Name: optogenetic activation of zebrafish somatosensory neurons using chef-tdtomato
Uploaded: 2013-01-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optogenetic Activation of Zebrafish Somatosensory Neurons using ChEF-tdTomato at JoVE.com

我们感谢福米久保带人，托德蒂勒和HerwigBaier的的（UCSF /马克斯普朗克研究所）的行为实验和DPSS激光器成立的建议;的Heesoo金正日和Chiara CERRI MBL神经生物学课程协助厨师tdTomato实验的，PetronellaKettunen（哥德堡大学）最初的合作optogenetic实验BaljitKhakh，埃里克·哈德森，迈克·巴卡和约翰·米利根（UCLA）的技术咨询和钱永健（UCSD）的厨师tdTomato的建设。这项工作得到了NRSA奖（5F31NS064817）AMSP和赠款来自美国国家科学基金会（RIG：0819010）AS。

提前准备好以下。 1。准备光纤电缆<ol><li>创建光缆的存储单元，用于通过熔融玻璃巴斯德吸管的锥形颈部超过本生灯创建一个〜150°的角度。 </li><li>使用线切割或刀片，小心地剪光缆的成两部分。每一件作品都应该有一个结束与一个FC / PC适配器和一个露底。存储一块作为储备电缆。 </li><li>向下剥去光缆到包层，除去纤维外套和加强纤维（ 图1A），从5.0厘米的?...

