Name: measurement of lifespan in drosophila melanogaster
Uploaded: 2013-01-07T13:00:00
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Diese Arbeit wurde durch Mittel aus dem Ellison Medical Foundation (SDP unterstützt <a href="http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp" target="_blank">http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp</a> ), NIH K01AG031917 (NJL, <a href="http://www.nih.gov" target="_blank">http://www.nih.gov/</a> ), NIH 5T32GM007315-35 (JR) und NIH R01AG030593 (SDP). Diese Arbeit verwendet die Ressourcen des Drosophila Aging Core (DAC) der Nathan Shock Center of Excellence in der Biologie des Alterns von der National Institute of Aging P30-AG-013.283 (gefördert <a href="http://www.nih.gov" target="_blank">http://www.nih.gov/</a> ). Die Autoren möchten die Pletcher Labor für hilfreiche Diskussionen und vor allem Brian Chung für die kritische Durchsicht des Manuskripts danken. Wir möchten Nick Asher und Kathryn Borowicz für die Unterstützung bei der Datenerhebung zu bestätigen.

Wir empfehlen die Lagerung experimentellen Lebensmittel, Hefepaste und Trauben Agarplatten, die im Protokoll erscheinen bei 4 ° C und mit ihnen innerhalb von 1-2 Monaten, solange Form und Trockenheit nicht in. Norm Umgebungsbedingungen sowohl für die Larven und erwachsenen gesetzt inszenieren beinhalten Wartung von Fliegen in einem Brutschrank bei 25 ° C mit einem 12:12 h Licht-Dunkel-Zyklus und 60% relativer Luftfeuchtigkeit. Ein. Vorbereitung für Experimentelle Küche <ol><li> Für L...

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	<li>Toivonen, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=No+influence+of+Indy+on+lifespan+in+Drosophila+after+correction+for+genetic+and+cytoplasmic+background+effects.">No influence of Indy on lifespan in Drosophila after correction for genetic and cytoplasmic background effects.</a> PLoS Genet. 3, e95 (2007).</li><li>Spencer, C. C., Howell, C. E., Wright, A. R., Promislow, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+an+'aging+gene'+in+long-lived+drosophila+strains:+increased+longevity+depends+on+sex+and+genetic+background.">Testing an 'aging gene' in long-lived drosophila strains: increased longevity depends on sex and genetic background.</a> Aging Cell. 2, 123-130 (2003).</li><li>Burnett, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+effects+of+Sir2+overexpression+on+lifespan+in+C.+elegans+and+Drosophila.">Absence of effects of Sir2 overexpression on lifespan in C. elegans and Drosophila.</a> Nature. 477, 482-485 (2011).</li><li>Bokov, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+reduced+IGF-1R+signaling+in+Igf1r+/-+mice+alter+aging?.">Does reduced IGF-1R signaling in Igf1r+/- mice alter aging?.</a> PLoS One. 6, e26891 (2011).</li><li>Lewis, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+standard+food+medium.">A new standard food medium.</a> Drosophila Information Service. 34, 117-118 (1960).</li><li>Skorupa, D. A., Dervisefendic, A., Zwiener, J., Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+composition+specifies+consumption,+obesity,+and+lifespan+in+Drosophila+melanogaster.">Dietary composition specifies consumption, obesity, and lifespan in Drosophila melanogaster.</a> Aging Cell. 7, 478-490 (2008).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog.</a> Cell Metab. 14, 623-634 (2011).</li><li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonparametric+Estimation+from+Incomplete+Observations.">Nonparametric Estimation from Incomplete Observations.</a> Journal of the American Statistical Association. 53, 457-481 (1958).</li><li>Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitigating+the+Tithonus+Error:+Genetic+Analysis+of+Mortality+Phenotypes.">Mitigating the Tithonus Error: Genetic Analysis of Mortality Phenotypes.</a> Sci. Aging Knowl. Environ. 2002, pe14 (2002).</li><li>Pletcher, S. D., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P[Switch],+a+system+for+spatial+and+temporal+control+of+gene+expression+in+Drosophila+melanogaster.">P[Switch], a system for spatial and temporal control of gene expression in Drosophila melanogaster.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 12602-12607 (2001).</li><li>Ford, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+Drosophila+life+span+using+conditional,+tissue-specific+expression+of+transgenes+triggered+by+doxycyline+or+RU486/Mifepristone.">Alteration of Drosophila life span using conditional, tissue-specific expression of transgenes triggered by doxycyline or RU486/Mifepristone.</a> Exp. Gerontol. 42, 483-497 (2007).</li><li>Priest, N. K., Mackowiak, B., Promislow, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+parental+age+effects+on+the+evolution+of+aging.">The role of parental age effects on the evolution of aging.</a> Evolution. 56, 927-935 (2002).</li><li>Smith, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+Drosophila+a+biotin-deficient+diet+for+multiple+generations+increases+stress+resistance+and+lifespan+and+alters+gene+expression+and+histone+biotinylation+patterns.">Feeding Drosophila a biotin-deficient diet for multiple generations increases stress resistance and lifespan and alters gene expression and histone biotinylation patterns.</a> J. Nutr. 137, 2006-2012 (2007).</li><li>Sorensen, J. G., Loeschcke, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+crowding+in+Drosophila+melanogaster+induces+Hsp70+expression,+and+leads+to+increased+adult+longevity+and+adult+thermal+stress+resistance.">Larval crowding in Drosophila melanogaster induces Hsp70 expression, and leads to increased adult longevity and adult thermal stress resistance.</a> J. Insect Physiol. 47, 1301-1307 (2001).</li><li>Bass, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+dietary+restriction+protocols+in+Drosophila.">Optimization of dietary restriction protocols in Drosophila.</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 62, 1071-1081 (2007).</li><li>Miquel, J., Lundgren, P. R., Bensch, K. 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P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan+and+reproduction+in+Drosophila:+New+insights+from+nutritional+geometry.">Lifespan and reproduction in Drosophila: New insights from nutritional geometry.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 2498-2503 (2008).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Experimental gerontology. 40, 386-395 (2005).</li></ol>

