Name: forebrain electrophysiological recording in larval zebrafish
Uploaded: 2013-01-24T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish at JoVE.com

Yazar laboratuarda zebrafish kurmak onların erken çabalarına Peter Castro ve Matthew Dinday teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Sağlık EUREKA hibe (# R01NS079214-01) Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından finanse edildi.

1. Yumurta Üretim ve Toplama <ol><li> Zebra balığı yetiştiriciliği daha önce 8 açıklanan standart prosedürleri izler. Kısaca, yetişkin zebrafish yerde bölücüler ile tanklar üreme kurulur. Oda ışıkları ertesi sabah geldiğinde, bölücüler tank ve balık rahatsız çiftleşme zamanı yaklaşık 20 ila 60 dakika izin üreme kaldırılır. </li><li> Yetiştirme tanklarından Yumurta bir süzgeç toplanır ve yumurta su ile durulanır. Yumurta sonra yumurta su ile bir Petri kabı aktarılı...

<ol>
	<li>Clark, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stressing+zebrafish+for+behavioral+genetics.">Stressing zebrafish for behavioral genetics.</a> Reviews in Neuroscience. 22 (1), 49 (2011).</li><li>Rinkwitz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+an+integrative+system+for+neurogenomics+and+neurosciences.">Zebrafish: an integrative system for neurogenomics and neurosciences.</a> Progress in Neurobiology. 93 (2), 231 (2011).</li><li>Penberthy, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+as+a+model+for+human+disease.">The zebrafish as a model for human disease.</a> Frontiers in Bioscience. 7, d1439 (2002).</li><li>Letamendia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+an+automated+high-throughput+system+for+zebrafish+in+vivo+screenings.">Development and validation of an automated high-throughput system for zebrafish in vivo screenings.</a> PLoS One. 7, e36690 (2012).</li><li>Nasevicius, A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+targeted+gene+'knockdown'+in+zebrafish.">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nature Genetics. 26 (2), 216 (2000).</li><li>Haffter, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+affecting+development+of+the+zebrafish+inner+ear+and+lateral+line.">Mutations affecting development of the zebrafish inner ear and lateral line.</a> Development. 123, 1 (1996).</li><li>Suster, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenesis+in+zebrafish+with+the+tol2+transposon+system.">Transgenesis in zebrafish with the tol2 transposon system.</a> Methods Molecular Biology. 561, 41 (2009).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).</li><li>Baraban, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazole+induced+changes+in+zebrafish+behavior,+neural+activity+and+c-fos+expression.">Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression.</a> Neuroscience. 131 (3), 759 (2005).</li><li>Baraban, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large-scale+mutagenesis+screen+to+identify+seizure-resistant+zebrafish.">A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish.</a> Epilepsia. 48 (6), 1151 (2007).</li><li>Williams, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+radiotelemetry+to+evaluate+electrographic+seizures+in+rats+with+kainate-induced+epilepsy.">The use of radiotelemetry to evaluate electrographic seizures in rats with kainate-induced epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 155 (1), 39 (2006).</li><li>Marsh, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interictal+EEG+spikes+identify+the+region+of+electrographic+seizure+onset+in+some,+but+not+all,+pediatric+epilepsy+patients.">Interictal EEG spikes identify the region of electrographic seizure onset in some, but not all, pediatric epilepsy patients.</a> Epilepsia. 51 (4), 592 (2010).</li><li>Zhu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+application+of+modularly+assembled+zinc-finger+nucleases+in+zebrafish.">Evaluation and application of modularly assembled zinc-finger nucleases in zebrafish.</a> Development. 138 (20), 4555 (2011).</li></ol>

