Name: assaying dna damage in hippocampal neurons using the comet assay
Uploaded: 2012-12-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل على جائزة IMPACT من قسم علاج الأورام بالإشعاع، جامعة ألاباما في برمنغهام مركز السرطان الشامل، ومؤسسة الأطفال مكافحة للسرطان، ومؤسسة غابرييل انجيل (لESY).

1. خلية ثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخلايا العصبية وثقافة التعامل معهم حسب الحاجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا الحصاد في أنابيب مل 15: وسائل الإعلام الرشفة، وشطف مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS، الكالسيوم والمغنيسيوم مجانا)، إضافة الترب...

<ol>
	<li>Olive, P. L., Banath, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comet+assay:+a+method+to+measure+DNA+damage+in+individual+cells.">The comet assay: a method to measure DNA damage in individual cells.</a> Nat. Protoc. 1, 23-29 (2006).</li><li>Hovhannisyan, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+in+situ+hybridization+in+combination+with+the+comet+assay+and+micronucleus+test+in+genetic+toxicology.">Fluorescence in situ hybridization in combination with the comet assay and micronucleus test in genetic toxicology.</a> Mol. Cytogenet. 3, (2010).</li><li>Olive, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comet+assay.+An+overview+of+techniques.">The comet assay. An overview of techniques.</a> Methods Mol. Biol. 203, 179-194 (2002).</li><li>Olive, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+DNA+damage+in+individual+cells+by+analysis+of+histone+H2AX+phosphorylation.">Detection of DNA damage in individual cells by analysis of histone H2AX phosphorylation.</a> Methods Cell Biol. 75, 355-373 (2004).</li><li>Olive, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+the+comet+assay+in+radiobiology.">Impact of the comet assay in radiobiology.</a> Mutat. Res. 681, 13-23 (2009).</li><li>Olive, P. L., Banath, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+H2AX+phosphorylation+after+exposure+to+cisplatin.">Kinetics of H2AX phosphorylation after exposure to cisplatin.</a> Cytometry B Clin. Cytom. 76, 79-90 (2009).</li><li>Olive, P. L., Durand, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+DNA+damage+using+the+comet+assay.">Heterogeneity in DNA damage using the comet assay.</a> Cytometry A. 66, 1-8 (2005).</li><li>Collins, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comet+assay+for+DNA+damage+and+repair.">The comet assay for DNA damage and repair.</a> Molecular biotechnology. 26, 249-261 (2004).</li><li>Fairbairn, D. W., Olive, P. L., O'Neill, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comet+assay:+a+comprehensive+review.">The comet assay: a comprehensive review.</a> Mutation Research/Reviews in Genetic Toxicology. 339, 37-59 (1995).</li><li>Yang, E. S., Nowsheen, S., Wang, T., Thotala, D. K., Xia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycogen+synthase+kinase+3B+inhibition+enhances+repair+of+DNA+double-strand+breaks+in+irradiated+hippocampal+neurons.">Glycogen synthase kinase 3B inhibition enhances repair of DNA double-strand breaks in irradiated hippocampal neurons.</a> Neuro-Oncology. 13, 459-470 (2011).</li><li>Yang, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lithium-mediated+protection+of+hippocampal+cells+involves+enhancement+of+DNA-PK+dependent+repair+in+mice.">Lithium-mediated protection of hippocampal cells involves enhancement of DNA-PK dependent repair in mice.</a> The Journal of clinical investigation. , 119-1124 (2009).</li><li>Collins, A. R., Harrington, V., Drew, J., Melvin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+modulation+of+DNA+repair+in+a+human+intervention+study.">Nutritional modulation of DNA repair in a human intervention study.</a> Carcinogenesis. 24, 511-515 (2003).</li><li>Smith, C. C., O'Donovan, M. R., Martin, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hOGG1+recognizes+oxidative+damage+using+the+comet+assay+with+greater+specificity+than+FPG+or+ENDOIII.">hOGG1 recognizes oxidative damage using the comet assay with greater specificity than FPG or ENDOIII.</a> Mutagenesis. 21, 185-190 (2006).</li><li>Rosenquist, T. A., Zharkov, D. O., Grollman, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+characterization+of+a+mammalian+8-oxoguanine+DNA+glycosylase.">Cloning and characterization of a mammalian 8-oxoguanine DNA glycosylase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94, 7429-7434 (1997).</li><li>Radicella, J. P., Dherin, C., Desmaze, C., Fox, M. S., Boiteux, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+characterization+of+hOGG1,+a+human+homolog+of+the+OGG1+gene+of+Saccharomyces+cerevisiae.">Cloning and characterization of hOGG1, a human homolog of the OGG1 gene of Saccharomyces cerevisiae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94, 8010-8015 (1997).</li><li>Banath, J. P., Klokov, D., MacPhail, S. H., Banuelos, C. A., Olive, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Residual+gammaH2AX+foci+as+an+indication+of+lethal+DNA+lesions.">Residual gammaH2AX foci as an indication of lethal DNA lesions.</a> BMC Cancer. 10, 4 (2010).</li><li>Banath, J. P., Macphail, S. H., Olive, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+sensitivity,+H2AX+phosphorylation,+and+kinetics+of+repair+of+DNA+strand+breaks+in+irradiated+cervical+cancer+cell+lines.">Radiation sensitivity, H2AX phosphorylation, and kinetics of repair of DNA strand breaks in irradiated cervical cancer cell lines.</a> Cancer Res. 64, 7144-7149 (2004).</li><li>Bonner, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[gamma]H2AX+and+cancer.">[gamma]H2AX and cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 8, 957-967 (2008).</li><li>Finney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulsed+Field+Gel+Electrophoresis.">Pulsed Field Gel Electrophoresis.</a> Current protocols in molecular biology. , (2000).</li><li>Electrophoresis, F. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pulsed-field gel electrophoresis. , (2000).</li><li>Nowsheen, S., Bonner, J. A., Yang, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+poly+(ADP-Ribose)+polymerase+inhibitor+ABT-888+reduces+radiation-induced+nuclear+EGFR+and+augments+head+and+neck+tumor+response+to+radiotherapy.">The poly (ADP-Ribose) polymerase inhibitor ABT-888 reduces radiation-induced nuclear EGFR and augments head and neck tumor response to radiotherapy.</a> Radiotherapy and Oncology. , (2011).</li></ol>

