Name: isolation and differentiation of stromal vascular cells to beige/brite cells
Uploaded: 2013-03-28T12:00:00
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我々は、原稿上の議論、技術的なヘルプと編集支援のための治大野耕作篠田ルイシャープ、恵美友田、とローレンルイズに感謝します。この作品は、コペンハーゲンとEU FP7プロジェクトDIABAT（健康F2の大学から博士号SHAREのフェローシップでサポートされていた画期的な生物医学研究のためのプログラムからとアスビオファーマ株式会社からSKULAには、NIH（DK087853）からの補助金によって支えられてリセマドセンとKarstenクリステンセンに-2011-278373）。またDERCセンター助成（NIH P30 DK063720）を認める。

1。消化培地を調製組織当たり5匹（約1ml / 1グラムの脂肪組織）ごとに5ミリリットルを加えます。 <ol><li>消化酵素で重量を量る： - Collaginase D：1.5 U / mlの（1108874103、1グラム、ロシュ、70334223） - ディスパーゼⅡ：2.4 U / mlの（04942078001、0980ミリグラム/ LYO、ロシュ、11466200） </li><li> 25ミリリットルのPBSを加え、溶解させるためによく混ぜる</li><li> 10mMの最終濃度...

<ol>
	<li>Barness, L. A., Opitz, J. M., Gilbert-Barness, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity:+genetic,+molecular,+and+environmental+aspects.">Obesity: genetic, molecular, and environmental aspects.</a> American Journal of Medical Genetics. Part A. 143A, 3016-3034 (2007).</li><li>Rothwell, N. J., Stock, M. 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X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+mitochondrial+biogenesis+is+suppressed+in+db/db+and+high-fat+diet-fed+mice+and+improved+by+rosiglitazone.">Adipose mitochondrial biogenesis is suppressed in db/db and high-fat diet-fed mice and improved by rosiglitazone.</a> Diabetes. 56, 1751-1760 (2007).</li><li>Wilson-Fritch, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+remodeling+in+adipose+tissue+associated+with+obesity+and+treatment+with+rosiglitazone.">Mitochondrial remodeling in adipose tissue associated with obesity and treatment with rosiglitazone.</a> The Journal of Clinical Investigation. 114, 1281-1289 (2004).</li><li>Sell, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisome+proliferator-activated+receptor+gamma+agonism+increases+the+capacity+for+sympathetically+mediated+thermogenesis+in+lean+and+ob/ob+mice.">Peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonism increases the capacity for sympathetically mediated thermogenesis in lean and ob/ob mice.</a> Endocrinology. 145, 3925-3934 (2004).</li><li>Fukui, Y., Masui, S., Osada, S., Umesono, K., Motojima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+thiazolidinedione,+NC-2100,+which+is+a+weak+PPAR-gamma+activator,+exhibits+potent+antidiabetic+effects+and+induces+uncoupling+protein+1+in+white+adipose+tissue+of+KKAy+obese+mice.">A new thiazolidinedione, NC-2100, which is a weak PPAR-gamma activator, exhibits potent antidiabetic effects and induces uncoupling protein 1 in white adipose tissue of KKAy obese mice.</a> Diabetes. 49, 759-767 (2000).</li><li>Vernochet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C/EBPalpha+and+the+corepressors+CtBP1+and+CtBP2+regulate+repression+of+select+visceral+white+adipose+genes+during+induction+of+the+brown+phenotype+in+white+adipocytes+by+peroxisome+proliferator-activated+receptor+gamma+agonists.">C/EBPalpha and the corepressors CtBP1 and CtBP2 regulate repression of select visceral white adipose genes during induction of the brown phenotype in white adipocytes by peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonists.</a> Molecular and Cellular Biology. 29, 4714-4728 (2009).</li><li>Tai, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+nuclear+receptor+peroxisome+proliferator-activated+receptor+gamma+promotes+brown+adipocyte+differentiation.">Activation of the nuclear receptor peroxisome proliferator-activated receptor gamma promotes brown adipocyte differentiation.</a> The Journal of Biological Chemistry. 271, 29909-29914 (1996).</li><li>Sugii, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PPARgamma+activation+in+adipocytes+is+sufficient+for+systemic+insulin+sensitization.">PPARgamma activation in adipocytes is sufficient for systemic insulin sensitization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 22504-22509 (2009).</li></ol>

ここで我々は、マウスの初代培養脂肪細胞におけるベージュ/ブライト細胞の発達を研究するために信頼性の高い携帯電話システムを提案する。など、いくつかの利用可能な不死化細胞株と比較して、このシステムは、in vivoでの白色脂肪の褐変に強化された関連性を提供することがございます。 これらの主要な脂肪細胞の研究はいくつかの利点を提供していますが...

