Name: measurement of lifespan in drosophila melanogaster
Uploaded: 2013-01-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster at JoVE.com

Este trabalho foi suportado pelo financiamento do Medical Ellison Foundation (SDP, <a href="http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp" target="_blank">http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp</a> ), NIH K01AG031917 (NJL, <a href="http://www.nih.gov" target="_blank">http://www.nih.gov/</a> ), NIH 5T32GM007315-35 (JR) e NIH R01AG030593 (SDP). Este trabalho utilizou os recursos do Envelhecimento Drosophila Core (DAC) do Centro de Choque Nathan de Excelência em biologia do envelhecimento financiado pelo Instituto Nacional do Envelhecimento P30-AG-013283 ( <a href="http://www.nih.gov" target="_blank">http://www.nih.gov/</a> ). Os autores gostariam de agradecer ao Laboratório Pletcher para discussões úteis e particularmente Brian Chung para a leitura crítica do manuscrito. Nós gostaríamos de agradecer Nick Asher e Kathryn Borowicz para a assistência com a coleta de dados.

Recomendamos armazenar alimentos experimentais, pasta de levedura e placas de agar de uva que aparecem no protocolo, a 4 ° C e utilizando-os dentro de 1-2 meses, desde que o molde e secura não tiver definido dentro das condições ambientais padrão, tanto para o larvar e adulto estágio envolve a manutenção de moscas em uma incubadora a 25 ° C com um ciclo de 12:12 horas de luz escura e 60% de humidade relativa. 1. Preparação de Alimentos Experimental <ol><li> Para o crescimento la...

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	<li>Toivonen, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=No+influence+of+Indy+on+lifespan+in+Drosophila+after+correction+for+genetic+and+cytoplasmic+background+effects.">No influence of Indy on lifespan in Drosophila after correction for genetic and cytoplasmic background effects.</a> PLoS Genet. 3, e95 (2007).</li><li>Spencer, C. C., Howell, C. E., Wright, A. R., Promislow, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+an+'aging+gene'+in+long-lived+drosophila+strains:+increased+longevity+depends+on+sex+and+genetic+background.">Testing an 'aging gene' in long-lived drosophila strains: increased longevity depends on sex and genetic background.</a> Aging Cell. 2, 123-130 (2003).</li><li>Burnett, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+effects+of+Sir2+overexpression+on+lifespan+in+C.+elegans+and+Drosophila.">Absence of effects of Sir2 overexpression on lifespan in C. elegans and Drosophila.</a> Nature. 477, 482-485 (2011).</li><li>Bokov, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+reduced+IGF-1R+signaling+in+Igf1r+/-+mice+alter+aging?.">Does reduced IGF-1R signaling in Igf1r+/- mice alter aging?.</a> PLoS One. 6, e26891 (2011).</li><li>Lewis, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+standard+food+medium.">A new standard food medium.</a> Drosophila Information Service. 34, 117-118 (1960).</li><li>Skorupa, D. A., Dervisefendic, A., Zwiener, J., Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+composition+specifies+consumption,+obesity,+and+lifespan+in+Drosophila+melanogaster.">Dietary composition specifies consumption, obesity, and lifespan in Drosophila melanogaster.</a> Aging Cell. 7, 478-490 (2008).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog.</a> Cell Metab. 14, 623-634 (2011).</li><li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonparametric+Estimation+from+Incomplete+Observations.">Nonparametric Estimation from Incomplete Observations.</a> Journal of the American Statistical Association. 53, 457-481 (1958).</li><li>Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitigating+the+Tithonus+Error:+Genetic+Analysis+of+Mortality+Phenotypes.">Mitigating the Tithonus Error: Genetic Analysis of Mortality Phenotypes.</a> Sci. Aging Knowl. Environ. 2002, pe14 (2002).</li><li>Pletcher, S. D., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P[Switch],+a+system+for+spatial+and+temporal+control+of+gene+expression+in+Drosophila+melanogaster.">P[Switch], a system for spatial and temporal control of gene expression in Drosophila melanogaster.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 12602-12607 (2001).</li><li>Ford, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+Drosophila+life+span+using+conditional,+tissue-specific+expression+of+transgenes+triggered+by+doxycyline+or+RU486/Mifepristone.">Alteration of Drosophila life span using conditional, tissue-specific expression of transgenes triggered by doxycyline or RU486/Mifepristone.</a> Exp. Gerontol. 42, 483-497 (2007).</li><li>Priest, N. K., Mackowiak, B., Promislow, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+parental+age+effects+on+the+evolution+of+aging.">The role of parental age effects on the evolution of aging.</a> Evolution. 56, 927-935 (2002).</li><li>Smith, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+Drosophila+a+biotin-deficient+diet+for+multiple+generations+increases+stress+resistance+and+lifespan+and+alters+gene+expression+and+histone+biotinylation+patterns.">Feeding Drosophila a biotin-deficient diet for multiple generations increases stress resistance and lifespan and alters gene expression and histone biotinylation patterns.</a> J. Nutr. 137, 2006-2012 (2007).</li><li>Sorensen, J. G., Loeschcke, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+crowding+in+Drosophila+melanogaster+induces+Hsp70+expression,+and+leads+to+increased+adult+longevity+and+adult+thermal+stress+resistance.">Larval crowding in Drosophila melanogaster induces Hsp70 expression, and leads to increased adult longevity and adult thermal stress resistance.</a> J. Insect Physiol. 47, 1301-1307 (2001).</li><li>Bass, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+dietary+restriction+protocols+in+Drosophila.">Optimization of dietary restriction protocols in Drosophila.</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 62, 1071-1081 (2007).</li><li>Miquel, J., Lundgren, P. R., Bensch, K. G., Atlan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+on+the+life+span,+vitality+and+fine+structure+of+Drosophila+melanogaster.">Effects of temperature on the life span, vitality and fine structure of Drosophila melanogaster.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 5, 347-370 (1976).</li><li>Pittendrigh, C. S., Minis, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+systems:+longevity+as+a+function+of+circadian+resonance+in+Drosophila+melanogaster.">Circadian systems: longevity as a function of circadian resonance in Drosophila melanogaster.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 1537-1539 (1972).</li><li>Joshi, A., Mueller, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+crowding+effects+on+longevity+in+Drosophila+melanogaster:+Increase+in+age-dependent+mortality.">Adult crowding effects on longevity in Drosophila melanogaster: Increase in age-dependent mortality.</a> Current Science. 72, 255-260 (1997).</li><li>Ja, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prandiology+of+Drosophila+and+the+CAFE+assay.">Prandiology of Drosophila and the CAFE assay.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 8253-8256 (2007).</li><li>Lee, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan+and+reproduction+in+Drosophila:+New+insights+from+nutritional+geometry.">Lifespan and reproduction in Drosophila: New insights from nutritional geometry.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 2498-2503 (2008).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Experimental gerontology. 40, 386-395 (2005).</li></ol>