Burada sunulan ekstraselüler kayıt yöntemi, beyin aktivitesinde çok hassas ve hızlı analizine olanak sağlar. Bu kayıtlar genellikle epilepsi 11 ve hastaların 12 kemirgen modellerinde anormal elektriksel deşarj (yani, nöbet) varlığını değerlendirmek için kullanılan elektroensefalografi (EEG) izleme ile benzerdir. Burada gösterildiği gibi ekstraselüler kayıtları, farmakolojik manipülasyonlar ile kombine edilebilir. Kayıtları Bu tip de genetik olarak modifiye edilmi?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Agaroz düşük erime </td><td> Fisher-Bilimsel </td><td> BP1360-100 </td><td> % 1,2 embriyo ortamda çözülür </td></tr><tr><td> Kayıt ortamı </td><td> Fisher-Bilimsel </td><td> BP3581, P330-3, BP410-1, BP214-500, D16-1, C77-500 </td><td> 1 mM NaCI, 2.9 mM KCI, 10 mM HEPES, 1.2 mM MgCl2, 10 mM dekstroz, 2.1 mM CaCl2 1 N NaOH ile pH değeri yaklaşık olarak 7.3 ile </td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> Argent Laboratuvarları </td><td> MS-222 </td><td> % 0.02 &#39; </td></tr><tr><td> α-bungarotoxin </td><td> Bioscience Tocris </td><td> 2133 </td><td> 1 mg / ml </td></tr><tr><td> Kılcal cam boru </td><td> Warner Instruments </td><td> G120TF-3 </td><td> MΩ 2 -7 bir direnç çekin </td></tr><tr><td> Yama kelepçe amplifikatör </td><td> Warner Instruments </td><td> PC-505B </td><td> Biz mevcut-klemp modunda bir Warner amplifikatör kullanmak; Kazanç 2K ayarlanır 2 mV / pA ve Bessel filtre ayarlanmıştır. Karşılaştırılabilir model üreticinin talimatlarına göre kullanılır. </td></tr><tr><td> Filtre / amplifikatör </td><td> Kuğu Teknoloji </td><td> FLA-01 </td><td> 10-20 ayarlanır Kazanç;; 1-2K ayarlanmış Kesim frekansı; Notch filtresi IN Biz Cygnus pre-amplifikatör kullanın. Karşılaştırılabilir model üreticinin talimatlarına göre kullanılır. </td></tr><tr><td> Akson A / D kurulu ve Axoscope yazılımı </td><td> Molecular Devices </td><td> Akson Digidata 1320A; Axoscope 8.2 </td><td> Veri boşluğu serbest edinimi modunu kullanarak Axoscope toplanır; 10 kHz örnekleme. Karşılaştırılabilir modelleri ve programları üreticinin talimatlarına göre kullanılır. </td></tr><tr><td> Yumurta su </td><td&gt; Anında Okyanus </td><td></td><td> 3 g Anında Okyanusu deniz tuzu, 10 ml deiyonize su içinde 2 mL% 0.1 &#39;lik metilen mavisi </td></tr></tbody></table>

forebrain electrophysiological recording in larval zebrafish

Epilepsi Amerika Birleşik Devletleri yaklaşık 3 milyon kişi kadar ve 50 milyon kişi dünya çapında etkiler. Spontan nöbetlerle oluşumu olarak tanımlanan, epilepsi beyin ya da genetik bir mutasyon bir hakaret sonucunda elde edilebilir. Hayvanlarda modeli nöbet çabaları öncelikle kullanılan kemirgenlerde hakaret (konvülsan ilaçlar, uyarılma ya da beyin hasarı) ve genetik manipülasyonlar (antisens demonte, homolog rekombinasyon veya transgenesis) almış. Zebra balığı kemirgen tabanlı epilepsi araştırma için değerli bir alternatif sunabilecek bir omurgalı model sistem 1-3 vardır. Zebra balığı omurgalı genetik veya geliştirme çalışmalarında yaygın olarak kullanılan, memeliler için genetik benzerlik yüksek dereceli ve bilinen insan tek gen epilepsi mutasyonların ~% 85 homologları ifade. Çünkü onların küçük boyutlu (4-6 mm uzunlukta) arasında zebrafish larva erken gelişim ve arra sırasında 100 ul gibi düşük sıvı hacmi muhafaza edilebilirçok oyuklu plakalar içinde yapabilirler. Reaktifler embriyolar ilaç uygulaması basitleştirilmesi ve test bileşiklerinin in vivo 4 tarama hızlı sağlayan, geliştiği çözeltiye doğrudan ilave edilebilir. Sentetik oligonükleotidler (morpholinos), mutagenez, çinko parmak nükleaz ve transgenik yaklaşımlar hızla 5-7 zebrafish gen devirme veya mutasyon oluşturmak için de kullanılabilir. Bu özellikler zebrafish çalışmalarda epilepsi gibi nörolojik hastalıkların çalışmada kemirgenler üzerinde görülmemiş bir istatistiksel güç analizi avantajı göze. Epilepsi araştırma için &quot;altın standart&quot; merkezi bir beyin yapısı (yani, nöbetler), verimli larva zebrafish beyin aktivitesini kaydetmek için bir yöntem menşeli anormal elektrik deşarjı izlemek ve analiz etmek için burada tanımlanmıştır. Bu yöntem geleneksel ekstraselüler kayıt teknikleri bir uyarlamasıdır ve sağlam zebrafish larvaları beyin aktivitesinin istikrarlı, uzun vadeli izleme için izin verir. Sbol kayıtları bir genetiği değiştirilmiş balık kaydedilen konvülsan ilaçlar ve spontan nöbetlerin banyo uygulaması ile oluşturulan akut nöbetler için gösterilmiştir.