<html>肥満が劇的に世界的に増加しており、今では公衆衛生1に最も深刻な懸念の一つと考えられている。この条件は、支出にエネルギー摂取量の相対でmisbalanceと白色脂肪組織（WAT）における脂質として格納されている余分なエネルギーの結果に関連しています。褐色脂肪組織は熱を生成するために余分なエネルギーを放散する能力を持っていながら、拡大されたWATは、増加した体重と体重に関連付けられています。したがって、BATは、寒さと肥満2,3の両方に対する保護として機能することができます。これは、タンパク質1（UCP1）を脱共役することによってミトコンドリアにおける電子伝達の脱共役することによって達成される。このタンパク質は、BAT 3で熱発生をnonshiveringための顕著な特徴と考えられている。近年のいくつかの研究では、成人の人間が機能BAT 4-8を持っていることを明らかにし、その結果、ヒトにおけるBATの操作は、肥満とそれに関連する疾患との闘いにおいて、潜在的な治療介入することができます。 jove_contentは &quot;&gt;現在の証拠は褐色脂肪細胞の2種類がげっ歯類に存在することを示し、&quot;古典的な &quot;または&quot;既存の &quot;褐色脂肪は、出生前の段階で開発し、肩甲間部やその他の末梢組織における専用の褐色脂肪デポを形成している一方。 、褐色脂肪（いわゆるブライトやベージュ細胞と呼ばれる）の &quot;誘導&quot;フォームは、出生後の段階で開発し、白色脂肪組織中に散在して表示されます。褐色脂肪細胞の2つのタイプは、異なる発達の起源で区切られています。既存ながら褐色脂肪細胞はmyoblastsicライクMyf5前駆体から生じる、WATに点在誘導BRITE /ベージュ細胞は非Myf5系統9,10から生じる。さらに、この細胞型の調節経路はMyf5由来の茶色とは異なる可能性が高い脂肪11。ベージュ細胞（白色脂肪のすなわち &quot;褐変&quot;）の開発が慢性寒冷暴露へとに応答して活性化することができますβ3-アドレナリン受容体アゴニスト、大人の12月14日でのPPARγアゴニスト。ベージュ/ BRITE細胞は全体のエネルギーバランスを操作するための有望な治療標的となる可能性がある、潜在的肥満治療の一部になることができますので、環境への手がかりはベージュの開発を制御する正確な分子機構とシグナル伝達経路を理解することが重要です細胞。 前駆脂肪細胞の分化ではなく非同期に行われ、それがその場で 15 で細胞を検出することは困難であるとして、白色脂肪の褐変の分子制御を理解するために、in vitroの実験で最も適している。脂肪細胞の開発に関する研究はこれまでそのような、3T3-L1、3T3-F442AまたはHIB1などの細胞株では、主に行われてきたが、これらの細胞株はベージュ細胞の分子署名を欠いているように見える。一方、皮下WATから分離された主要な脂肪細胞はプロセッを再現する可能性が最も高い細胞自律的に白色脂肪の褐変のだ。ここでは、脂肪組織から間質血管画分の効果的な分離のためとPPARγアゴニストに応答して、白色脂肪の褐変を誘導するためのプロトコルを提供する。ロシグリタゾンは、これらの細胞における褐変の特に有効なメディエーターであることが示されている。以前に16を示唆したように、この細胞系は、ベージュ/ブライト細胞の発達を研究するために信頼性の高い携帯電話システムを提供するために使用することができます。

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> 試薬 </td></tr><tr><td> Collaginase D </td><td>ロッシュ</td><td> 11088874103 </td><td></td></tr><tr><td>ディスパーゼII </td><td>ロッシュ</td><td> 04942078001 </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2を </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> DMEM培地</td><td>フィッシャー</td><td> 10017-CV </td><td>ピルビン酸ナトリウムなし2,5 g / lのグルコースとL-グルタミン</td></tr><tr><td>インスリン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> T3（3,3 &#39;、5 - トリヨード-L-チロニン） </td><td>シグマ</td><td> T-2877 </td><td></td></tr><tr><td>インドメタシン</td><td>シグマ</td><td> I-7378 </td><td></td></tr><tr><td>デキサメタゾン</td><td>シグマ</td><td> D-1756 </td><td></td></tr><tr><td> IBMX </td><td>シグマ</td><td> I-5879 </td><td></td></tr><tr><td>ロシ</td><td>シグマ</td><td> R-2408 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 機器 </td></tr><tr><td>コラーゲンコートディッシュ</td><td> BD </td><td> 354450 </td><td> 10cmプレート</td></tr><tr><td> 70μmのフィルター</td><td> BDファルコン</td><td> 352350 </td><td>セルストレーナー、70μmのナイロン1/ea </td></tr></tbody></table>