<ol>
	<li>Arrenberg, A. B., Del Bene, F., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+control+of+zebrafish+behavior+with+halorhodopsin.">Optical control of zebrafish behavior with halorhodopsin.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106 (42), 17968-17973 (2009).</li><li>Burgess, H. A., Johnson, S. L., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unidirectional+startle+responses+and+disrupted+left-right+co-ordination+of+motor+behaviors+in+robo3+mutant+zebrafish.">Unidirectional startle responses and disrupted left-right co-ordination of motor behaviors in robo3 mutant zebrafish.</a> Genes Brain Behav. 8 (5), 500-511 (2009).</li><li>Douglass, A. D., Kraves, S., Deisseroth, K., Schier, A. F., Engert, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escape+behavior+elicited+by+single,+channelrhodopsin-2-evoked+spikes+in+zebrafish+somatosensory+neurons.">Escape behavior elicited by single, channelrhodopsin-2-evoked spikes in zebrafish somatosensory neurons.</a> Curr. Biol. 18 (15), 1133-1137 (2008).</li><li>Downes, G. B., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supraspinal+input+is+dispensable+to+generate+glycine-mediated+locomotive+behaviors+in+the+zebrafish+embryo.">Supraspinal input is dispensable to generate glycine-mediated locomotive behaviors in the zebrafish embryo.</a> J. Neurobiol. 66 (5), 437-451 (2006).</li><li>Drapeau, P., Saint-Amant, L., Buss, R. R., Chong, M., McDearmid, J. R., Brustein, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+locomotor+network+in+zebrafish.">Development of the locomotor network in zebrafish.</a> Prog. Neurobiol. 68 (2), 85-111 (2002).</li><li>Eisenhoffer, G. T., Rosenblatt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Cell+Extrusion+from+the+Epidermis+of+Developing+Zebrafish.">Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (52), e2689 (2011).</li><li>Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+the+Zebrafish+Embryonic+Brain+by+Confocal+Microscopy.">Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy.</a> J. Vis. Exp. (26), e1217 (2009).</li><li>Kague, E., Weber, C., Fisher, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+Zebrafish+Transgenesis+for+Evaluating+Enhancer+Sequences.">Mosaic Zebrafish Transgenesis for Evaluating Enhancer Sequences.</a> J. Vis. Exp. (41), e1722 (2010).</li><li>Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+Chimeric+Zebrafish+Embryos+by+Transplantation.">Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation.</a> J. Vis. Exp. (29), e1394 (2009).</li><li>Kohashi, T., Oda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+Mauthner-+or+non-Mauthner-mediated+fast+escape+evoked+by+different+modes+of+sensory+input.">Initiation of Mauthner- or non-Mauthner-mediated fast escape evoked by different modes of sensory input.</a> J. Neurosci. 28 (42), 10641-10653 (2008).</li><li>Lai, S. L., Lee, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+mosaic+with+dual+binary+transcriptional+systems+in+Drosophila.">Genetic mosaic with dual binary transcriptional systems in Drosophila.</a> Nat. Neurosci. 9 (5), 703-709 (2006).</li><li>Liao, J. C., Haehnel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+afferent+neurons+in+larval+zebrafish+provides+a+functional+framework+for+lateral+line+somatotopy.">Physiology of afferent neurons in larval zebrafish provides a functional framework for lateral line somatotopy.</a> J. Neurophysiol. 107 (10), 2615-2623 (2012).</li><li>Lin, J. Y., Lin, M. Z., Steinbach, P., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+engineered+channelrhodopsin+variants+with+improved+properties+and+kinetics.">Characterization of engineered channelrhodopsin variants with improved properties and kinetics.</a> Biophys J. 96 (5), 1803-1814 (2009).</li><li>Liu, K. S., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+ablations+reveal+functional+relationships+of+segmental+hindbrain+neurons+in+zebrafish.">Laser ablations reveal functional relationships of segmental hindbrain neurons in zebrafish.</a> Neuron. 23 (2), 325-335 (1999).</li><li>Liu, Y. C., Bailey, I., Hale, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+startle+motor+patterns+and+behaviors+in+the+larval+zebrafish+(Danio+rerio).">Alternative startle motor patterns and behaviors in the larval zebrafish (Danio rerio).</a> J. Comp. Physiol. A. Neuroethol. Sens Neural. Behav. Physiol. 198 (1), 11-24 (2012).</li><li>Palanca, A. M., Lee, S. L., Yee, L. E., Joe-Wong, C., Trinh, L. A., Hiroyasu, E., Husain, M., Fraser, S. E., Pellegrini, M., Sagasti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+transgenic+reporters+identify+somatosensory+neuron+subtypes+in+larval+zebrafish.">New transgenic reporters identify somatosensory neuron subtypes in larval zebrafish.</a> Dev. Neurobiol. , (2012).</li><li>Pujol-Mart&#237;, J., Zecca, A., Baudoin, J. P., Faucherre, A., Asakawa, K., Kawakami, K., L&#243;pez-Schier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+birth+order+identifies+a+dimorphic+sensorineural+map.">Neuronal birth order identifies a dimorphic sensorineural map.</a> J. Neurosci. 32 (9), 2976-2987 (2012).</li><li>Saint-Amant, L., Drapeau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+the+development+of+motor+behaviors+in+the+zebrafish+embryo.">Time course of the development of motor behaviors in the zebrafish embryo.</a> J. Neurobiol. 37 (4), 622-632 (1998).</li><li>Szobota, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+control+of+neuronal+activity+with+a+light-gated+glutamate+receptor.">Remote control of neuronal activity with a light-gated glutamate receptor.</a> Neuron. 54 (4), 535-545 (2007).</li><li>Uemura, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+functional+genomics+revealed+conservation+and+diversification+of+three+enhancers+of+the+isl1+gene+for+motor+and+sensory+neuron-specific+expression.">Comparative functional genomics revealed conservation and diversification of three enhancers of the isl1 gene for motor and sensory neuron-specific expression.</a> Dev. Biol. 278 (2), 587-606 (2005).</li><li>Wyart, C., Del Bene, F., Warp, E., Scott, E. K., Trauner, D., Baier, H., Isacoff, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+dissection+of+a+behavioural+module+in+the+vertebrate+spinal+cord.">Optogenetic dissection of a behavioural module in the vertebrate spinal cord.</a> Nature. 461 (7262), 407-410 (2009).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+Morpholino+Antisense+Oligonucleotides+in+Zebrafish+Embryos.">Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.</a> J. Vis. Exp. (27), e1113 (2009).</li></ol>

我们描述了一种单RB神经元在活的斑马鱼optogenetic激活。我们的方法采用了短暂的转基因表达的荧光标记的channelrhodopsin的变种，厨师tdTomato 13，在特定的躯体感觉神经元。这种方法可以很容易地适应用于其他幼虫斑马鱼的细胞群。 使用这种方法，我们一贯引起的行为反应，从34-48斑马鱼幼虫表达大厨tdTomato的。使用5毫秒的蓝色光脉冲，在5 V，我们能够激活单RB的神经元?...