Bir agar-gömülü zebrafish larvalarının ön beyin kaydedilen elektrografik nöbet gibi deşarj örnekleri Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Veya 1 mM picrotoxin (B; 8 dpf); bu örneklerdeki Büyük genlikli çoklu başak patlama boşalma konvülsan ilacın banyo uygulaması, 40 mM pilokarpin (6 dpf&#39;e A) tarafından uyarılmış oldu. Bu kayıtlar içinde, immobilize ve agar-gömülü zebrafish sürekli 90 dk kadar izlenir. Balık kadar 24 saat için bu kayıt koşullarında canlı kalır. İla?...

Watch this Scientific Journal Video about Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish at JoVE.com

Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

Larva zebrafish önbeyin ekstrasellüler alanın potansiyellerini kaydetmek için basit bir yöntem tarif edilmiştir. Yöntem, bir sağlam içerir<em&gt; In vivo</em&gt; Salt üzerinden aktivite nöbet gibi. Bu teknik, epilepsi ile ilişkili genlerin ya da konvülsan ilaçların verilmesi ile uyarılmış nöbetler taşıyan genetik olarak modifiye edilmiş zebrafish larvaları ile birlikte de kullanılabilir.

Larva Zebra balığı olarak önbeyin Elektrofizyolojik Kaydı

Epilepsy affects nearly 3 million people in the United States and up to 50 million people worldwide. Defined as the occurrence of spontaneous unprovoked ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Gelişmekte olan Zebra balığı önbeyin klonal olarak ilişkilidir Sinir Progenitör Hücreler Zaman atlamalı Canlı Görüntüleme

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Nörobilim

Simultaneous Electrophysiological Recording and Calcium Imaging of Suprachiasmatic Nucleus Neurons

Eşzamanlı Elektrofizyolojik Kayıt ve Suprakiazmatik Nucleus Nöronlar Kalsiyum Görüntüleme

Simultaneous electrophysiological and fluorescent imaging recording methods were used to study the role of changes of membrane potential or current in ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

Sağlam Yetişkin Zebra balığı Beyin Elektrofizyolojik Kayıt

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

A Method for Systematic Electrochemical and Electrophysiological Evaluation of Neural Recording Electrodes

Sinir Kayıt Elekrtotların Sistematik Elektrokimyasal ve Elektrofizyolojik Değerlendirme için Bir Yöntem

New materials and designs for neural implants are typically tested separately, with a demonstration of performance but without reference to other implant ...

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

Elektrofizyolojik Kayıt<em&gt; Drosophila</em&gt; Labellar Sensilla Taste

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the ...

Spinal Cord Transection in the Larval Zebrafish

Larva Zebra balığı Omurilik Kesisi

Mammals fail in sensory and motor recovery following spinal cord injury due to lack of axonal regrowth below the level of injury as well as an inability ...

Simultaneous Electrophysiological Recording and Micro-injections of Inhibitory Agents in the Rodent Brain

Eşzamanlı Elektrofizyolojik Kayıt ve kemirgen Beyindeki inhibitör Ajanların Mikro-enjeksiyon

Here we describe a method for the construction of a single-use &#8220;injectrode&#8221; using commercially accessible and affordable parts. A probing ...

Electrophysiological Recording from Drosophila Trichoid Sensilla in Response to Odorants of Low Volatility

Electrophysiological Recording from Drosophila Trichoid Sensilla in Response to Odorants of Low Volatility

Elektrofizyolojik Kayıt<em&gt; Drosophila</em&gt; Düşük Volatilite Kokularına Karşı Trikoid Sensilla

Insects rely on their sense of smell to guide a wide range of behaviors that are critical for their survival, such as food-seeking, predator avoidance, ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

Larva zebra balığı sonradan içini kaplamak saç hücrelerinin vivo kalsiyum görüntüleme

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

Investigating Long-term Synaptic Plasticity in Interlamellar Hippocampus CA1 by Electrophysiological Field Recording

Elektrofizyolojik Alan Kaydı ile Interlamellar Hipokampus CA1'de Uzun Süreli Sinaptik Plastisitenin Araştırılması

The study of synaptic plasticity in the hippocampus has focused on the use of the CA3-CA1 lamellar network. Less attention has been given to the ...