isolation and differentiation of stromal vascular cells to beige/brite cells

褐色脂肪細胞は、ミトコンドリアの呼吸鎖を切り離すと熱などの化学的エネルギーを放散する能力を持っています。白色脂肪組織中のUCP1陽性褐色脂肪細胞（いわゆるベージュまたはBRITE細胞と呼ばれる）の開発が強く、したがって、そのような慢性の寒冷暴露などの環境合図の様々な方法によって、またはPPARγアゴニストにより誘導され、この細胞型は、治療標的としての可能性を秘めている肥満治療。最も不死脂肪線は文化の中で白色脂肪の &quot;褐色化&quot;の過程を再現することはできませんが、皮下の白色脂肪組織における間質血管画分（WAT）から単離された主要な脂肪細胞はBRITE /ベージュ細胞分化の分子制御を研究するために信頼性の高い携帯電話システムを提供。ここでは、主要な脂肪細胞を効果的に分離するための、文化の中でブライトベージュ/細胞への分化を誘導するためのプロトコルを記述します。褐変効果は褐色脂肪選択的マークの発現によって評価することができるそのようなUCP1としてERS。

主要な脂肪細胞の褐変は、qRT-PCRによりmRNAのUCP1の発現と他の褐色脂肪特異的または選択的な遺伝子を測定することによってアクセスすることができます。 図1に示さ鼠径WAT-由来の初代脂肪細胞における遺伝子発現データです。細胞はそれぞれ、50nmおよび500nmにおけるロシグリタゾンの二つの異なる用量の存在下で分化するように誘導された。細胞のサブセットは、収穫前?...

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Isolation and Differentiation of Stromal Vascular Cells to Beige/Brite Cells

マウスにおける白色脂肪組織から単離された脂肪細胞は、一次白ベージュ/ブライト細胞に分化させることができる。白色脂肪の &quot;焦げ目&quot;の分子調節を研究するために信頼性の高い細胞モデルシステムは、ここに提示されます。

ベージュ/ブライト細胞間質血管細胞の単離と分化

Brown adipocytes have the ability to uncouple the  respiratory chain in mitochondria and dissipate chemical energy as heat.  Development of UCP1-positive ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

ヒト臍帯由来間葉系幹細胞（MSCs）と血管内皮コロニー形成前駆細胞（ECFCs）の単離および動物血清自由膨張

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

間葉転換を誘導し、上皮の分析

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

マウス大動脈内皮細胞の単離および初代培養

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation of CD146+ Resident Lung Mesenchymal Stromal Cells from Rat Lungs

Isolation of CD146+ Resident Lung Mesenchymal Stromal Cells from Rat Lungs

CD146の単離<sup&gt; +</supラット肺から&gt;常駐肺間葉系幹細胞

Mesenchymal stromal cells (MSCs) are increasingly recognized for their therapeutic potential in a wide range of diseases, including lung diseases. Besides ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

マウス冠動脈血管平滑筋細胞の単離

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

ゼブラフィッシュにおける腎毒素マイクロインジェクションは急性腎障害をモデルに

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

動的細胞突起におけるソフトウェア支援トラッキングのためのグラフィカルユーザインタフェース

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

分離と性質、大人マウス心臓から心臓の幹細胞の分化

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...

Isolation, Proliferation and Differentiation of Rhesus Macaque Adipose-Derived Stem Cells

アカゲザル脂肪由来幹細胞の単離・増殖・分化

Adipose tissue provides a rich and accessible source of multipotent stem cells, which are able to self-renew. These adipose-derived stem cells (ADSCs) ...

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Ca2+過渡現象とL型カルシウム電流の同時測定のための高品質マウス心房および心室筋細胞の分離

Mouse models play a crucial role in arrhythmia research and allow studying key mechanisms of arrhythmogenesis including altered ion channel function and ...