ومقايسة المذنب لديه قدرة فريدة على تحليل الخلايا الفردية. هذا هو مفيد في تحديد المجموعات السكانية الفرعية من الخلايا التي توضح الفرق استجابة للعوامل السامة للخلايا. عدد قليل من القيود العملية يجب أن تؤخذ بعين الاعتبار. قد يكون عدد الخلايا التي يمكن تقييمها بشكل فردي...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> التعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> 1.5 مل أنابيب </td><td> سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية، وشركة </td><td> SC-200271 </td><td></td></tr><tr><td> 10X TBE (تريس القاعدة، حمض البوريك، EDTA) </td><td> فيشر العلمية </td><td> BP13331 </td><td></td></tr><tr><td> 15 مل أنبوب </td><td> فيشر العلمية </td><td> 0553851 </td><td></td></tr><tr><td> الاغاروز </td><td> سيجما </td><td> A5093 </td><td></td></tr><tr><td> رقائق الالومنيوم </td><td> فيشر العلمية </td><td> 01213101 </td><td></td></tr><tr><td> فنجان </td><td> فيشر العلمية </td><td> FB102300 </td><td></td></tr><tr><td> نبذ </td><td> الحرارية العلمية </td><td> 75004261PR </td><td></td></tr><tr><td> المذنب الفحص البرمجيات </td><td> صورة المذنب IV الفحص تحليل النظم </td><td></td><td></td></tr><tr><td> أسطوانة </td><td> فيشر العلمية </td><td> 08555F </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> GIBCO </td><td> 15575 </td><td></td></tr><tr><td> غرفة الكهربائي </td><td> الحرارية العلمية </td><td> 09528101 </td><td></td></tr><tr><td> الإيثانول </td><td> فيشر العلمية </td><td> A407P4 </td><td></td></tr><tr><td> المجهر الفلورسنت </td><td> زايس محوري الرؤية </td><td></td><td> فإن أي المجهر الفلورسنت مع فلتر الخضراء تكفي </td></tr><tr><td> عدادة الكريات </td><td> فيشر العلمية </td><td> 0267152 </td><td></td></tr><tr><td> انخفاض ذوبان نقطة الاغاروز </td><td> Promega </td><td> V2111 </td><td></td></tr><tr><td> ميكروويف </td><td> سيرز </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الفوسفات مخزنة المالحة، والكالسيوم الحرة، والمغنيسيوم مجانا </td><td> HyClone </td><td> SH3025601 </td><td></td></tr><tr><td> إمدادات الطاقة </td><td> BioRad </td><td> 1645050 </td><td></td></tr><tr><td> ثلاجة </td><td> سيرز </td><td></td><td></td></tr><tr><td> حاكم </td><td> المواد الغذائية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> انزلق </td><td> فيشر العلمية </td><td> 12550143 </td><td></td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> سيجما </td><td> S7653 </td><td></td></tr><tr><td> هيدروكسيد الصوديوم </td><td> سيجما </td><td> S5881 </td><td></td></tr><tr><td> لوريل الصوديوم sarcosinate </td><td> فيشر العلمية </td><td> S529 </td><td></td></tr><tr><td> Sybr الخضراء </td><td> إينفيتروجن </td><td> S7585 </td><td></td></tr><tr><td> صينية </td><td> الجبهة الاسلامية للانقاذلها العلمية </td><td> 15242B </td><td></td></tr><tr><td> تريس قاعدة </td><td> سيجما </td><td> T6066 </td><td></td></tr><tr><td> تريتون-X 100 </td><td> سيجما </td><td> T8787 </td><td></td></tr><tr><td> التربسين </td><td> HyClone </td><td> SH3023601 </td><td></td></tr><tr><td> دوامة </td><td> فيشر العلمية </td><td> 02216108 </td><td></td></tr><tr><td> ماء الحمام </td><td> فيشر العلمية </td><td> 154622Q </td><td></td></tr></tbody></table>

