Name: imaging analysis of neuron to glia interaction in microfluidic culture platform (mcp)-based neuronal axon and glia co-culture system
Uploaded: 2012-10-14T14:00:00
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Nos gustaría dar las gracias al Dr. Jeffrey Rothstein para proporcionar GLT1 BAC ratones EGFP y anticuerpos GLT1; Tufts Center para Investigación de Neurociencia (NIH P30 NS047243, PI, Rob Jackson) para proporcionar servicios de valor básicos; Nueva facultad de contratación de subvención (NIH P30-02 5P30NS069254 , PI, Phil Haydon) en Tufts Neurociencias Departamento.

1. Asamblea de la Cámara de Cultura Microfluidic (MCP) <ol><li> MCP (Figura 1) son cámaras abiertas diseñado para culturas compartimentados de diferentes tipos de células 4. Típicamente tiene dos compartimentos que están conectados a través de los canales centrales (3 m de diámetro). Asamblea del MCP con fondo de cristal platos es necesario para la preparación de las culturas y de análisis de imágenes posteriores. </li><li> En primer lugar, capa estériles con fondo de vidrio pla...

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	<li>Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron-astrocyte+signaling+in+the+development+and+plasticity+of+neural+circuits.">Neuron-astrocyte signaling in the development and plasticity of neural circuits.</a> Neuro-Signals. 16, 278-288 (2008).</li><li>Paixao, S., Klein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron-astrocyte+communication+and+synaptic+plasticity.">Neuron-astrocyte communication and synaptic plasticity.</a> Current opinion in neurobiology. 20, 466-473 (2010).</li><li>Fields, R. 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La neurona MCP y basado en sistema de astrocitos de co-cultivo permite la disección de neurona detallada a astroglía vías de señalización permitiendo que sólo los axones pasan los canales centrales y la interacción con las células astrogliales. Este sistema de co-cultivo se puede configurar cómodamente con neurona convencional y los procedimientos de astrocitos cultura. También se describe una aplicación práctica de este sistema de co-cultivo mediante el empleo de un reportero eGFP base para demostrar axón ...

<table border="1"><tbody><tr><td> El suero fetal bovino </td><td> Hyclone </td><td> SH30070.03 </td><td> para placas neurona por neurona medio cutlure </td></tr><tr><td> El suero fetal bovino </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F4135 </td><td> por medio de cultivo de astrocitos </td></tr><tr><td> Glial nervio factor derivado </td><td> De I + D de sistemas </td><td> 212-GD </td><td> Aplicar 10-20 ng / ml a lado de la cámara de neurona </td></tr><tr><td> Dulbecco modificado del águila de mediano alto de glucosa </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 11995 </td><td></td></tr><tr><td> 70 mm filtro de células </td><td> BD Falcon </td><td> 352350 </td><td></td></tr><tr><td> Vidrio estéril plato de fondo </td><td> MatTek Corporación </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Plataformas de microfluidos cultura </td><td> Xona microfluídica LLC </td><td> SND150 </td><td></td></tr><tr><td> 6 pocillos de la placa de cultivo </td&gt; <td> Cellstar </td><td> 657 160 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Neurona medio de cultivo <ul><li> Medio Neurobasal </li><li> 2% suplemento B27 Neurobasal </li><li> 2 mM de glutamato mediante la adición de 1% 100x GlutaMAX </li><li> 1% de penicilina-streptomysin </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Neurona medio de cultivo para la célula de recubrimiento <ul><li> Medio Neurobasal </li><li> 2% suplemento B27 Neurobasal </li><li> 2 mM de glutamato mediante la adición de 1% 100x GlutaMAX </li><li> 1% de penicilina-streptomysin </li><li> 5% de suero fetal bovino SH30070.03 </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Medio de cultivo de astrocitos <ul><li> Dulbecco modificado eagle glucosa medio-alto </li><li> 10% de suero fetal bovino F4135 </li><li> 1% de penicilina-streptomysin </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Materiales Tabla 1. Utilizados en el cultivo de microfluidos plataforma basada axón neuronal y glial sistema de co-cultivo. </td></tr></tbody></table>

imaging analysis of neuron to glia interaction in microfluidic culture platform (mcp)-based neuronal axon and glia co-culture system

