Name: na&iuml;ve adult stem cells isolation from primary human fibroblast cultures
Uploaded: 2013-05-03T13:00:00
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이 작품은 알렉산더 폰 훔볼트 재단 (5090371), 알레르기 연구 및 교육을위한 크리스틴 KUHNE 센터 (CK-CARE) 및 Bayerischen Staatsministerium (KD까지)에 의해 지원되었다.

1. 차 섬유 아세포 배양에서 SKP 분리 <ol><li> 세포 은행에서 직접 피부 생검에서 얻은 하나 섬유 아세포 배양 섬유 모세포 성장 배지 DMEM 15 % 태아 송아지 혈청, 2 MM의 글루타민, 10 MG / ML 페니실린, 10 MG / ML 스트렙토 마이신을 포함의 문화에 유지됩니다. </li></ol> 인간 섬유 아세포 GMO3349C 및 GMO8398A는 의료 연구를위한 Coriell 연구소 (캠든, NJ)에서 얻은 본 연구에 사용 하였다. <ol sta...

<ol>
	<li>Jahoda, C. A., Whitehouse, J., Reynolds, A. J., Hole, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+follicle+dermal+cells+differentiate+into+adipogenic+and+osteogenic+lineages.">Hair follicle dermal cells differentiate into adipogenic and osteogenic lineages.</a> Exp. Dermatol. 12, 849 (2003).</li><li>Watt, F. M., Celso, L. o., C, V., Silva-Vargas, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+stem+cells:+an+update.">Epidermal stem cells: an update.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 16, 518 (2006).</li><li>Blanpain, C., Horsley, V., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+stem+cells:+turning+over+new+leaves.">Epithelial stem cells: turning over new leaves.</a> Cell. 128, 445 (2007).</li><li>Hunt, D. P., Jahoda, C., Chandran, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+skin-derived+precursors:+from+biology+to+clinical+translation.">Multipotent skin-derived precursors: from biology to clinical translation.</a> Vurr. Opin. Biotechnol. 20, 522 (2009).</li><li>Toma, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+multipotent+adult+stem+cells+from+the+dermis+of+mammalian+skin.">Isolation of multipotent adult stem cells from the dermis of mammalian skin.</a> Nat. Cell Biol. 3, 778 (2001).</li><li>Fernandes, K. J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dermal+niche+for+multipotent+adult+skin-derived+precursor+cells.">A dermal niche for multipotent adult skin-derived precursor cells.</a> Nat. Cell Biol. 6, 1082 (2004).</li><li>Wenzel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Na&#239;ve+adult+stem+cells+from+patients+with+Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome+express+low+levels+of+progerin+in+vivo.">Na&#239;ve adult stem cells from patients with Hutchinson-Gilford progeria syndrome express low levels of progerin in vivo.</a> Bio. Open. 1, (2012).</li><li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+Method.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method.</a> Methods. 25, 402 (2001).</li><li>Biernaskie, J. A., McKenzie, I. A., Toma, J. T., Miller, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+skin-derived+precursors+(SKPs)+and+differentiation+and+enrichment+of+their+Schwann+cell+progeny.">Isolation of skin-derived precursors (SKPs) and differentiation and enrichment of their Schwann cell progeny.</a> Nature Protocol. 1, 2803 (2006).</li><li>Toma, J. G., McKenzie, I., Bagli, D., Miller, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+multipotent+skin-derived+precursors+from+human+skin.">Isolation and characterization of multipotent skin-derived precursors from human skin.</a> Stem Cells. 23, 727 (2005).</li><li>Fernandes, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+neurogenic+potential+of+multipotent+skin-derived+precursors.">Analysis of the neurogenic potential of multipotent skin-derived precursors.</a> Electrophoresis. 201, 32 (2006).</li><li>Hill, l. K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+embryonic+stem+cell-derived+vascular+progenitor+cells+capable+of+endothelial+and+smooth+muscle+cell+function.">Human embryonic stem cell-derived vascular progenitor cells capable of endothelial and smooth muscle cell function.</a> Exp. Hematol. 38, 246 (2010).</li></ol>

방법을 사용하여 여기에 설명, 순진 피부 줄기 세포는 기본 피부 섬유 아세포 배양에서 분리 할 수​​ 있습니다. 이 방법을 사용하여, 우리는 최근 희귀 유전 증후군, 허친슨 - 길 포드 조로증 증후군 7 명에서 유래 섬유 아세포 배양에서 성체 줄기 세포의 분리 및 특성을보고했다. 로 그 전구체 세포 표현 줄기 세포 마커 자기 갱신 할 수 있으며 (자세한 벤첼 등.에 의해 그림 4...

