Name: imaging analysis of neuron to glia interaction in microfluidic culture platform (mcp)-based neuronal axon and glia co-culture system
Uploaded: 2012-10-14T14:00:00
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Nous tenons à remercier le Dr Jeffrey Rothstein de fournir BAC GLT1 souris eGFP et GLT1 anticorps; Tufts Center for Neuroscience Research (NIH P30 NS047243; PI, Rob Jackson) pour fournir des installations de base précieuses; New recrutement de professeurs de subvention (NIH P30-02 5P30NS069254 , PI, Phil Haydon) à Tufts Neuroscience Department.

1. Assemblée de la Chambre Culture microfluidique (MCP) <ol><li> MCP (figure 1) sont conçus pour les chambres ouvertes cultures compartimentées de différents types de cellules 4. Il a généralement deux compartiments qui sont reliés par les canaux centraux (3 m de diamètre). Assemblée des MCP avec fond de verre plats est nécessaire pour la préparation de cultures et d&#39;analyse d&#39;images ultérieur. </li><li> Tout d&#39;abord, manteau stériles à fond de verre plats de polyo...

     

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	<li>Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron-astrocyte+signaling+in+the+development+and+plasticity+of+neural+circuits.">Neuron-astrocyte signaling in the development and plasticity of neural circuits.</a> Neuro-Signals. 16, 278-288 (2008).</li><li>Paixao, S., Klein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron-astrocyte+communication+and+synaptic+plasticity.">Neuron-astrocyte communication and synaptic plasticity.</a> Current opinion in neurobiology. 20, 466-473 (2010).</li><li>Fields, R. 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Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+neuromuscular+synapse+development+by+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+and+neurturin.">Regulation of neuromuscular synapse development by glial cell line-derived neurotrophic factor and neurturin.</a> The Journal of biological chemistry. 277, 10614-10625 (2002).</li><li>Yang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+regulation+of+astroglial+excitatory+neurotransmitter+transporter+GLT1.">Presynaptic regulation of astroglial excitatory neurotransmitter transporter GLT1.</a> Neuron. 61, 880-894 (2009).</li><li>Regan, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+promoter+activity+reveal+a+differential+expression+and+physiology+of+glutamate+transporters+by+glia+in+the+developing+and+mature+CNS.">Variations in promoter activity reveal a differential expression and physiology of glutamate transporters by glia in the developing and mature CNS.</a> The Journal of neuroscience. 27, 6607-6619 (2007).</li><li>Swanson, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+regulation+of+glutamate+transporter+subtype+expression+in+astrocytes.">Neuronal regulation of glutamate transporter subtype expression in astrocytes.</a> The Journal of neuroscience. 17, 932-940 (1997).</li><li>Schlag, B. 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Le MCP neurone base et les astrocytes du système de co-culture de neurones permet dissection détaillée de astroglies voies de signalisation en n&#39;autorisant que les axones passent les canaux centraux et interagissant avec les cellules astrocytaires. Ce système de co-culture peut être facilement mis en place avec des neurones classiques et des procédures de culture d&#39;astrocytes. Nous avons également décrit une application pratique de ce système de co-culture en employant un journaliste eGFP base pour dém...

<table border="1"><tbody><tr><td> Sérum de veau fœtal </td><td> Hyclone </td><td> SH30070.03 </td><td> pour le placage neurone neurone à moyen cutlure </td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F4135 </td><td> pour un milieu de culture des astrocytes </td></tr><tr><td> Gliale facteur de nerf dérivée </td><td> R &amp; D systèmes </td><td> 212-GD </td><td> Appliquer 10-20 ng / ml à côté de la chambre de neurone </td></tr><tr><td> Dulbecco modifié Eagle milieu glucose à haute </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 11995 </td><td></td></tr><tr><td> 70 mm tamis cellulaire </td><td> BD Falcon </td><td> 352350 </td><td></td></tr><tr><td> Stérile à fond de verre plat </td><td> MatTek Corporation </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Plates-formes de culture microfluidiques </td><td> Xona Microfluidique LLC </td><td> SND150 </td><td></td></tr><tr><td> 6 puits de la plaque de culture </td&gt; <td> Cellstar </td><td> 657 160 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Milieu de culture neurone <ul><li> Milieu Neurobasal </li><li> 2% supplément B27 Neurobasal </li><li> 2 mM de glutamate en ajoutant 1% 100x Glutamax </li><li> 1% de pénicilline-streptomysin </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Milieu de culture cellulaire neurone pour placage <ul><li> Milieu Neurobasal </li><li> 2% supplément B27 Neurobasal </li><li> 2 mM de glutamate en ajoutant 1% 100x Glutamax </li><li> 1% de pénicilline-streptomysin </li><li> 5% de sérum fœtal bovin SH30070.03 </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Milieu de culture des astrocytes <ul><li> Dulbecco modifié eagle de glucose moyen-élevé </li><li> 10% de sérum bovin fœtal F4135 </li><li> 1% de pénicilline-streptomysin </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Matériaux tableau 1. Utilisés dans la culture à base de plate-forme microfluidique axone des neurones et cellules gliales du système de co-culture. </td></tr></tbody></table>

imaging analysis of neuron to glia interaction in microfluidic culture platform (mcp)-based neuronal axon and glia co-culture system

