخطوات. الهدف الأساسي من التحسين هو تعظيم قوة إشارة المقاسة من نظائر المعادن المطلوب (M) مع التقليل من تشكيل أكاسيد (M +16) التي من شأنها أن تقلل من شدة إشارة M وتتداخل مع أي إشارة المرجوة في M +16. الخطوة الأولى هي عملية الاحماء الجهاز بحيث ساخنة، وأنا مستقرةوقد أنشئت CP البلازما. الثانية، يجب أن يكون الأمثل للإعدادات الحالية والمكياج معدل تدفق الغاز على أساس يومي. خلال جمع العينات، ويقتصر هذا الحدث من قبل خلية الحد الأقصى لمعدل الكفاءة للكشف عن وسرعة المعالجة إلى 1000 خلية / ثانية. ومع ذلك، وهذا يتوقف على نوعية العينة، حدث تباطؤ معدل الخلية (300-500 خلية / ثانية) وعادة ما يكون من المرغوب فيه السماح أفضل قرار بين الأحداث الخلايا، وبالتالي تحقيق أقصى قدر من singlets سليمة أكثر من الحلل والحطام. وأخيرا، وتنظيف كافية للآلة في نهاية اليوم يساعد على التقليل من إشارة الخلفية بسبب معدنية مجانية.

وينبغي بعد بروتوكول أعلاه إنجاز أربعة أمور. أولا، سوف يسمح كافية الاحماء الوقت للعداد الكريات الشامل إنتاج الساخنة، والبلازما المستقرة اللازمة لإشارة الأمثل والحد الأدنى من تشكيل أكسيد. والثانية، وغسل كافية من المياه مع عداد الكريات الشامل MilliQ وDVS الحل اغسل (ال...

Watch this Scientific Journal Video about Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer at JoVE.com

Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer

يتم وصف الخطوات الضرورية لضبط اليومية والاستفادة المثلى من أداء عداد الكريات الشامل CyTOF. وتناقش التعليقات على إعداد العينات ومعدل التدفق الأمثل

الخلوي الجماعي: بروتوكول لضبط اليومية وعينات الخلايا تشغيل عداد الكريات الشامل على CyTOF

In recent years, the rapid analysis of single cells has commonly been performed using flow cytometry and fluorescently-labeled antibodies. However, the ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Characterizing Bacterial Volatiles using Secondary Electrospray Ionization Mass Spectrometry (SESI-MS)

Characterizing Bacterial Volatiles using Secondary Electrospray Ionization Mass Spectrometry SESI-MS

تميز باستخدام مواد متطايرة الجرثومي الثانوي قداس الطيف Electrospray التأين (سيسي - MS)

Secondary electrospray ionization mass spectrometry (SESI-MS) is a method developed for the rapid detection of volatile compounds, without the need for ...

A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids

إسقاط خلية بسيطة الشنق بروتوكول الثقافة للجيل 3D الأجسام الشبه الكروية

Studies of cell-cell cohesion and cell-substratum adhesion have historically been performed on monolayer cultures adherent to rigid substrates. Cells ...

Cellular Lipid Extraction for Targeted Stable Isotope Dilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis

الخلوية لاستخراج الدهن المستهدفة التخفيف النظائر المستقرة تحليل السائل الطيف اللوني القداس

The metabolism of fatty acids, such as arachidonic acid (AA) and linoleic acid (LA), results in the formation of oxidized bioactive lipids, including ...

Wide-field Fluorescent Microscopy and Fluorescent Imaging Flow Cytometry on a Cell-phone

واسعة المجال المجهري نيون نيون قياس التدفق الخلوي والتصوير على الهاتف الخلوي

Fluorescent microscopy and flow cytometry are widely used tools in biomedical research and clinical diagnosis. However these devices are in general ...

Imaging of Biological Tissues by Desorption Electrospray Ionization Mass Spectrometry

التصوير من الأنسجة البيولوجية بواسطة الامتزاز Electrospray التأين الطيف الكتلي

Mass spectrometry imaging (MSI) provides untargeted molecular information with the highest specificity and spatial resolution for investigating biological ...

Cell Patterning on Photolithographically Defined 
Parylene-C: SiO2 Substrates

Cell Patterning on Photolithographically Defined 
Parylene-C: SiO2 Substrates

الزخرفة الخلية على Photolithographically معرفة Parylene-C: شافي<sub&gt; 2</sub&gt; ركائز

Cell patterning platforms support broad research goals, such as construction of predefined in vitro neuronal networks and the exploration of certain ...

Sample Preparation Strategies for Mass Spectrometry Imaging of 3D Cell Culture Models

عينة استراتيجيات التحضير للتصوير الطيف الكتلي لل3D الثقافة خلية نماذج

Three dimensional cell cultures are attractive models for biological research. They combine the flexibility and cost-effectiveness of cell culture with ...

Isolation of Primary Human Colon Tumor Cells from Surgical Tissues and Culturing Them Directly on Soft Elastic Substrates for Traction Cytometry

عزل خلايا ورم القولون الإنسان الأساسية من الأنسجة الجراحية وزراعة بشكل مباشر على لينة مرنة ركائز للالجر الخلوي

Cancer cells respond to matrix mechanical stiffness in a complex manner using a coordinated, hierarchical mechano-chemical system composed of adhesion ...

A Protocol for Bioinspired Design: A Ground Sampler Based on Sea Urchin Jaws

بروتوكول لتصميم Bioinspired: أخذ العينات الجوفية بناء على قنفذ البحر الفك المفترس

Bioinspired design is an emerging field that takes inspiration from nature to develop high-performance materials and devices. The sea urchin mouthpiece, ...

Whole-body Mass Spectrometry Imaging by Infrared Matrix-assisted Laser Desorption Electrospray Ionization (IR-MALDESI)

Whole-body Mass Spectrometry Imaging by Infrared Matrix-assisted Laser Desorption Electrospray Ionization IR-MALDESI

كامل الجسم الطيف الكتلي التصوير من قبل بمساعدة مصفوفة الأشعة تحت الحمراء ليزر الامتزاز Electrospray التأين (IR-MALDESI)

Ambient ionization sources for mass spectrometry (MS) have been the subject of much interest in the past decade. Matrix-assisted laser desorption ...