Name: mitochondria-associated er membranes (mams) and glycosphingolipid enriched microdomains (gems): isolation from mouse brain
Uploaded: 2013-03-04T12:15:00
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हम प्रारंभिक प्रोटोकॉल की अवधारणा में Renata सानो के योगदान को स्वीकार करते हैं. Ad&#39;A. आनुवंशिकी और जीन थेरेपी में संपन्न चेयर (JFC) बच्चों के लिए जौहरी को धारण करता है. इस काम के हिस्से में NIH GM60905 अनुदान, और CA021764 DK52025, और अमेरिकी लेबनान सीरिया एसोसिएटेड दान (ALSAC) द्वारा वित्त पोषित किया गया था.

<html> निम्नलिखित प्रोटोकॉल और MAMs और जवाहरात के अलगाव के शोधन के लिए माउस मस्तिष्क से करना है समाधान mitochondria MAMs और जवाहरात के अलगाव के लिए आवश्यक Fractionation के लिए कच्चे तेल mitochondrial तैयारी प्राप्त: <...

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	<li>Poburko, D., Kuo, K. H., Dai, J., Lee, C. H., van Breemen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organellar+junctions+promote+targeted+Ca2++signaling+in+smooth+muscle:+why+two+membranes+are+better+than+one.">Organellar junctions promote targeted Ca2+ signaling in smooth muscle: why two membranes are better than one.</a> Trends Pharmacol. Sci. 25 (1), 8-15 (2004).</li><li>Pani, B., Ong, H. L., Liu, X., Rauser, K., Ambudkar, I. S., Singh, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+rafts+determine+clustering+of+STIM1+in+endoplasmic+reticulum-plasma+membrane+junctions+and+regulation+of+store-operated+Ca2++entry+(SOCE.">Lipid rafts determine clustering of STIM1 in endoplasmic reticulum-plasma membrane junctions and regulation of store-operated Ca2+ entry (SOCE.</a> J. Biol. Chem. 283 (25), 17333-17340 (2008).</li><li>Levine, T., Rabouille, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum:+one+continuous+network+compartmentalized+by+extrinsic+cues.">Endoplasmic reticulum: one continuous network compartmentalized by extrinsic cues.</a> Curr. Opin. Cell Biol. 17 (4), 362-368 (2005).</li><li>Sano, R., Annunziata, I., Patterson, A., Moshiach, S., Gomero, E., Opferman, J., Forte, M., d'Azzo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM1-ganglioside+accumulation+at+the+mitochondria-associated+ER+membranes+links+ER+stress+to+Ca(2+)-dependent+mitochondrial+apoptosis.">GM1-ganglioside accumulation at the mitochondria-associated ER membranes links ER stress to Ca(2+)-dependent mitochondrial apoptosis.</a> Mol. Cell. 36 (3), 500-511 (2009).</li><li>Raturi, A., Simmen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Where+the+endoplasmic+reticulum+and+the+mitochondrion+tie+the+knot:+The+mitochondria-associated+membrane+(MAM).">Where the endoplasmic reticulum and the mitochondrion tie the knot: The mitochondria-associated membrane (MAM).</a> Biochim. Biophys. Acta. , (2012).</li><li>Giorgi, C., De Stefani, D., Bononi, A., Rizzuto, R., Pinton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+link+between+the+mitochondrial+network+and+the+endoplasmic+reticulum.">Structural and functional link between the mitochondrial network and the endoplasmic reticulum.</a> Int. J. Biochem. Cell Biol. 41 (10), 1817-1827 (2009).</li><li>d'Azzo, A., Tessitore, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sano+Gangliosides+as+apoptotic+signals+in+ER+stress+response.">Sano Gangliosides as apoptotic signals in ER stress response.</a> Cell Death Differ. 13, 404-414 (2006).</li><li>Kroemer, G., Galluzzi, L., Brenner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+membrane+permeabilization+in+cell+death.">Mitochondrial membrane permeabilization in cell death.</a> Physiol. Rev. 87, 99-163 (2007).</li><li>Rizzuto, R., Brini, M., Murgia, M., Pozzan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdomains+with+high+Ca2++close+to+IP3-sensitive+channels+that+are+sensed+by+neighboring+mitochondria.">Microdomains with high Ca2+ close to IP3-sensitive channels that are sensed by neighboring mitochondria.</a> Science. 262, 744-747 (1993).</li><li>Lynes, E. M., Bui, M., Yap, M. C., Benson, M. D., Schneider, B., Ellgaard, L., Berthiaume, L. G., Simmen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoylated+TMX+and+calnexin+target+to+the+mitochondria-associated+membrane.">Palmitoylated TMX and calnexin target to the mitochondria-associated membrane.</a> EMBO J. 31 (2), 457-470 (2011).</li><li>Fujimoto, M., Hayashi, T., Su, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+cholesterol+in+the+association+of+endoplasmic+reticulum+membranes+with+mitochondria.">The role of cholesterol in the association of endoplasmic reticulum membranes with mitochondria.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 417 (1), 635-639 (2012).</li><li>Grimm, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ER-mitochondria+interface:+the+social+network+of+cell+death.">The ER-mitochondria interface: the social network of cell death.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1823 (2), 327-334 (2012).</li><li>Vance, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phospholipid+synthesis+in+a+membrane+fraction+associated+with+mitochondria.">Phospholipid synthesis in a membrane fraction associated with mitochondria.</a> J. Biol. Chem. 265, 7248-7256 (1990).</li><li>Wieckowski, M. R., Giorgi, C., Lebiedzinska, M., Duszynski, J., Pinton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mitochondria-associated+membranes+and+mitochondria+from+animal+tissues+and+cells.">Isolation of mitochondria-associated membranes and mitochondria from animal tissues and cells.</a> Nat. Protoc. 4 (11), 1582-1590 (2009).</li><li>Pizzo, P., Viola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+lipid+rafts:+structure+and+function.">Lymphocyte lipid rafts: structure and function.</a> Curr. Opin. Immunol. 15 (3), 255-260 (2003).</li></ol>