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM high glucose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>31966-047</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM low glucose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>21885-108</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10270-106</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-024</td>
			<td>Final conc.: 200 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/ Streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Final conc.: 10 mg/ml /10 mg /ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin solution (0.25%)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25200-056</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F-12 Nutrient Mixture (Ham)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>21765-029</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>4114-TC-01M</td>
			<td>Final conc.: 40 ng/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>236-EG-200</td>
			<td>Final conc.: 20 ng/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGFBB</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>PHG0043</td>
			<td>Final conc.: 5 ng/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF-b1</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>PHG9204</td>
			<td>Final conc.: 2.5 ng/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Omnilab</td>
			<td>FALC353109</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS w/o CaMg</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>14190-169</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>17504-044</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>8388.2</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield mounting medium</td>
			<td>Vector Inc.</td>
			<td>H-1200</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Minikit</td>
			<td>Qiagen, Valencia, CA</td>
			<td>74104</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omniscript Reverse Transcriptase</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>205113</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SsoFast EvaGreen Supermix</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>172-5201</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fungizone</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15290-018</td>
			<td>Final conc.:1 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Table 2. Specific reagents and equipment.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

na&iuml;ve adult stem cells isolation from primary human fibroblast cultures

지난 십 년간, 여러 성체 줄기 세포 집단은 인간의 피부 1-4에서 발견되었습니다. 능성 성인 피부 전구체의 분리가 처음 밀러 F. D 연구소 5, 6에 의해보고되었다. 이러한 초기 연구는 성인 포유류의 진피 5에서 다 능성 전구 세포 인구를 설명했다. 이러한 세포 -라고 SKPs, 피부 파생 된 전구체는 - 격리와 설치류와 인간의 피부에서 확장하고 뉴런 5와 같은 피부 발견되지 않았다 세포 유형 등 신경과 중배엽 모두 자손,로 분화되었다. 배양 SKPs에 면역 세포 연구는 세포가 피브로넥틴 및 다 능성 줄기 세포 마커 6에 추가 vimentin에와 스틴, 신경과 골격 근육의 전구체로 표현 중간 필라멘트 단백질을 발현 것으로 나타났다. 지금까지 성체 줄기 세포 인구 SKPs 갓 수집 포유류의 피부 생검에서 분리되었다. ve_content는 &quot;&gt; 최근에, 우리는 설립과 피부 유래 전구 세포의 인구는 피부 생검 7에서 설정된 기본 섬유 아세포 배양에 존재 남아있을 것으로보고있다. 몇 체세포 줄기 세포가 초기 인구 계대에서 차 섬유 아세포 배양에 상주 할 수있는 가정이었다 다음과 같은 관측에 따라 : (1) SKPs 및 기본 섬유 모세포 배양 진피에서 파생 된, 그리고 SKP 세포 따라서 소수의 1 차 피부 섬유 아세포 배양에 존재 남아있을 수 있으며, (2) 주요 섬유 아세포 배양했습​​니다 냉동 분주에서 성장 7 가능한 남아 세포의 작은 숫자가 포함 된 저장 또는 전송 중에 불리한 온도에 노출.이 드문 세포는 여러 번 확장 및 계대 수있었습니다.이 관찰 제안하는 높은 확산 힘과 스트레스에 대한 저항을 가진 세포의 작은 숫자 인간 섬유 아세포 배양 7 참석했다. 우리는 전세계 조직 은행 (그림 1)에서 쉽게 사용할 수있는 기본 섬유 모세포 배양에서 성체 줄기 세포의 빠른 분리를위한 프로토콜을 설정하는 이러한 연구 결과를 이용했습니다. 피부 샘플에 액세스 할 수없는 경우 섬유 아세포 문화의 분자 희귀 유전 질환을 기본 메커니즘뿐만 아니라 모델링 질병을 해부 할 수있는 새로운 기회를 열어, 따라서, 조직 은행에서 구할 수 있지만이 전구 세포의 분리를 허용하는이 방법은 중요한 의미가있다 요리.

우리는 우리가 최근 7보고 된 선택적으로 EGF와 FGF2으로 구성된 통제 성장 조건 하에서 SKP 분야를 생성하기 위해 확장 세포의 인구는 기본 피부 섬유 아세포 배양 (그림 1)에 존재하는 것을 보여줍니다. 일반적으로 세포 은행에서 제공하는 기본 섬유 아세포의 변종에 해당하는 PPD가 15 일부터 25 일까지 섬유 아세포 배양 본 연구에 사용 하였다. 이 방법에서...

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우리는 인간의 기본 섬유 아세포 배양에서 순진 능성 피부에서 파생 된 전구체 (SKP) 세포를 분리하는 방법을보고합니다. 우리는 섬유 아세포 문화에서 파생 된 이러한 SKPs은 인간의 피부 생검에서 직접 파생 된 것과 유사한 줄기 세포 특성을 공유하는 것을 보여줍니다. 이러한 세포는 OCT4와 나노 등 능성 마커뿐만 아니라 신경 능선 마커 스틴을 표현한다.

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