Die hier vorgestellten Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Herstellung reproduzierbare Messungen von erwachsenen Langlebigkeit in Drosophila die anpassungsfähig zur Beurteilung von genetischen, pharmakologischen und Umweltinterventionen ist. Zentrale Aspekte des Protokolls sind sorgfältige Kontrolle der Larven Entwicklungsumgebung, die Minimierung Erwachsenen Stress und minimieren Vorspannung über experimentelle Gruppen und Kontrollen. Außerdem stellen wir die Verwendung des dLife Lebensdauer Experiment ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare (optional) </td></tr><tr><td> Aktive Trockenhefe </td><td> Fleishmann die Hefe </td><td> 2192 </td><td></td></tr><tr><td> Grape Agar Powder Premix </td><td> Genesee Scientific </td><td> 47-102 </td><td></td></tr><tr><td> Große Embryo Kollektion Cages </td><td> Genesee Scientific </td><td> 59-101 </td><td></td></tr><tr><td> Große Replacement End Caps </td><td> Genesee Scientific </td><td> 59-103 </td><td></td></tr><tr><td> 6 Unzen Platz Bottom Flaschen, Polypropylen </td><td> Genesee Scientific </td><td> 32-130 </td><td></td></tr><tr><td> Flugs Closures for Stock Bottles </td><td> Genesee Scientific </td><td> 49-100 </td><td></td></tr><tr><td> DrosophilaVials, Wide, Polystyrol </td><td> Genesee Scientific </td><td> 32-117 </td><td></td></tr><tr><td> Flugs Verschlüsse für Wide Vials </td><td> Genesee Scientific </td><td> 49-101 </td><td></td></tr><tr><td> Weite Öffnung Aardvark Pipettenspitzen, 200 ul </td><td> Denville Scientific </td><td> P1105-CP </td><td></td></tr><tr><td> Flystuff Flypad, Standard Größe </td><td> Genesee Scientific </td><td> 59-114 </td><td></td></tr><tr><td> BD Falcon 15 ml konischen Zentrifugenröhrchen </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-959-70C </td><td></td></tr><tr><td> Fisherbrand Petrischalen mit transparenten Deckeln, Raised Ridge, 100 OD x 15 mm H; </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-12 </td><td></td></tr><tr><td> Kimax * Colorware Flaschen 1.000 ml gelb </td><td> Fisher Scientific </td><td> 10-200-47 </td><td></td></tr><tr><td> PBS pH 7,4 10x </td><td> InVitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> Gelidium Agar </td><td> Mooragar </td><td> n / a </td><td></td></tr><tr><td> Bierhefe </td><td> MP Biomedicals </td><td> 0290331280 </td><td></td></tr><tr><td> Kristallzucker </td><td> Kroger </td><td> n / a </td><td></td></tr><tr><td> Tegosept </td><td> Genesee Scientific </td><td> 20-266 </td><td> Fly Konservierungsmittel für Lebensmittel </td></tr><tr><td> Propionsäure, 99% </td><td> Acros Organics </td><td> 149300025 </td><td> Fly Konservierungsmittel für Lebensmittel </td></tr><tr><td> Kanamycinsulfat </td><td> ISC BioExpress </td><td> 0408-10G </td><td></td></tr><tr><td> Tetracycline HCl </td><td> VWR </td><td> 80058-724 </td><td></td></tr></tbody></table>