intracellular झिल्ली के बीच या organelles और कोशिकाओं के प्लाज्मा झिल्ली के बीच संपर्क की साइटों बुनियादी सेलुलर प्रक्रियाओं के लिए गतिशील संकेत प्लेटफार्मों का प्रतिनिधित्व करते हैं. उनके और दोनों शारीरिक और रोग ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक / सामग्री के नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियां </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> अभिकर्मकों </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> किसी पदार्थ अथवा मिक्श्चर के घटकों का पृथक होना </td></tr><tr><td> इक्षुशर्करा </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> S5-500 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम बिकारबोनिट </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> S-5761 </td><td></td></tr><tr><td> मैग्नेशियम क्लोराइड, Hexahydrate </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> BP214-500 </td><td></td></tr><tr><td> कैल्शियम क्लोराइड dihydrate </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> सी ५०८० </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> MAM </td></tr><tr><td> D-Mannitol </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> M9546-250G </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> BP310-500 </td><td></td></tr><tr><td> EGTA </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> E4378-250G </td><td></td></tr><tr><td> BSA, अंश वी, हीट शॉक Lyophilizate, </td><td> Roche </td><td> 03-116-964-001 </td><td></td></tr><tr><td> Percoll </td><td> जीई </td><td> 17-0891-02 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> मणि </td></tr><tr><td> X-100 ट्राइटन </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> T9284-500 मिलीग्राम </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम क्लोराइड </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> S271-3 </td><td></td></tr><tr><td> Tris बेस </td><td> Roche </td><td> 03-118-142-001 </td><td></td></tr><tr><td> एचसीएल </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> A144S-500 </td><td></td></tr&gt; <tr><td> EDTA </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> BP120-500 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम Dodecyl सल्फेट (एसडीएस) </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> BP166-500 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> सामान्य </td></tr><tr><td> Protease inhibitors गोलियां, पूरी EDTA मुक्त </td><td> Roche </td><td> 11-873-580-001 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> उपकरणों </td></tr><tr><td> 2 मिलीलीटर Douce सभी ग्लास ऊतक Grinders </td><td> Kimble चेस </td><td> 885300-0002 </td><td></td></tr><tr><td> 15 मिलीलीटर शंक्वाकार Polypropylene अपकेंद्रित्र ट्यूबों, बी.डी. फाल्कन </td><td> BD </td><td> 352097 </td><td></td></tr><tr><td> 30 मिलीलीटर राउंड नीचे ग्लास अपकेंद्रित्र ट्यूबों </td><td> Kimble चेस </td><td> 45500-30 </td><td></td></tr><tr><td> 15 मिलीलीटर दौर नीचे ग्लास CentriFUGE ट्यूबें </td><td> Kimble चेस </td><td> 45500-15 </td><td></td></tr><tr><td> Ultracentrifuge ट्यूबों, अति स्पष्ट, Thinwall, 14x89 मिमी </td><td> Beckman-कल्टर </td><td> 344059 </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> कोल - परमार </td><td> PM996 </td><td></td></tr><tr><td> डिस्पोजेबल borosilicate ग्लास पाश्चर Pipets, 9 &quot; </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 13-678-20C </td><td></td></tr></tbody></table>

mitochondria-associated er membranes (mams) and glycosphingolipid enriched microdomains (gems): isolation from mouse brain