Neurone propre à l&#39;interaction glie est essentielle à la fonction physiologique du système nerveux central (SNC). Cette communication bidirectionnelle est subtilement médiée par les voies de signalisation spécifiques entre les neurones et les cellules gliales 1,2. L&#39;identification et la caractérisation de ces voies de signalisation est essentielle à la compréhension de la façon dont l&#39;interaction neurone glie formes physiologie du système nerveux central. Auparavant, des cultures de neurones et de cellules gliales mixtes ont été largement utilisés pour tester et caractériser les voies de signalisation entre les neurones et les cellules gliales. Ce que nous avons appris de ces préparations et autres outils in vivo, cependant, a suggéré que la signalisation mutuelles entre neurones et cellules gliales sont souvent produits dans des compartiments spécifiques à l&#39;intérieur des neurones (c.-à axones, dendrites, ou soma) 3. Il est donc important de développer un nouveau système de culture qui permet la séparation des compartiments neuronaux et étudie spécifiquement l&#39;interaction entre les cellules gliales et neuroaxones internes / dendrites. En outre, le système de culture conventionnel mixte n&#39;est pas capable de différencier les facteurs solubles et directs signaux de contact membranaire entre les neurones et les cellules gliales. En outre, la grande quantité de neurones et des cellules gliales dans le classique système de co-culture n&#39;a pas la résolution nécessaire pour observer l&#39;interaction entre un axone unique et une cellule gliale. Dans cette étude, nous décrivons une nouvelle axone et les cellules gliales du système de co-culture avec l&#39;utilisation d&#39;une plate-forme microfluidique culture (MCP). Dans ce système de co-culture, les neurones et les cellules gliales sont cultivées dans deux chambres séparées qui sont connectées par le biais de plusieurs canaux centraux. Dans cette plate-forme microfluidique la culture, seuls les processus neuronaux (en particulier les axones) peut entrer dans le côté gliale à travers les canaux centraux. En combinaison avec marquage des protéines fluorescentes puissant, ce système permet un examen direct des voies de signalisation entre les interactions axonales / dendritiques et des cellules gliales, une telles axone médiée par la régulation transcriptionnelle dans les cellules gliales, les cellules gliales trafic des récepteurs induite dans les terminaux de neurones, les cellules gliales et médiée par la croissance axonale. Le petit diamètre de la chambre également interdit de manière significative l&#39;écoulement du fluide enrichi en neurone dans la chambre gliale, facilitant palpage de la protéine membranaire directe interaction entre les axones / dendrites et les surfaces gliales.

L&#39;analyse d&#39;imagerie time-lapse de l&#39;activation induite par axone promoteur GLT1 dans les astrocytes Le neurone compartimenté et co-culture d&#39;astrocytes système ne permet que les processus neuronaux, notamment des axones, d&#39;interagir sélectivement avec les astrocytes. Suite à la mise en place réussie de l&#39;axone et des astrocytes (cellules gliales ou d&#39;autres) co-culture dans l&#39;assemblée des MCP, différents types d&#39;interactions axone-cellules gliales pe...

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Imaging Analysis of Neuron to Glia Interaction in Microfluidic Culture Platform MCP-based Neuronal Axon and Glia Co-culture System

Cette étude décrit les procédures de mise en place d&#39;un axone des neurones et roman (astro) glie plate-forme de co-culture. Dans ce système de co-culture, la manipulation de l&#39;interaction directe entre un axone unique (et unique cellule gliale) devient possible, ce qui permet une analyse mécaniste du neurone mutuelle à la signalisation gliales.

Analyse en Imagerie du Neuron à l&#39;interaction Glia dans la plate-forme microfluidique Culture (MCP) à base neuronale et Axon Glia co-culture système

Proper  neuron to glia interaction is critical to physiological function of the central  nervous system (CNS). This bidirectional communication is ...

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Imaging Analysis of Neuron to Glia Interaction in Microfluidic Culture Platform (MCP)-based Neuronal Axon and Glia Co-culture System

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