measurement of lifespan in drosophila melanogaster

Altern ist ein Phänomen, dass die Ergebnisse im stationären physiologischen Verschlechterung in nahezu allen Organismen, in denen es untersucht wurde, was zu einer verminderten körperlichen Leistungsfähigkeit und Risiko von Krankheiten erhöht. Individuelle Alterung zeigt sich auf der Ebene der Bevölkerung als eine Zunahme der altersbedingten Sterblichkeit, die oft im Labor wird durch die Beobachtung Lebensdauer gemessen in großen Kohorten von gleichaltrigen Personen. Experimente, um das Ausmaß zu quantifizieren versuchen, die genetische oder umweltbedingte Manipulationen Auswirkungen Lebensdauer in einfachen Modellorganismen haben bemerkenswert erfolgreich gewesen für das Verständnis der Aspekte des Alterns, die über Taxa und für inspirierende neue Strategien zur Verlängerung Lebensdauer und Verhinderung altersbedingter-assoziierten Erkrankungen bei Säugetieren konserviert sind . Der Essig Drosophila melanogaster, ist ein attraktives Modell für die Erforschung der Mechanismen des Alterns aufgrund seiner relativ kurze Lebensdauer, bequem Tierhaltung und einfache Genetik.Allerdings sind demografische Maßnahmen des Alterns, einschließlich des Alters-spezifische Überleben und Mortalität, außerordentlich anfällig für selbst geringfügige Abweichungen in der experimentellen Gestaltung und Umwelt und die Erhaltung der strengen Laborpraxis für die Dauer des Alterns Experimente erforderlich. Diese Überlegungen, zusammen mit der Notwendigkeit, eine genaue Steuerung des genetischen Hintergrund zu praktizieren, sind essentiell für die Erzeugung robuste Messungen. Tatsächlich gibt es viele bemerkenswerte Kontroversen um Folgerung aus Langlebigkeit Experimente in Hefe, Würmern, Fliegen und Mäusen, die Umwelt oder genetische Artefakte 1-4 wurden verfolgt. In diesem Protokoll beschreiben wir eine Reihe von Verfahren, die über viele Jahre Vermessung Langlebigkeit in Drosophila mit Labor-Fläschchen optimiert wurden. Wir beschreiben auch die Verwendung des dLife Software, die in unserem Labor entwickelt wurde und steht zum Download (erhältlich <a href="http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software">http://sitemaker.umich.edu/ple</a>tcherlab / Software). dLife beschleunigt den Durchsatz und fördert gute Praktiken, indem optimale Versuchsplanung, Vereinfachung fly Handhabung und Datenerfassung und Standardisierung von Daten-Analyse. Wir diskutieren auch die vielen Fallstricke in der Entwicklung, Sammlung und Interpretation der Lebensdauer von Daten, und wir bieten vor, um diese Gefahren zu vermeiden.

Ein vereinfachtes Schema des Protokolls ist in Abbildung 1, wo wichtige Schritte skizziert vorgestellt. Die Synchronisation Teil des Protokolls können für verschiedene Assays, altersangepassten erwachsenen Fliegen erfordern. Typische Überlebensrate Kurven von Wildtyp-Fliegen sind in Abbildung 2a dargestellt, mit dem dLife Experiment-Management-Software (Abb. 2b, c). Erwachsene Männchen leben meist kürzer, beide Populationen erreichen ei...

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Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster ist ein leistungsfähiges Modell für die Erkundung der molekularen Grundlagen der Langlebigkeit Regulierung. Dieses Protokoll diskutieren die Schritte bei der Erzeugung eines reproduzierbaren, population-based Messung der Lebensdauer sowie potenzielle Fallstricke und wie man sie vermeidet beteiligt.

Messung der Lebensdauer in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Dissection der Larven ZNS von Drosophila melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

Forschung

Biologie

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Hochauflösendes Video Tracking von Locomotion in Adult Drosophila melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Überwachung Herzfunktion Larven Drosophila melanogaster Für physiologische Untersuchungen

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained  and  ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live-Bildgebung Drosophila melanogaster Embryonale Hemocyte Migrationen

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Präparation Oenocytes von Adult Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolierung von Drosophila melanogaster Testes

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

Imaging Durch die Puppenhülle von<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Messung der Stoffwechselrate in<em&gt; Drosophila</em&gt; Mit Respirationstest

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Verbesserte Northern Blot Detektion von kleinen RNA-Spezies in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular ...

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Aufrechterhaltung eines<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Bevölkerung Cage

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...