O protocolo aqui apresentado descreve um método para produzir medições reprodutíveis da longevidade da Drosophila, que é adaptável para a avaliação de intervenções farmacológicas, genéticos e ambientais. Aspectos cruciais do protocolo incluem controlando cuidadosamente o ambiente de desenvolvimento larval, minimizando o estresse do adulto, e minimizando o viés entre os grupos experimentais e controles. Apresentamos também a utilização do software de gestão DLIFE vida experiência. Por simplesme...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> Levedura seca ativa </td><td> Fermento Fleishmann de </td><td> 2192 </td><td></td></tr><tr><td> Premix em Pó Uva Agar </td><td> Genesee Científico </td><td> 47-102 </td><td></td></tr><tr><td> Gaiolas grande coleção de Embriões </td><td> Genesee Científico </td><td> 59-101 </td><td></td></tr><tr><td> Tampas grandes substituição </td><td> Genesee Científico </td><td> 59-103 </td><td></td></tr><tr><td> 6 onças Praça Garrafas de fundo, de polipropileno </td><td> Genesee Científico </td><td> 32-130 </td><td></td></tr><tr><td> Tampas para garrafas Banco Flugs </td><td> Genesee Científico </td><td> 49-100 </td><td></td></tr><tr><td> DrosophilaFrascos, Geral, Polystrene </td><td> Genesee Científico </td><td> 32-117 </td><td></td></tr><tr><td> Closures Flugs para frascos largos </td><td> Genesee Científico </td><td> 49-101 </td><td></td></tr><tr><td> Largos Orifice Aardvark pontas de pipeta, 200 ul </td><td> Denville Científico </td><td> P1105-CP </td><td></td></tr><tr><td> Flystuff Flypad, tamanho padrão </td><td> Genesee Científico </td><td> 59-114 </td><td></td></tr><tr><td> BD Falcon 15 ml cónicas Tubos da centrífuga </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-959-70C </td><td></td></tr><tr><td> Pratos Fisherbrand Petri com Tampas Limpar, levantou cume, 100 OD x 15 mm H; </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-12 </td><td></td></tr><tr><td> Kimax * Colorware frascos 1000 ml amarelo </td><td> Fisher Scientific </td><td> 10-200-47 </td><td></td></tr><tr><td> PBS pH 7,4 10x </td><td> EmVitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> Agar Gelidium </td><td> Mooragar </td><td> n / a </td><td></td></tr><tr><td> Levedura de Cerveja </td><td> Biomedicals MP </td><td> 0290331280 </td><td></td></tr><tr><td> Açúcar granulado </td><td> Kroger </td><td> n / a </td><td></td></tr><tr><td> Tegosept </td><td> Genesee Científico </td><td> 20-266 </td><td> Fly conservante de alimentos </td></tr><tr><td> Ácido propiónico, 99% </td><td> Acros Organics </td><td> 149300025 </td><td> Fly conservante de alimentos </td></tr><tr><td> Sulfato de canamicina </td><td> ISC BioExpress </td><td> 0408-10G </td><td></td></tr><tr><td> Tetraciclina HCl </td><td> VWR </td><td> 80058-724 </td><td></td></tr></tbody></table>