assaying dna damage in hippocampal neurons using the comet assay

وهناك عدد من العقاقير تستهدف مسارات إصلاح الحمض النووي وحمل الخلية قتل عن طريق إنشاء الحمض النووي من التلف. وهكذا، تم العمليات مباشرة لقياس الحمض النووي من التلف تقييم على نطاق واسع. الطرق التقليدية وقتا، طويلا مكلفة، وتتطلب موارد كثيفة الخلايا تكرار. في المقابل، ومقايسة المذنب، هلام خلية واحدة مقايسة الكهربائي، هو أسرع وغير الغازية، وغير مكلفة، مقياسا مباشرا وحساسة من الحمض النووي من التلف والإصلاح. يمكن فيها إعمال جميع أشكال الحمض النووي من التلف وكذلك إصلاح الحمض النووي تصور على مستوى خلية واحدة باستخدام هذه التقنية القوية. والمبدأ الذي يقوم عليه مقايسة المذنب هو أن أمر غاية في حين DNA الحمض النووي من التلف سليمة يعطل هذه المنظمة. ويتسرب DNA التالفة في مصفوفة الاغاروز وعندما تتعرض لمجال كهربائي، وDNA سالبة الشحنة يهاجر نحو القطب السالب الذي موجبة الشحنة. الكبيرة خيوط DNA غير التالفة ليست قادرة على الهجرة بعيدا عن النواة. DNA الضرريخلق شظايا أصغر DNA التي تسافر أبعد من DNA سليمة. المذنب الفحص، وهو برنامج تحليل الصور والتدابير ويقارن شدة الفلورسنت العام للDNA في نواة مع DNA الذي هاجر من النواة. إشارة الفلورسنت من DNA هاجر يتناسب مع الحمض النووي من التلف. أكثر إشراقا يعد الذيل يدل على زيادة DNA الحمض النووي من التلف. بعض المعلمات التي يتم قياسها هي اللحظة التي الذيل هو مقياس لكل من كمية الحمض النووي DNA وتوزيع في الذيل طول الذيل، والنسبة المئوية للDNA في الذيل. يسمح هذا الفحص لقياس إصلاح الحمض النووي وكذلك منذ قرار من الحمض النووي من التلف يعني إصلاح قد حدثت. الحد من الحساسية هو فواصل حبلا نحو 50 في 1،2 مضاعفا خلايا الثدييات. الخلايا تعامل مع أي وكلاء DNA الضارة، مثل إيتوبوسيد، يمكن استخدام كعنصر تحكم إيجابية. وبالتالي مقايسة المذنب هو إجراء سريع وفعال لقياس الحمض النووي من التلف.