促进或抑制神经细胞的兴奋与定义的波长的光的optogenetic方法的发展使我们能够研究不同人群的神经元的神经回路，控制行为，1，19，21的功能。这种技术通常被用于激活的神经元组，但它也可以被用来激活单个神经元的。斑马鱼幼虫，这些方法特别适合的，因为他们是半透明的，他们的神经系统迅速发展，并建立转基因动物是快速和常规。然而，重大的技术障碍必须克服，可靠地实现单神经元激活。 要优化程序optogenetic激活的单斑马鱼神经元，我们专注于躯体感觉神经元。斑马鱼幼虫检测各种体感刺激，使用两个群体神经元三叉神经元，支配头，及Rohon胡子（RB）的神经元，它支配身体的其他部位。每三叉和RB神经元投射的周轴突分支广泛在皮肤上，以检测的刺激和连接到下游的神经回路的中心轴突。动物早在21小时后受精（HPF）的响应触摸，表明已形成了相干的体感电路5星，18。幼体发育过程中至少有三叉神经和RB神经元突触上的Mauthner细胞激活经典的逃生反应，但越来越多的证据表明，有多种类型的体感神经元与不同的连接模式，可能引起变化的逃逸行为，4， 10，12，14，15，16，17。我们开发这种方法的动机是行为功能的不同类别的躯体感觉神经元的特征，但这种方法原则上可以用于研究的功能，几乎所有的神经元或神经元的LAR人口值斑马鱼。 道格拉斯等人以前描述了一种方法用于激活Channelrhodopsin-2表达的蓝色光的躯体感觉神经元，引出逃逸行为3。他们使用的方法ISL1基因的增强子元件驱动CHR 2-EYFP躯体感觉神经元中的表达。这种转基因，然而，据报道，以显示相对微弱的荧光，需要共同注射的第二记者，UAS :: GFP，允许细胞表达CHR 2-EYFP的可视化。这种方法被用来引出24-48斑马鱼的行为反应之间，但可能不会得到响应过去的72 HPF。因此，虽然此方法适用于研究神经回路在非常早期的幼体阶段（24-48 HPF），它是不足为特征的神经回路和行为反应幼虫，中老年时更是明显不同的行为反应和神经回路是比较成熟的。 我们试图该技术在提高灵敏度的特点幼虫RB神经元亚群的功能。为了提高表达，我们使用了一个特定的体感增强剂（CREST3）20驱动表达的LexA-VP16和LexA操纵的序列（4xLexAop）11拉伸，扩增的荧光标记的光激活的信道的表达。此配置扩增表达的通道，省去了用于共表达的第二记者和允许我们直接确定每个神经元中的信道的相对丰度。使用的LexA蛋白/ LexAop序列有额外的优点，允许我们引入转基因成斑马鱼记者使用GAL4/UAS系统的线。转基因瞬时表达，这造成了不同程度的表达，但通常是足够强大的可视化的单个神经元的胞体和轴突预测数天。为了优化灵敏度性点燃，我们使用的光激活通道厨师，channelrhodopsin的变体组成的一个嵌合体：channelopsin-1（Chop1）和channelopsin-2（Chop2），交叉点在螺旋环EF 13。此信道被激活为CHR 2在相同的波长，但需要较低的光强度进行激活，使得它比其他常用的途径，包括CHR 2更敏感。的厨师融合蛋白红色荧光蛋白，tdTomato，使我们能够筛选蛋白的表达没有激活的通道。作为光源，我们使用了一个二极管泵浦固态（DPSS）激光耦合到一个光纤电缆提供一个精确的，高功率的蓝色光脉冲到一个特定区域的幼虫。这使我们能够专注激光的单个神经元，省去了寻找罕见的转基因动物，在一个单一的神经元表达的通道。使用这种方法，我们能够激活单RB神经元，记录行为反应s的一个高速视频摄像机，和图像的激活的神经元，在高分辨率的激光共聚焦显微镜。

