Name: molecular imaging to target transplanted muscle progenitor cells
Uploaded: 2013-03-27T08:54:00
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Les auteurs tiennent à remercier Sanjiv Gambhir pour le don du gène rapporteur fluc/mrfp/sr39tk. Ce travail a été financé par le Réseau de cellules souches (RCS) du Canada et la Fondation Journey Le Jesse.

1. Entretien et Propagation de myoblastes C2C12 <ol><li> Plaque de myoblastes C2C12 dans un flacon de 75 cm2 et maintenir les cellules dans le sérum glucose à haute Dulbecco modifié Eagle (HG-DMEM) supplémenté avec du sérum de veau fœtal (SVF) à une concentration finale de 10%. Ne laissez pas les cellules à devenir confluentes, à tout moment, car cela appauvrissent la population myoblastique. Milieu doit être changé tous les autre billet journée:. Moyennes touj...

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	<li>Emery, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+muscular+dystrophies.">The muscular dystrophies.</a> Lancet. 359, 687-695 (2002).</li><li>Blake, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+and+genetics+of+dystrophin+and+dystrophin-related+proteins+in+muscle.">Function and genetics of dystrophin and dystrophin-related proteins in muscle.</a> Physiol. Rev. 82, 291-329 (2002).</li><li>Goldring, K., Partridge, T., Watt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+stem+cells.">Muscle stem cells.</a> J. Pathol. 197, 457-467 (2002).</li><li>Partridge, T. 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X, 294 (2001).</li><li>Andersson, J. E., Bressler, B. H., Ovalle, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+regeneration+in+hind+limb+skeletal+muscle+of+the+mdx+mouse.">Functional regeneration in hind limb skeletal muscle of the mdx mouse.</a> J. Muscle Res. Cell Motil. 9, 499-515 (1988).</li></ol>

Dans cette étude, nous avons décrit une rapide et fiable imagerie moléculaire, l&#39;approche gène rapporteur de myoblastes cibles non invasive / PPM après la transplantation. Bien que cette étude démontre la localisation à court terme des pays partenaires méditerranéens transplantés via bioluminescense imagerie (BLI), la manière dont les cellules sont ciblées peuvent, en effet, être facilement appliquée à une évaluation longitudinale de la prise de greffe des cellules, grâce à l&#39...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> Myoblastes C2C12 </td><td> ATCC </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Eagle modifié par Dulbecco à moyen </td><td> Life Technologies </td><td> 12800-017 </td><td></td></tr><tr><td> sérum de veau fœtal </td><td> Life Technologies </td><td> 12483020 </td><td></td></tr><tr><td> 0,25% de trypsine-EDTA </td><td> Life Technologies </td><td> 25200-72 </td><td></td></tr><tr><td> Solution saline équilibrée de Hanks </td><td> Sigma Aldrich </td><td> H6648 </td><td></td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 </td><td> Life Technologies </td><td> 11668-019 </td><td></td></tr><tr><td> Nikon Eclipse TE2000-5 </td><td> Nikon Instruments Europe BV </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Xenolight D-luciférine </td><td> PerkinElmer </td><td> 122796 </td><td> 40 mg / ml dans du PBS </td></tr></tbody></table>

