Name: imaging analysis of neuron to glia interaction in microfluidic culture platform (mcp)-based neuronal axon and glia co-culture system
Uploaded: 2012-10-14T14:00:00
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우리는 BAC GLT1 eGFP 마우스와 GLT1 항체를 제공하기 위해 박사 제프리 Rothstein 감사드립니다, 가치의 핵심 시설을 제공하는, 신경 과학 연구 Tufts 센터 (PI, 롭 잭슨 NIH P30 NS047243), 새로운 교수 채용 기금 (NIH P30 5P30NS069254-02 , Tufts 신경 과학학과 PI, 필 Hay​​don).

1. 마이크로 유체 문화 회의소의 조립 (MCP) <ol><li> MCP (그림 1)은 세포 4 종류 compartmented 문화 용으로 설계된 개방형 챔버 있습니다. 그것은 일반적으로 중앙 채널 (직경 3 μm)를 통해 연결된 2 개의 구획이 있습니다. 바닥이 유리로 요리 MCP 조립 문화와 이후의 이미징 분석을 준비하기위한 필요합니다. </li><li> 첫째, Polyornithine (시그마 - 알드리치, 1 MG / ML)와 코트 멸균 유리 바닥 ?...

     

<ol>
	<li>Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron-astrocyte+signaling+in+the+development+and+plasticity+of+neural+circuits.">Neuron-astrocyte signaling in the development and plasticity of neural circuits.</a> Neuro-Signals. 16, 278-288 (2008).</li><li>Paixao, S., Klein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron-astrocyte+communication+and+synaptic+plasticity.">Neuron-astrocyte communication and synaptic plasticity.</a> Current opinion in neurobiology. 20, 466-473 (2010).</li><li>Fields, R. D., Stevens-Graham, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+neuron-glia+communication.">New insights into neuron-glia communication.</a> Science. 298, 556-562 (2002).</li><li>Park, J. W., Vahidi, B., Taylor, A. M., Rhee, S. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research.">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nature. 1, 2128-2136 (2006).</li><li>Wang, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+neuromuscular+synapse+development+by+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+and+neurturin.">Regulation of neuromuscular synapse development by glial cell line-derived neurotrophic factor and neurturin.</a> The Journal of biological chemistry. 277, 10614-10625 (2002).</li><li>Yang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+regulation+of+astroglial+excitatory+neurotransmitter+transporter+GLT1.">Presynaptic regulation of astroglial excitatory neurotransmitter transporter GLT1.</a> Neuron. 61, 880-894 (2009).</li><li>Regan, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+promoter+activity+reveal+a+differential+expression+and+physiology+of+glutamate+transporters+by+glia+in+the+developing+and+mature+CNS.">Variations in promoter activity reveal a differential expression and physiology of glutamate transporters by glia in the developing and mature CNS.</a> The Journal of neuroscience. 27, 6607-6619 (2007).</li><li>Swanson, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+regulation+of+glutamate+transporter+subtype+expression+in+astrocytes.">Neuronal regulation of glutamate transporter subtype expression in astrocytes.</a> The Journal of neuroscience. 17, 932-940 (1997).</li><li>Schlag, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+glial+Na+-dependent+glutamate+transporters+by+cyclic+AMP+analogs+and+neurons.">Regulation of the glial Na+-dependent glutamate transporters by cyclic AMP analogs and neurons.</a> Molecular pharmacology. 53, 355-369 (1998).</li><li>Ponomarev, E. D., Novikova, M., Maresz, K., Shriver, L. P., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+culture+system+that+supports+adult+microglial+cell+proliferation+and+maintenance+in+the+resting+state.">Development of a culture system that supports adult microglial cell proliferation and maintenance in the resting state.</a> Journal of immunological. 300, 32-46 (2005).</li><li>Espinosa-Jeffrey, A., Wakeman, D. R., Kim, S. U., Snyder, E. Y., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+system+for+rodent+and+human+oligodendrocyte+specification,+lineage+progression,+and+maturation.">Culture system for rodent and human oligodendrocyte specification, lineage progression, and maturation.</a> Current protocols in stem cell biology. Chapter 2, (2009).</li><li>Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mystery+and+magic+of+glia:+a+perspective+on+their+roles+in+health+and+disease.">The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease.</a> Neuron. 60, 430-440 (2008).</li><li>Debanne, D., Rama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+shape+axonal+signaling.">Astrocytes shape axonal signaling.</a> Science signaling. 4, pe11 (2011).</li></ol>