Watch this Scientific Journal Video about Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay at JoVE.com

Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay

ومقايسة المذنب هو وسيلة فعالة للكشف عن الانقطاعات منفردة ومزدوجة حبلا، بما في ذلك قلوي قابل للتغيير المواقع وDNA-DNA/DNA-protein عبر وصلات على الحمض النووي في خلايا جميع بما في ذلك الخلايا العصبية قرن آمون. الأسلوب يستفيد من الهجرة التفاضلية من الحمض النووي في المجال الكهربائي بسبب الاختلافات في كمية الحمض النووي من التلف.

يعاير الحمض النووي من التلف في الخلايا العصبية قرن آمون باستخدام مقايسة المذنب

A number of drugs target the DNA repair pathways and induce cell kill by creating DNA damage. Thus, processes to directly measure DNA damage have been ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assaying &beta;-amyloid Toxicity using a Transgenic C. elegans Model

Assaying &#946;-amyloid Toxicity using a Transgenic C. elegans Model

يعاير β اميلويد السمية باستخدام المعدلة وراثيا C. ايليجانس النموذجي

Accumulation of the &beta;-amyloid peptide (A&beta;) is generally believed to be central to the induction of Alzheimer's disease, but the relevant ...

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection والثقافة الأولية من الخلايا العصبية الجنينية الماوس الحصين والقشرية

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Neuromodulation and Mitochondrial Transport: Live Imaging in Hippocampal Neurons over Long Durations

تعديل العمليات العصبية والنقل الميتوكوندريا : تصوير مباشر في الخلايا العصبية الحصين خلال فترات طويلة

To understand the relationship between mitochondrial transport and neuronal function, it is critical to observe mitochondrial behavior in live cultured ...

Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية قرن آمون من الفئران قبل الولادة

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange (ABE)

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange ABE

الكشف عن بروتين Palmitoylation في الخلايا العصبية قرن آمون بواسطة مثقف مناعي والبورصات الأسيل، البيوتين (آبي)

Palmitoylation is a post-translational lipid  modification involving the attachment of a 16-carbon saturated fatty acid,  palmitate, to cysteine residues ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

الكالسيوم فوسفات ترنسفكأيشن من الخلايا العصبية الحصين الابتدائية

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Imaging Dendritic Spines of Rat Primary Hippocampal Neurons using Structured Illumination Microscopy

التصوير شجيري العمود الفقري من الفئران الابتدائية الحصين الخلايا العصبية باستخدام منظم الإضاءة المجهر

Dendritic spines are protrusions emerging from the dendrite of a neuron and represent the primary postsynaptic targets of excitatory inputs in the brain. ...

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

مضان وتلألؤ بيولوجي التصوير من التحت خلوية كا<sup&gt; 2+</sup&gt; في المسنين الحصين الخلايا العصبية

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible ...

Stripe Assay to Study the Attractive or Repulsive Activity of a Protein Substrate Using Dissociated Hippocampal Neurons

شريط الفحص لدراسة آخر جذاب أو مثيرة للاشمئزاز من الركيزة البروتين عن طريق فصل الخلايا العصبية الحصين

Growing axons develop a highly motile structure at their tip, termed the growth cone. The growth cone contacts extracellular environmental cues to ...

Assessment of Hippocampal Dendritic Complexity in Aged Mice Using the Golgi-Cox Method

تقييم التعقيد الجذعي الحصين في الفئران المسنين باستخدام طريقة جولجي-كوكس

Dendritic spines are the protuberances from the neuronal dendritic shafts that contain&#160; excitatory synapses. The morphological and branching ...