Name: whole mount rna fluorescent in situ hybridization of drosophila embryos
Uploaded: 2013-01-30T13:00:00
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काम Lécuyer प्रयोगशाला में आयोजित राष्ट्रीय विज्ञान और कनाडा के इंजीनियरिंग परिषद (NSERC), स्वास्थ्य (CIHR) अनुसंधान और Fonds डे Recherche एन Sante du क्यूबेक (FRSQ) की कनाडा के संस्थानों से धन के द्वारा समर्थित है. Fabio एलेक्सिस Lefebvre और Moquin Beaudry Gaël NSERC स्नातक अनुसंधान studentships द्वारा समर्थित हैं, जबकि कैरोल Iampietro एंजेलो Pizzagalli postdoctoral फैलोशिप द्वारा समर्थित है.

1. शाही सेना जांच तैयारी अवलोकन: निम्न अनुभाग Digoxigenin (डीआईजी) लेबल आरएनए मछली के लिए उपयुक्त जांच करने के लिए आवश्यक कदम का वर्णन है. पहला कदम क्लोनिंग या पीसीआर एक ब्याज की एक जीन है कि एक अन...

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	<li>Wilcox, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamental+principles+of+in+situ+hybridization.">Fundamental principles of in situ hybridization.</a> J. Histochem. 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जांच संश्लेषण कदम के लिए, हम आम तौर पर पूरी लंबाई ड्रोसोफिला ड्रोसोफिला जीन संग्रह (क्लब), निम्नलिखित वेबसाइट पर विस्तृत संसाधन में पाया प्लाज़मिड से amplified cDNAs से विट्रो प्रतिलेखन में रन दूर antisense...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक के नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियां (वैकल्पिक) </td></tr><tr><td> T7, T3 या SP6 शाही सेना पोलीमरेज़ </td><td> Fermentas लाइफ साइंसेज </td><td> EP0101, EP0111 EP0131 </td><td> किट प्रतिक्रिया बफर होते हैं. </td></tr><tr><td> डीआईजी शाही सेना लेबलिंग मिक्स </td><td> Roche एप्लाइड साइंस </td><td> 11 073 910 277 </td><td></td></tr><tr><td> RNAguard </td><td> Amersham बायोसाइंसेज </td><td> 27-0816-01 </td><td></td></tr><tr><td> 3M सोडियम एसीटेट </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> शीत 100% इथेनॉल. </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> शीत 70% इथेनॉल. </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> क्लोरीन ब्लीच समाधान के पानी के साथ 1:1 पतला. </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> हेपटैन </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> मेथनॉल </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> proteinase कश्मीर </td><td> सिग्मा Aldrich Oakville, पर, कनाडा </td><td> कैटलॉग सं P2308 </td><td></td></tr><tr><td> 40% formaldehyde समाधान, हौसले से तैयार </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> पीबीएस के बीच समाधान (पीबीटी) </td><td></td><td> 1xPBS, 0.1% Tween-20 </td><td></td></tr><tr><td> Glycine समाधान </td><td></td><td> 2 मिलीग्राम / मिलीलीटर ग्लाइसिन पीबीटी में </td><td></td></tr><tr><td> एचआरपी संयुग्मित मोनोक्लोनल माउस विरोधी डीआईजी </td><td> जैक्सन ImmunoResearch प्रयोगशालाओं इंक </td><td> 200-032 - 156 </td><td> (1 मिलीग्राम / PBTB में मिलीलीटर स्टॉक समाधान के कमजोर पड़ने 1/400 </td></tr><tr><td> एचआरपी संयुग्मित भेड़ मोनोक्लोनल विरोधी डीआईजी </td><td> Roche एप्लाइड वैज्ञानिकCE, Laval, QC </td><td> 1 733 +२०७ </td><td> PBTB में 1/500 स्टॉक समाधान के कमजोर पड़ने </td></tr><tr><td> बायोटिन - संयुग्मित माउस मोनोक्लोनल विरोधी डीआईजी </td><td> जैक्सन ImmunoResearch लेबोरेटरीज इंक, पश्चिम Grove, PA, संयुक्त राज्य अमेरिका </td><td> 200-062-156 </td><td> (1 मिलीग्राम / PBTB में मिलीलीटर स्टॉक समाधान के कमजोर पड़ने 1/400 </td></tr><tr><td> Streptavidin-एचआरपी संयुग्म </td><td> आणविक जांच यूजीन, या, संयुक्त राज्य अमेरिका </td><td> S991 </td><td> (1/100 एक स्टॉक 1 / ग्राम मिलीलीटर के कमजोर पड़ने </td></tr></tbody></table>