MCP 기반의 뉴런과 astrocytes 공동 문화 시스템은 axons는 중앙 채널을 통과 허용하고 astroglial 세포와 상호 작용에 의해 astroglia 신호 경로에 대한 자세한 뉴런의 절개를 할 수 있습니다. 이 공동 문화 시스템은 편리하게 기존의 신경 세포와 astrocyte 문화 절차를 설정할 수 있습니다. 우리는 또한 astrocytes의 축삭에 의존 GLT1 프로모터 활성화를 입증 eGFP 기반 기자를 고용하여 공동 문화 시스템의 실제 응?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td> Hyclone </td><td> SH30070.03 </td><td> 뉴런의 cutlure 매체에 신경을 도금 용 </td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> F4135 </td><td> astrocyte 문화 매체에 대한 </td></tr><tr><td> Glial 파생 된 신경 요소 </td><td> R &amp; D 시스템 </td><td> 212-GD </td><td> 챔버의 신경 세포 측에 10-20 NG / ML을 적용 </td></tr><tr><td> Dulbecco 수정 독수리 중간 높은 포도당 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> 11,995 </td><td></td></tr><tr><td> 70mm 셀 스트레이너 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352350 </td><td></td></tr><tr><td> 멸균 유리 바닥 요리 </td><td> MatTek 공사 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 마이크로 유체 문화 플랫폼 </td><td> Xona Microfluidics LLC </td><td> SND150 </td><td></td></tr><tr><td> 문화 판 6 우물 </TD&gt; <td> Cellstar </td><td> 657 160 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 뉴런 문화 매체 <ul><li> Neurobasal 매체 </li><li> 2퍼센트 B27 Neurobasal 보충 </li><li> 1퍼센트 100x GlutaMAX을 추가로 약 2 밀리미터 glutamate </li><li> 1퍼센트 페니실린 - streptomysin </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 도금 세포에 대한 신경 세포의 배양액 <ul><li> Neurobasal 매체 </li><li> 2퍼센트 B27 Neurobasal 보충 </li><li> 1퍼센트 100x GlutaMAX을 추가로 약 2 밀리미터 glutamate </li><li> 1퍼센트 페니실린 - streptomysin </li><li> 5% 태아 소 혈청 SH30070.03 </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Astrocyte 문화 매체 <ul><li> Dulbecco 수정 EAgle은 중간 높은 포도당 </li><li> 10% 태아 소 혈청 F4135 </li><li> 1퍼센트 페니실린 - streptomysin </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 마이크로 유체 문화 플랫폼 기반의 neuronal 축삭과 glia 공동 문화 시스템에서 사용되는 표 1. 자료. </td></tr></tbody></table>

imaging analysis of neuron to glia interaction in microfluidic culture platform (mcp)-based neuronal axon and glia co-culture system

glia 상호 작용에 적절한 신경 세포는 중추 신경계 (CNS)의 생리적 기능에 중요합니다. 이 양방향 통신이 sophisticatedly 뉴런과 glia 1,2 사이에 특정 신호 경로에 의해 중재됩니다. 이러한 신호 경로의 식별 및 특성은 glia 상호 작용 형태의 CNS의 생리에 얼마나 신경 세포의 이해에 필수적입니다. 이전 뉴런과 glia 혼합 문화가 널리 뉴런과 glia 사이의 신호 경로를 테스트 및 특성화에 활용되었습니다. 우리가 생체 도구에서 이러한 준비 및 기타에서 배운 것을 그러나, 뉴런과 glia 사이의 상호 신호가 자주 뉴런 (즉, 축삭, dendrite, 또는 소마) 3 내의 특정 구획에서 오류가 발생 것을 제안했습니다. 이것은 중요한 neuronal 구획의 분리 할 수​​있는 새로운 문화 시스템을 개발 할 수 있으며 특별히 glia과 신경 사이의 상호 작용을 검사NAL axons / 수석. 또한, 기존의 혼합 문화 시스템은 가용성 요인과 뉴런과 glia 사이에 직접 멤브레인 연락처 신호를 구별 할 수 없습니다. 또한, 종래의 공동 문화 시스템의 뉴런과 glial 세포의 큰 수량은 하나의 축삭과 glial 세포 사이의 상호 작용을 관찰하는 데 필요한 해상도를 부족합니다. 본 연구에서는, 우리는 마이크로 유체 문화 플랫폼 (MCP)의 사용과 소설 축삭과 glia 공동 문화 시스템을 설명합니다. 이 공동 문화 시스템에서 뉴런과 glial 세포는 여러 중앙 채널을 통해 연결된 2 개의 별도의 방에서 배양되어 있습니다. 이 마이크로 유체 문화 플랫폼에서 만 neuronal 프로세스 (특히 axons) 중앙 채널을 통해 glial 측면을 입력 할 수 있습니다. 강력한 형광 단백질 라벨과 함께,이 시스템은, / axonal 수지상와 glial 상호 작용 사이의 경로를 신호를 직접 검사 할 수 있습니다neuronal 터미널에서 glia, glia로 인한 수용체 인신 매매 및 glia로 인한 축삭의 성장에의 축삭로 인한 전사 조절. 챔버의 좁은 직경은 크게 axons / 수석과 glial 표면 사이의 직접 막 단백질 상호 작용의 프로빙 촉진, glial 챔버에 신경 강화 매체의 흐름을 금지합니다.