Neurona adecuada a la interacción glia es fundamental para la función fisiológica del sistema nervioso central (SNC). Esta comunicación bidireccional está sofisticadamente mediada por vías de señalización específicas entre neuronas y glía 1,2. Identificación y caracterización de estas vías de señalización es esencial para la comprensión de cómo neurona a la interacción glia formas CNS fisiología. Anteriormente, los cultivos de neuronas y células gliales mixtos han sido ampliamente utilizados para la prueba de las vías de señalización entre las neuronas y la glía. Lo que hemos aprendido de estos preparativos y otras herramientas in vivo, sin embargo, se ha sugerido que la señalización mutuas entre neuronas y glía ocurrieron a menudo en compartimentos específicos dentro de las neuronas (es decir, axón, dendrita, o soma) 3. Esto hace que sea importante para desarrollar un nuevo sistema de cultivo que permite la separación de los compartimentos neuronales y, específicamente, examina la interacción entre células gliales y neuroNAL / axones dendritas. Además, el sistema de cultivo mixto convencional no es capaz de diferenciar los factores solubles y directos señales de contacto entre la membrana neuronal y glial. Además, la gran cantidad de neuronas y células gliales en el co-cultivo convencional sistema carece de la resolución necesaria para observar la interacción entre un solo axón y una célula glial. En este estudio, se describe un axón y un sistema nuevos glia co-cultivo con el uso de una plataforma de cultura microfluídico (MCP). En este sistema de co-cultivo, las neuronas y las células gliales se cultivó en dos cámaras separadas que están conectadas a través de múltiples canales centrales. En esta plataforma de microfluidos cultura, sólo los procesos neuronales (especialmente los axones) puede entrar en el lado glial a través de los canales centrales. En combinación con el etiquetado potente proteína fluorescente, este sistema permite el examen directo de las vías de señalización entre las interacciones axonal / dendrítico y glial, tals axón mediada por la regulación transcripcional en células gliales, el tráfico del receptor mediada por células gliales en terminales neuronales y gliales mediada por el crecimiento del axón. El diámetro estrecho de la cámara también significativamente prohíbe el flujo del medio de neurona enriquecido en la cámara de glial, facilitando el sondeo de la membrana directa-proteína interacción entre axones / dendritas y superficies gliales.

Time-lapse de imágenes de análisis axón inducida por la activación del promotor GLT1 en astrocitos La neurona de compartimentado y el sistema de co-cultivo de astrocitos permite sólo los procesos neuronales, especialmente los axones, para interactuar selectivamente con los astrocitos. Tras el establecimiento con éxito de axón y astrocitos (u otras células gliales) co-cultivo en el ensamblado MCP, diferentes tipos de interacciones gliales del axón puede ser estudiado como; axón inducid...

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Imaging Analysis of Neuron to Glia Interaction in Microfluidic Culture Platform MCP-based Neuronal Axon and Glia Co-culture System

Este estudio describe los procedimientos de instalación de un axón neuronal y la novela (astro) glia plataforma de co-cultivo. En este sistema de co-cultivo, la manipulación de la interacción directa entre un solo axón (y células gliales único) se hace factible, permitiendo un análisis mecanicista de la neurona mutuo de señalización gliales.

Análisis de imágenes de Neuron a la interacción glía en la Plataforma Cultura Microfluidic (MCP)-basada en Axón Neuronal y Sistema Glia Co-cultura

Proper  neuron to glia interaction is critical to physiological function of the central  nervous system (CNS). This bidirectional communication is ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Imaging Analysis of Neuron to Glia Interaction in Microfluidic Culture Platform (MCP)-based Neuronal Axon and Glia Co-culture System

Bilaminar Co-culture of Primary Rat Cortical Neurons and Glia

Bilaminar Co-cultivo de neuronas de rata primaria cortical y la glía

This video will guide you through the process of culturing rat cortical neurons in the presence of a glial feeder layer, a system known as a bilaminar or ...

Investigación

Neurociencias

Analysis of Developing Tooth Germ Innervation Using Microfluidic Co-culture Devices

Análisis de Desarrollo del diente Germ Inervación Uso de dispositivos de microfluidos Co-cultura

Innervation plays a key role in the development, homeostasis and regeneration of organs and tissues. However, the mechanisms underlying these phenomena ...

Utilizing Combined Methodologies to Define the Role of Plasma Membrane Delivery During Axon Branching and Neuronal Morphogenesis

Utilizando metodologías combinadas para definir el papel de la membrana plasmática de entrega Durante Axon ramas y morfogénesis neuronal

During neural development, growing axons extend to multiple synaptic partners by elaborating axonal branches. Axon branching is promoted by extracellular ...

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

La indirecta neurona-astrocito Coculture Ensayo: Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Puesta en marcha de la investigación detallada de las interacciones neurona-glía

Proper neuronal development and function is the prerequisite of the developing and the adult brain. However, the mechanisms underlying the highly ...

M&#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

Activación de la célula de Müller glía en un modelo de regeneración en el pez cebra y degeneración retiniana inducida por láser

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after ...

Axonal Transport of Organelles in Motor Neuron Cultures using Microfluidic Chambers System

Transporte axónico de organelos en cultivos de neuronas motoras utilizando el sistema de cámaras microfluídicas

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Isolation and Culture of Primary Neurons and Glia from Adult Rat Urinary Bladder

Aislamiento y cultura de las neuronas primarias y Glia de la vejiga urinaria de rata adulta

The lower urinary tract has two main functions, namely, periodic urine storage and micturition; these functions are mediated through central and ...

Targeted Neuronal Injury for the Non-Invasive Disconnection of Brain Circuitry

Lesión neuronal dirigida para la desconexión no invasiva del circuito cerebral

Surgical intervention can be quite effective for treating certain types of medically intractable neurological diseases. This approach is particularly ...

Dissection and Isolation of Murine Glia from Multiple Central Nervous System Regions

Disección y aislamiento de la glía murina de múltiples regiones del sistema nervioso central

The methods presented here demonstrate laboratory procedures for the dissection of four different regions of the central nervous system (CNS) from murine ...

A Cell Culture Model for Studying the Role of Neuron-Glia Interactions in Ischemia

Un modelo de cultivo celular para estudiar el papel de las interacciones de neuronas y glia en isquemia

Ischemic stroke is a clinical condition characterized by hypoperfusion of brain tissue, leading to oxygen and glucose deprivation, and the consequent ...