molecular imaging to target transplanted muscle progenitor cells

Dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie grave maladie neuromusculaire héréditaire qui touche 1 personne sur 3.500 garçons, et est caractérisée par une dégénérescence progressive des muscles 1, 2. Chez les patients, la capacité des résidents cellules satellites du muscle (SC) pour régénérer fibres musculaires endommagées devient de plus en plus inefficace 4. Par conséquent, la transplantation de cellules souches musculaires (PPM) / myoblastes chez des sujets sains est une approche thérapeutique prometteuse pour la DMD. Une limitation majeure à l&#39;utilisation de la thérapie de cellules souches, cependant, est le manque de technologies d&#39;imagerie fiables pour suivi à long terme des cellules implantées, et pour en évaluer l&#39;efficacité. Ici, nous décrivons un non-invasive et en temps réel approche pour évaluer le succès de la transplantation de myoblastes. Cette méthode tire parti d&#39;un gène rapporteur de fusion unifié composé de gènes (la luciférase de luciole [fluctuations], la protéine fluorescente rouge monomère [RDRF] et SR39 thymidine kinase [sr39tk]) dont expression peut être visualisé avec différentes modalités d&#39;imagerie 9, 10. Une variété de modalités d&#39;imagerie, y compris par émission de positons (TEP), émission à photon unique tomographie (SPECT), imagerie par résonance magnétique (IRM), l&#39;imagerie optique et haute fréquence 3D échographie sont maintenant disponibles, chacune avec des avantages et des limites 11. Bioluminescence d&#39;imagerie (BLI) des études, par exemple, ont l&#39;avantage d&#39;être relativement peu coûteuse et à haut débit. C&#39;est pour cette raison que, dans cette étude, nous nous servons de la luciférase de luciole (fluctuations) séquence du gène rapporteur contenue dans le gène de fusion et l&#39;imagerie par bioluminescence (BLI) pour la localisation à court terme des myoblastes C2C12 viables suite à une implantation dans une souris modèle de la DMD (dystrophie musculaire sur le chromosome X [mdx] souris) 12-14. Surtout, BLI nous fournit un moyen d&#39;examiner la cinétique de PPM étiquetés post-implantation, et sera utile pour suivre les cellules de façon répétée sur time et après la migration. Notre approche gène rapporteur permet en outre de nous de fusionner plusieurs modalités d&#39;imagerie dans un unique sujet vivant; étant donné la nature tomographique, fine résolution spatiale et sa capacité à évoluer jusqu&#39;à plus grands animaux et les humains 10,11, PET constituera la base des travaux futurs que nous suggèrent peut faciliter la traduction rapide des méthodes mises au point dans les cellules à des modèles précliniques et aux applications cliniques.

À 50-60% de confluence, myoblastes C2C12 ont été transitoirement transfectées avec le gène de fusion susmentionné construction reporter composé de la luciférase de luciole [fluctuations], la protéine fluorescente rouge monomère [RDRF] et SR39 thymidine kinase [sr39tk] (figure 1A). L&#39;efficacité de transfection a été calculé par microscopie à fluorescence (figures 1B, C), ce qui rend l&#39;utilisation de la séquence RDRF dans notre c...

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Molecular Imaging to Target Transplanted Muscle Progenitor Cells

A moyen non invasif pour évaluer le succès de la transplantation de myoblastes est décrite. La méthode tire parti d&#39;un gène rapporteur de fusion unifié composé de gènes dont l&#39;expression peut être visualisé avec différentes modalités d&#39;imagerie. Ici, nous utilisons un<em&gt; Fluc</emSequence&gt; gène rapporteur pour cibler les cellules par imagerie par bioluminescence.

L&#39;imagerie moléculaire à la cible transplanté des cellules progénitrices musculaires

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe genetic neuromuscular disorder that affects 1 in 3,500 boys, and is characterized by progressive muscle ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In vivo Near Infrared Fluorescence (NIRF) Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

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In vivo par fluorescence dans le proche infrarouge (NIRF) intravasculaire d&#39;imagerie moléculaire de la plaque inflammatoire, une approche multimodale d&#39;imagerie de l&#39;athérosclérose

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading ...

Recherche

Médecine

Labeling Stem Cells with Ferumoxytol, an FDA-Approved Iron Oxide Nanoparticle

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Stem cell based therapies offer significant potential for the field of regenerative medicine. However, much remains to be understood regarding the in vivo ...

The Use of Thermal Infra-Red Imaging to Detect Delayed Onset Muscle Soreness

L&#39;utilisation de l&#39;infrarouge thermique imagerie pour la détection retardée Douleurs musculaires Apparition

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Haut-débit cytométrie en flux test cellulaire pour détecter les anticorps de la N-méthyl-D-aspartate Receptor ou récepteur de la dopamine-2 dans le sérum humain

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

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Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

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