Intracellular organelles अलग आकार और संरचना है, जो सेल विशिष्ट आंतरिक और बाह्य cues के अधीन हैं के साथ अत्यधिक गतिशील संरचनाओं हैं. उनके झिल्ली अक्सर परिभाषित संपर्क साइटों, जो संकेतन अणुओं और झिल्ली 1,2,3,4 घटकों के आदान - प्रदान के लिए केन्द्र बन juxtaposed. अंतर - organellar झिल्ली microdomains कि endoplasmic जालिका (ईआर) और IP3 संवेदनशील 2 Ca + चैनल mitochondria संबद्ध ईआर झिल्ली या 4,5,6 MAMs के रूप में जाना जाता है के उद्घाटन के अवसर पर mitochondria के बीच का गठन कर रहे हैं. रचना / प्रोटीन लिपिड और इन झिल्ली संपर्क साइटों की जैव रासायनिक गुणों को बड़े पैमाने पर किया गया है intracellular 2 4,5,6 + Ca को विनियमित करने में उनकी भूमिका के संबंध में विशेष रूप से अध्ययन किया. ईआर के intracellular Ca 2 प्राथमिक स्टोर के रूप में कार्य करता है, और इस क्षमता में 2 सीए के एक सेलुलर प्रक्रियाओं के असंख्य अनुप्रवाह को नियंत्रित + संकेतन, भंडारबाद translational प्रोटीन तह और maturation7 प्रोटीन uding. Mitochondria, दूसरे हाथ पर, साइटोसोलिक Ca 2 + एकाग्रता buffering जिससे apoptotic रास्ते की दीक्षा 2 Ca + 4,8 असंतुलित होना के बहाव को रोकने के द्वारा Ca 2 + homeostasis, को बनाए रखने. MAMs की गतिशील प्रकृति उन्हें आदर्श साइटों Ca 2 + संकेतन और mitochondrial Ca 2 + एकाग्रता, लिपिड biosynthesis और परिवहन, ऊर्जा चयापचय और सेल अस्तित्व 4,9,10,11,12 के नियमन सहित बुनियादी सेलुलर तंत्र, टुकड़े करना करने के लिए बनाता है. कई प्रोटोकॉल जिगर ऊतक और संवर्धित कोशिकाओं 13,14 से इन microdomains की शुद्धि के लिए वर्णित किया गया है. खाते में पहले प्रकाशित तरीकों उठाते हुए, हम mitochondria और वयस्क माउस मस्तिष्क से MAMs के अलगाव के लिए एक प्रोटोकॉल अनुकूल है. इस प्रक्रिया के लिए हम एक अतिरिक्त शोधन कदम है, अर्थात् एक ट्राइटन X100 निष्कर्षण जोड़ लिया है, जो ईअलगाव nables glycosphingolipid MAMs की समृद्ध microdomain अंश (मणि) के. ये मणि तैयारी caveolae और लिपिड rafts, प्लाज्मा झिल्ली या अन्य intracellular झिल्ली से व्युत्पन्न के साथ कई प्रोटीन घटकों का हिस्सा है, और रिसेप्टर प्रोटीन के क्लस्टरिंग के लिए अंक सभा के रूप में है और प्रोटीन प्रोटीन 4,15 बातचीत के लिए कार्य करने का प्रस्ताव कर रहे हैं.

इस प्रोटोकॉल का उपयोग हम सुरक्षित रूप से यह अलगाव और MAMs, जवाहरात और माउस मस्तिष्क से mitochondrial भिन्न की शुद्धि के लिए सिफारिश कर सकते हैं के साथ हमारे अनुभव के आधार पर. प्रक्रिया के रूप में उल्लिखित अत्यधिक प?...

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Mitochondria-associated ER Membranes MAMs and Glycosphingolipid Enriched Microdomains GEMs: Isolation from Mouse Brain

इस प्रक्रिया दिखाता है कि कैसे वयस्क माउस मस्तिष्क mitochondria से जुड़े ईआर झिल्ली या MAMs और glycosphingolipid समृद्ध MAMs और mitochondrial तैयारी से microdomain fractions से अलग करने के लिए.

Mitochondria से जुड़े ईआर (MAMs) झिल्ली और Glycosphingolipid समृद्ध (रत्न) Microdomains: माउस मस्तिष्क से अलगाव

Intracellular organelles are highly dynamic structures with varying shape and composition, which are subjected to cell-specific intrinsic and extrinsic ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Mitochondria-associated ER Membranes (MAMs) and Glycosphingolipid Enriched Microdomains (GEMs): Isolation from Mouse Brain

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भ्रूण अग्रमस्तिष्क से endothelial कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

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Dissection and Isolation of Murine Glia from Multiple Central Nervous System Regions

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A Fibrin-Enriched and tPA-Sensitive Photothrombotic Stroke Model

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