measurement of lifespan in drosophila melanogaster

O envelhecimento é um fenômeno que resulta na deterioração fisiológica constante em quase todos os organismos em que foi examinado, levando à redução do desempenho físico e aumento do risco de doenças. Envelhecimento individual se manifesta ao nível da população como um aumento dependente da idade de mortalidade, que é muitas vezes medido em laboratório, observando vida em grandes grupos de indivíduos da mesma idade. Experiências que visam quantificar a extensão em que as manipulações genéticas ou ambientais impacto esperança de vida dos organismos modelo simples foram coroados de êxito para a compreensão dos aspectos do envelhecimento que são conservadas entre taxa e para inspirar novas estratégias para prolongar vida útil e prevenção de doenças associadas à idade nos mamíferos . A mosca do vinagre, Drosophila melanogaster, é um organismo modelo atractivo para estudar os mecanismos de envelhecimento devido ao seu tempo de vida relativamente curto, a criação conveniente, e genética fáceis.No entanto, medidas demográficas de envelhecimento, incluindo a idade específica de sobrevivência e mortalidade, são extremamente suscetíveis a variações ainda menores em delineamento experimental e meio ambiente, e para a manutenção de práticas estritas de laboratório para a duração dos experimentos de envelhecimento é necessária. Estas considerações, juntamente com a necessidade de praticar o controle cuidadoso do fundo genético, são essenciais para a geração de medições robustos. Na verdade, há muitas controvérsias em torno notáveis ​​inferência a partir de experimentos de longevidade em leveduras, vermes, moscas e ratos que foram traçadas a artefatos ambientais ou genéticos 1-4. Neste protocolo, descrevemos um conjunto de procedimentos que foram otimizados ao longo de muitos anos de medir a longevidade em Drosophila utilizando frascos de laboratório. Descrevemos também o uso do software DLIFE, que foi desenvolvido pelo nosso laboratório e está disponível para download ( <a href="http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software">http://sitemaker.umich.edu/ple</a>tcherlab / software). DLIFE acelera o rendimento e promove as boas práticas, incorporando melhor projeto experimental, simplificar a manipulação mosca e coleta de dados, padronização e análise de dados. Também vamos discutir as muitas armadilhas em potencial no projeto, coleta e interpretação de dados de expectativa de vida, e nós fornecemos medidas para evitar esses perigos.

Um esquema simplificado do protocolo é apresentada na Figura 1, em que os passos principais são delineadas. A parte do protocolo de sincronização podem ser utilizados para ensaios diferentes que necessitam de moscas adultas pareados por idade. As curvas de sobrevivência típicas de moscas do tipo selvagem são mostradas na Figura 2a, utilizando o software de gestão de DLIFE experiência (Figura 2b, c). Machos adultos geralmente vivem m...

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Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster é um organismo modelo eficaz para explorar a base molecular da regulação da longevidade. Este protocolo irá discutir as etapas envolvidas na criação de um reprodutível, medição de base populacional de longevidade, bem como potenciais armadilhas e como evitá-los.

Medição do Tempo de vida em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Dissecção do CNS Larval em Drosophila melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

Biologia

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

De alta resolução de vídeo de Rastreamento Locomotion em Adult Drosophila melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

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Função de monitorização cardíaca em larval Drosophila melanogaster Para estudos fisiológicos

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained  and  ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

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Imagens ao vivo de Drosophila melanogaster Embrionárias Migrações hemócitos

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

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Dissecção da Oenocytes de Adultos Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

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Isolamento de Drosophila melanogaster Testes

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

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Imagem Através do Pupal Caso de<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

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A medição da taxa metabólica em<em&gt; Drosophila</em&gt; Usando respirometria

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

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Aprimorada do Norte Detecção Blot de pequeno RNA de espécies em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular ...

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

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Manutenção de um<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Gaiola População

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...