astrocytes의 축삭 유도 GLT1 프로모터 활성화의 시간 경과 영상 분석 compartmented 신경 세포와 astrocyte 공동 문화 시스템은 neuronal 프로세스, 특히 axons은 선택적으로 astrocytes와 상호 작용 할 수 있습니다. 조립 MCP의 축삭과 astrocyte (또는 다른 glial 세포) 공동 문화의 성공적인 설립 후, 축삭-glia 상호 작용의 다른 유형은 다음과 같은 연구 될 수있다; astroglial 유전자 프로모터 활성화, astr...

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Imaging Analysis of Neuron to Glia Interaction in Microfluidic Culture Platform MCP-based Neuronal Axon and Glia Co-culture System

이 연구는 소설 neuronal 축삭과 (천체) glia 공동 문화 플랫폼을 설정하는 절차를 설명합니다. 이 공동 문화 시스템에서 하나의 축삭 (및 단일 glial 세포) 사이의 직접 상호 작용 조작은 glial 신호에 대한 상호 신경 세포의 기계론의 분석을 수 있도록 가능한된다.

마이크로 유체 문화 플랫폼에 Glia 상호 작용 (MCP) 기반 Neuronal 축삭과 Glia 공동 문화 시스템에 신경의 영상 분석

Proper  neuron to glia interaction is critical to physiological function of the central  nervous system (CNS). This bidirectional communication is ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Imaging Analysis of Neuron to Glia Interaction in Microfluidic Culture Platform (MCP)-based Neuronal Axon and Glia Co-culture System

Bilaminar Co-culture of Primary Rat Cortical Neurons and Glia

차 쥐 두피 뉴런과 Glia의 Bilaminar의 공동 문화

This video will guide you through the process of culturing rat cortical neurons in the presence of a glial feeder layer, a system known as a bilaminar or ...

연구

신경과학

Analysis of Developing Tooth Germ Innervation Using Microfluidic Co-culture Devices

미세 유체 공동 문화 장치를 사용하여 치아 세균 신경 분포를 개발 분석

Innervation plays a key role in the development, homeostasis and regeneration of organs and tissues. However, the mechanisms underlying these phenomena ...

Utilizing Combined Methodologies to Define the Role of Plasma Membrane Delivery During Axon Branching and Neuronal Morphogenesis

결합 된 방법론을 활용하여 축삭 분기 및 신경 세포 형태 형성 동안 플라즈마 멤브레인 배달의 역할을 정의합니다

During neural development, growing axons extend to multiple synaptic partners by elaborating axonal branches. Axon branching is promoted by extracellular ...

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

간접 신경-성상 세포 공동 배양 분석 일 :<em&gt; 체외</em&gt; 신경 세포 - glia 상호 작용의 상세한 조사를위한 셋업

Proper neuronal development and function is the prerequisite of the developing and the adult brain. However, the mechanisms underlying the highly ...

M&#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

레이저 유도 된 망막 변성 및 재생 Zebrafish 모델 뮐러 명과 셀 활성화

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after ...

Axonal Transport of Organelles in Motor Neuron Cultures using Microfluidic Chambers System

미세 유체 챔버 시스템을 사용하여 모터 뉴런 배양에서 세포기관의 축축한 수송

Motor neurons (MNs) are highly polarized cells with very long axons. Axonal transport is a crucial mechanism for MN health, contributing to neuronal ...

Isolation and Culture of Primary Neurons and Glia from Adult Rat Urinary Bladder

성인 쥐 요로 방광에서 1 차신경및 glia의 격리 그리고 문화

The lower urinary tract has two main functions, namely, periodic urine storage and micturition; these functions are mediated through central and ...

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Surgical intervention can be quite effective for treating certain types of medically intractable neurological diseases. This approach is particularly ...

Dissection and Isolation of Murine Glia from Multiple Central Nervous System Regions

여러 중추 신경계 영역에서 쥐 아교 세포의 해부 및 분리

The methods presented here demonstrate laboratory procedures for the dissection of four different regions of the central nervous system (CNS) from murine ...

A Cell Culture Model for Studying the Role of Neuron-Glia Interactions in Ischemia

이혈증에서 신경 신경-Glia 상호 작용의 역할을 공부 하기 위한 세포 배양 모델

Ischemic stroke is a clinical condition characterized by hypoperfusion of brain tissue, leading to oxygen and glucose deprivation, and the consequent ...