whole mount rna fluorescent in situ hybridization of drosophila embryos

विकास के दौरान अपने जैविक समारोह को समझने के लिए एक जीन है, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अपनी लिखित शाही सेना के subcellular स्थानीयकरण गुण, की अभिव्यक्ति पैटर्न का आकलन प्रमुख विशेषताएं हैं. स्वस्थानी संकरण में शाही सेना (आरएनए-ish) एक शक्तिशाली शाही सेना वितरण गुणों visualizing के लिए विधि का इस्तेमाल किया है, यह जीवधारी, सेलुलर या subcellular 1 स्तर पर हो. शाही सेना ISH एक लेबल न्यूक्लिक एसिड (जैसे antisense शाही सेना, oligonucleotides) जांच एक mRNA या एक गैर कोडन 2 ब्याज की शाही सेना लक्ष्य के अनुक्रम के लिए पूरक के संकरण पर आधारित है. प्रक्रिया के रूप में प्राथमिक अनुक्रम जानकारी अकेले अनुक्रम विशेष जांच उत्पन्न करने की आवश्यकता है, यह सार्वभौमिक जीवों और ऊतक नमूनों 3 की एक व्यापक श्रृंखला के लिए लागू किया जा सकता है. दरअसल, बड़े पैमाने पर ISH अध्ययन के एक नंबर के लिए जीन की अभिव्यक्ति दस्तावेज और विभिन्न मॉडल जीवों में स्थानीयकरण गतिशीलता शाही सेना के लिए लागू किया गया है, जो करने के लिए नेतृत्व किया गया हैमहत्वपूर्ण समुदाय 4-11 संसाधनों की स्थापना. जबकि जांच लेबलिंग और पहचान की रणनीतियों की एक किस्म के वर्षों में विकसित किया है, fluorescently लेबल का पता लगाने अभिकर्मकों और enzymatic संकेत प्रवर्धन कदम का संयुक्त उपयोग संवेदनशीलता और 12 प्रक्रिया के संकल्प में महत्वपूर्ण वृद्धि की पेशकश करते हैं. यहाँ, हम स्वस्थानी संकरण (मछली) विधि tyramide संकेत प्रवर्धन (TSA) रोजगार के लिए शाही सेना और मंचन किया भ्रूण ड्रोसोफिला में अभिव्यक्ति स्थानीयकरण गतिशीलता कल्पना में एक अनुकूलित फ्लोरोसेंट का वर्णन करता है. प्रक्रिया बाहर 96-अच्छी तरह से पीसीआर थाली प्रारूप है, जो बहुत से नमूनों की बड़ी संख्या के साथ - साथ प्रसंस्करण की सुविधा में किया जाता है.

जब सफलतापूर्वक प्रदर्शन किया, इस प्रक्रिया को जल्दी ड्रोसोफिला embryogenesis दौरान जीन अभिव्यक्ति और mRNA स्थानीयकरण गतिशीलता के spatio-अस्थायी विश्लेषण में एक विस्तार के strikingly बढ़ाया स्तर प्रदान करता है. वास्तव...

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Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

यहाँ हम एक पूरी माउंट फ्लोरोसेंट का वर्णन<em&gt; स्वस्थानी में</em&gt; RNAs की अभिव्यक्ति और स्थानीयकरण फल मक्खी में embryogenesis दौरान व्यक्त गुण का निर्धारण करने के लिए संकरण प्रोटोकॉल (मछली),<em&gt; ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em&gt;.

पूरे माउंट आरएनए प्रतिदीप्त<em&gt; स्वस्थानी में</em&gt; संकरण<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; भ्रूण

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

Research

JoVE Journal

Biology

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The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

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Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

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Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

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पूरे माउंट<em&gt; स्वस्थानी में</em&gt; E8.5 E11.5 माउस भ्रूण संकरण

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

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वायरल शाही सेना के प्रतिदीप्ति द्वारा जांच<em&gt; बगल में</em&gt; संकरण (मछली)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

एकल कोशिका के जीन प्रतिलेखन की शाही सेना प्रतिदीप्त द्वारा विश्लेषण<em&gt; स्वस्थानी</em&gt; संकरण (मछली)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

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क्रोमोजोम नकल फ्लोरोसेंट के साथ संयुक्त समय<em&gt; सीटू में</em&gt; संकरण

Mammalian DNA replication initiates at multiple sites along chromosomes at different times during S phase, following a temporal replication program. The ...

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

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आरएनए<em&gt; सीटू में</em&gt; पूरे माउंट भ्रूण और सेल हिस्टोलॉजि में संकरण समुद्री Elasmobranchs के लिए अनुकूलित

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

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उच्च संकल्प पूरा पर्वत<em&gt; स्वस्थानी</emजीन एक्सप्रेशन और समारोह का अध्ययन करने के Zebrafish भ्रूण भीतर&gt; संकरण

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

सक्रिय कस्पासे 3 का पता लगाने के लिए पूरे माउंट immunofluorescence द्वारा zebrafish भ्रूण में apoptosis के विश्लेषण

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...