<table border="1"><tbody><tr><td> 的试剂/材料名称 </td><td> 公司 </td><td> 目录编号 </td><td> 评论 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 物料 </td></tr><tr><td>玻璃巴斯德吸管</td><td>费舍尔</td><td> 1367820B </td><td>或同等学历（直径10-15毫米） </td></tr><tr><td> 200微米光纤</td><td> Thorlabs公司</td><td> AFS200/220Y-CUSTOM </td><td>跳线，长度：3米，完A：B：FC / PC，FC / PC，结束外套：FT030 </td></tr><tr><td> 50微米光纤</td><td> Thorlabs公司</td><td> AFS50/125Y-CUSTOM </td><td>跳线，长度：3米，完A：B：FC / PC，FC / PC，结束外套：FT030 </td></tr><tr><td>可调节剥线工具</td><td> Thorlabs公司</td><td> AFS900 </td><td>或三孔剥线工具（FTS4） </td></tr><tr><td>钻石楔形隶</td><td> Thorlabs公司</td><td> S90W </td><td></td></tr><tr><td>烈焰红唇/褐色微管牵引机</td><td>萨特仪器</td><td> P-97 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>高硼硅玻璃管材用灯丝</td><td>萨特仪器</td><td> BF-100-78-10 </td><td></td></tr><tr><td>注塑模具</td><td> N / A </td><td> N / A </td><td>图5 </td></tr><tr><td> 1.5 mL离心管</td><td>任何</td><td>任何</td><td></td></tr><tr><td>陪替氏培养皿（100x15毫米） </td><td>任何</td><td>任何</td><td></td></tr><tr><td>陪替氏培养皿（60x15毫米） </td><td>任何</td><td>任何</td><td></td></tr><tr><td>高压注射器</td><td> ASI </td><td> MPPI-3 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>微操作机器人及金属架</td><td> Narashige </td><td> M152 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>一次性塑料移液管</td><td> Fisherbrand </td><td> 13-711-7 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>扑克（针座，昆虫针） </td><td>精细的科学工具， </td><td> 26018-17和26000-70 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>镊子</td><td>精细的科学工具， </td><td> 11255-20 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td> Microloader吸头</td><td> Eppendorf公司</td><td> 9300001007 </td><td></td></tr><tr><td> 28.5°C孵化器</td><td>任何</td><td>任何</td><td></td></tr><tr><td> 42°C加热块</td><td>任何</td><td>任何</td><td></td></tr><tr><td>非无菌手术刀片＃11 </td><td>精细的科学工具， </td><td> 10011-00 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>解剖小号应付</td><td>蔡司</td><td> STEMI </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>荧光解剖范围与标准过滤器</td><td>任何</td><td>任何</td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>共聚焦显微镜</td><td>蔡司</td><td> LSM 510或710 </td><td>或相当于激光器的GFP和RFP，10倍，20倍和40倍的目标</td></tr><tr><td>高速摄像机</td><td> AOS技术公司</td><td> X-PRI（130025-10） </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>便携式激光波长473 nm </td><td>晶体激光器</td><td> CL-473-050 </td><td>或更高的功率，与TTL选项</td></tr><tr><td> S48刺激</td><td>天文杂志，草仪器事业部</td><td> S48K </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td> FC / PC FC / PC配合套筒</td><td> Thorlabs公司</td><td> ADAFC1 </td><td>五月NE为光缆连接</td></tr><tr><td>激光防护眼镜</td><td> Thorlabs公司</td><td> LG10 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td> 24培养板</td><td>杰纳西</td><td> 25-102 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>单抑郁症幻灯片</td><td>费舍尔</td><td> S175201 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 试剂 </td></tr><tr><td>即时海洋</td><td>水生生态系统</td><td> IS50 </td><td></td></tr><tr><td>亚甲基蓝</td><td>费舍尔</td><td> S71325 </td><td></td></tr><tr><td>酚红</td><td>西格玛</td><td> P4758 </td><td></td></tr><tr><td>琼脂糖</td><td> EMD </td><td> 2125 </td><td>或同等学历</td></tr><tr><td>低熔化琼脂糖</td><td>西格玛</td><td> A9045 </td> &lt;TD&gt;或同等学历</td></tr><tr><td> PTU </td><td>西格玛</td><td> P7629 </td><td></td></tr><tr><td>三卡因</td><td>西格玛</td><td> A5040 </td><td></td></tr><tr><td>蓝色的水/胚胎</td><td></td><td></td><td> 10 L DDH 2 O 0.6克即溶海洋 6滴亚甲基蓝</td></tr><tr><td>酚红</td><td></td><td></td><td> （5毫克/毫升在0.2M氯化钾） </td></tr><tr><td> 100X PTU </td><td></td><td></td><td> 0.150克PTU 50 ML DDH 2 O 溶解在70°C，常常动摇 分装并储存于-20°C </td></tr><tr><td> 1个PTU </td><td></td><td></td><td> 1毫升100倍PTU 99毫升蓝/鱼水</td></tr><tr><td>三卡因原液</td><td></td><td></td><td> 400毫克三卡因 97.9 DDH 2 O </td></tr><tr><td> 〜2.1毫升1M​​ Tris，pH9.0 </td><td></td><td></td> &lt;TD&gt;调整pH值7.0〜 商店在4°C或-20°C用于长期存储</td></tr></tbody></table>

optogenetic activation of zebrafish somatosensory neurons using chef-tdtomato

幼虫斑马鱼正在成为一个模型，用于描述简单的神经回路的发育和功能的。由于体外受精，快速发展，半透明，斑马鱼特别适合optogenetic方法来研究神经回路的功能。在这种方法中，光敏感的离子通道是在特定的神经元中表达，使实验者来激活或抑制它们的意愿，从而评估其贡献的特定行为。应用这些方法斑马鱼幼虫的概念很简单，但需要优化的技术细节。在这里，我们展示了一个程序，表达一个channelrhodopsin的变种在仔鱼斑马鱼的体感神经元，光活化的单个细胞，并记录产生的行为。引入了一些修改先前建立的方法，这种方法可以用来引发的行为反应，从单一的神经元激活到受精后至少4天（DPF）。具体来说，我们创建了一个转基因，用躯体感觉神经元增强，CREST3，推动标签channelrhodopsin变种，厨师tdTomato的表达。注射这种转基因成1 - 细胞期胚胎中的结果，在镶嵌在躯体感觉神经元中的表达，可以用激光共聚焦显微镜成像。照明确定在这些动物中的细胞从473 nm的DPSS激光器的光，引导通过光纤电缆，引出行为，可以用高速摄像机记录，并进行定量分析。这种技术可以适于研究行为引起通过激活任何斑马鱼神经元。与遗传或药物扰动的这种方法相结合，将是一个有力的方式来研究电路的形成和功能。

<img src="/files/ftp_upload/50184/50184fig1.jpg" alt="图1"/> 图1。光缆成立。（A）层的光纤电缆。 （B）的剥离的光纤电缆在巴斯德吸管。 （C）的光纤电缆在巴斯德吸管定位使用显微操作。 <img src="/files/ftp_upload/50184/50184fig2.jpg" alt="图2"/> 图2。注塑模具的模板。 <p class="jove_content" fo:keep-together.wit...

Watch this Scientific Journal Video about Optogenetic Activation of Zebrafish Somatosensory Neurons using ChEF-tdTomato at JoVE.com

Optogenetic Activation of Zebrafish Somatosensory Neurons using ChEF-tdTomato

optogenetic技术已使人们有可能研究特定的神经元的行为的贡献。我们描述了一个激活单躯体感觉神经元表达channelrhodopsin变种（厨师）二极管泵浦固态（DPSS）激光器和记录引起的行为与一个高速摄像机的斑马鱼幼虫的方法。

Optogenetic激活斑马鱼的体感神经元使用厨师tdTomato的

Larval  zebrafish are emerging as a model for describing the development and function  of simple neural circuits. Due to their  external fertilization, ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

针对嗅球神经元采用组合在体内电穿孔和GAL4基于增强陷阱斑马鱼线

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific ...

科研

神经科学

Using Affordable LED Arrays for Photo-Stimulation of Neurons

使用光刺激神经元的负担得起的LED阵列

Standard slice electrophysiology has allowed researchers to probe individual components of neural circuitry by recording electrical responses of single ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

慢性成人出生的嗅觉神经元的选择性病毒转导在体内 Optogenetic刺激

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

A Method for High Fidelity Optogenetic Control of Individual Pyramidal Neurons In vivo

A Method for High Fidelity Optogenetic Control of Individual Pyramidal Neurons In vivo

单个锥体神经元的高保真光遗传学控制方法<em&gt;在体内</em

Optogenetic methods  have emerged as a powerful tool for elucidating neural circuit activity  underlying a diverse set of behaviors across a broad range ...

Optogenetic Stimulation of the Auditory Nerve

听觉神经的光遗传学刺激

Direct electrical stimulation of spiral ganglion neurons (SGNs) by cochlear implants (CIs) enables open speech comprehension in the majority of implanted ...

Somatosensory Event-related Potentials from Orofacial Skin Stretch Stimulation

从口面皮肤牵拉刺激体感事件相关电位

Cortical processing associated with orofacial somatosensory function in speech has received limited experimental attention due to the difficulty of ...

M&#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

激光诱导的斑马鱼视网膜变性及再生模型中的 m ü ller 胶质细胞活化

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

胸腺1-gmcmp6 转基因小鼠在原代体血源皮质中的成像神经活性

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

跟踪果蝇幼虫行为对嗅神经元 Optogenetic 刺激的反应

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a ...

Isolation and RNA Extraction of Neurons, Macrophages and Microglia from Larval Zebrafish Brains

斑马鱼脑幼虫神经元、巨噬细胞和小胶质的分离和 RNA 提取

To gain a detailed understanding of the role of different CNS cells during development or the establishment and progression of brain pathologies, it is ...