Name: real-time imaging of heterotypic platelet-neutrophil interactions on the activated endothelium during vascular inflammation and thrombus formation in live mice
Uploaded: 2013-04-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Imaging of Heterotypic Platelet-neutrophil Interactions on the Activated Endothelium During Vascular Inflammation and Thrombus Formation in Live Mic

وأيد هذا العمل في جزء من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (P30 HL101302 وRO1 HL109439 لJC) وجمعية القلب الأمريكية (SDG 5270005 لJC). وأيد A. Barazia من منحة المعاهد الوطنية للصحة T32HL007829 التدريب.

1. إعداد مجهر Intravital (الشكل 1A) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد العازلة superfusion (125 ملي كلوريد الصوديوم، 4.5 ملي بوكل، 2.5 ملي CaCl 2، 1 ملم MgCl 2، و 17 مم 3 NaHCO، ودرجة الحموضة 7.4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على الدورة الدموية حمام الماء ...

<ol>
	<li>Wagner, D. D., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vessel+wall+and+its+interactions.">The vessel wall and its interactions.</a> Blood. 111, 5271-5281 (2008).</li><li>Nieswandt, B., Kleinschnitz, C., Stoll, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischaemic+stroke:+a+thrombo-inflammatory+disease.">Ischaemic stroke: a thrombo-inflammatory disease.</a> J. Physiol. 589, 4115-4123 (2011).</li><li>Yang, J., Furie, B. C., Furie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+of+P-selectin+glycoprotein+ligand-1:+its+role+as+a+selectin+counterreceptor+in+leukocyte-endothelial+and+leukocyte-platelet+interaction.">The biology of P-selectin glycoprotein ligand-1: its role as a selectin counterreceptor in leukocyte-endothelial and leukocyte-platelet interaction.</a> Thromb. Haemost. 81, 1-7 (1999).</li><li>Zarbock, A., Polanowska-Grabowska, R. K., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-neutrophil-interactions:+linking+hemostasis+and+inflammation.">Platelet-neutrophil-interactions: linking hemostasis and inflammation.</a> Blood Rev. 21, 99-111 (2007).</li><li>Chen, J., Lopez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+of+platelets+with+subendothelium+and+endothelium.">Interactions of platelets with subendothelium and endothelium.</a> Microcirculation. 12, 235-246 (2005).</li><li>Konstantopoulos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+levels+of+shear+support+neutrophil-platelet+adhesion+and+neutrophil+aggregation+in+blood+via+P-selectin+and+beta2-integrin.">Venous levels of shear support neutrophil-platelet adhesion and neutrophil aggregation in blood via P-selectin and beta2-integrin.</a> Circulation. 98, 873-882 (1998).</li><li>Maugeri, N., de Gaetano, G., Barbanti, M., Donati, M. B., Cerletti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+platelet-polymorphonuclear+leukocyte+interactions:+new+clues+to+the+antithrombotic+properties+of+parnaparin,+a+low+molecular+weight+heparin.">Prevention of platelet-polymorphonuclear leukocyte interactions: new clues to the antithrombotic properties of parnaparin, a low molecular weight heparin.</a> Haematologica. 90, 833-839 (2005).</li><li>Hidalgo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotypic+interactions+enabled+by+polarized+neutrophil+microdomains+mediate+thromboinflammatory+injury.">Heterotypic interactions enabled by polarized neutrophil microdomains mediate thromboinflammatory injury.</a> Nat. Med. 15, 384-391 (2009).</li><li>Cho, J., Furie, B. C., Coughlin, S. R., Furie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+extracellular+protein+disulfide+isomerase+during+thrombus+formation+in+mice.">A critical role for extracellular protein disulfide isomerase during thrombus formation in mice.</a> J. Clin. Invest. 118, 1123-1131 (2008).</li><li>Cho, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+disulfide+isomerase+capture+during+thrombus+formation+in+vivo+depends+on+the+presence+of+beta3+integrins.">Protein disulfide isomerase capture during thrombus formation in vivo depends on the presence of beta3 integrins.</a> Blood. 120, 647-655 (2012).</li><li>Gross, P. L., Furie, B. C., Merrill-Skoloff, G., Chou, J., Furie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte-versus+microparticle-mediated+tissue+factor+transfer+during+arteriolar+thrombus+development.">Leukocyte-versus microparticle-mediated tissue factor transfer during arteriolar thrombus development.</a> Journal of Leukocyte Biology. 78, 1318-1326 (2005).</li><li>Falati, S., Gross, P., Merrill-Skoloff, G., Furie, B. C., Furie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+in+vivo+imaging+of+platelets,+tissue+factor+and+fibrin+during+arterial+thrombus+formation+in+the+mouse.">Real-time in vivo imaging of platelets, tissue factor and fibrin during arterial thrombus formation in the mouse.</a> Nat. Med. 8, 1175-1181 (2002).</li><li>Barthel, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha+1,3+fucosyltransferases+are+master+regulators+of+prostate+cancer+cell+trafficking.">Alpha 1,3 fucosyltransferases are master regulators of prostate cancer cell trafficking.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 19491-19496 (2009).</li><li>Trzpis, M., McLaughlin, P. M., de Leij, L. M., Harmsen, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+adhesion+molecule:+more+than+a+carcinoma+marker+and+adhesion+molecule.">Epithelial cell adhesion molecule: more than a carcinoma marker and adhesion molecule.</a> The American Journal of Pathology. 171, 386-395 (2007).</li><li>Junt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+visualization+of+thrombopoiesis+within+bone+marrow.">Dynamic visualization of thrombopoiesis within bone marrow.</a> Science. 317, 1767-1770 (2007).</li><li>Egan, C. E., Sukhumavasi, W., Bierly, A. L., Denkers, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+multiple+functions+of+Gr-1(+)+cell+subpopulations+during+microbial+infection.">Understanding the multiple functions of Gr-1(+) cell subpopulations during microbial infection.</a> Immunologic Research. 40, 35-48 (2008).</li></ol>

نحن هنا وصف بروتوكول مفصلة للفحص المجهري في الوقت الحقيقي intravital مضان لتصور غيروي الصفائح الدموية العدلات التفاعلات على البطانة الوعائية التهاب تنشيط أثناء وتجلط الدم. سابقا، تم الإبلاغ عن نهج مماثلة المجهرية مضان لدراسة الآلية الجزيئية لتشكيل خثرة والتهاب الأوعية...

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7447-40-7</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 2H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10035-04-8</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2 6H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7791-18-6</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>144-55-8</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% NaCl Saline</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>0409-4888-10</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>0409-2051-05</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Lloyd</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic Tubing (PE 90)</td>
			<td>BD Diagnostics</td>
			<td>427421</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic Tubing (PE 10)</td>
			<td>BD Diagnostics</td>
			<td>427401</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine TNF-&alpha;</td>
			<td>R&amp;D Systems</td>
			<td>410-MT</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dylight 488- labeled rat anti-mouse CD42b antibody</td>
			<td>Emfret Analytics</td>
			<td>X488</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647-conjugated anti-mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>108418</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NESLAB EX water bath/circulator</td>
			<td>Thermo-Scientific</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus BX61W microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TH4-100 Power</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda DG-4</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MPC-200 multi-manipulator</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROE-200 stage controller</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C9300 high-speed camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intensifier</td>
			<td>Video Scope International</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ablation Laser</td>
			<td>Photonic Instruments, Inc.</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SlideBook 5.0</td>
			<td>Intelligent Imaging Innovations</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time imaging of heterotypic platelet-neutrophil interactions on the activated endothelium during vascular inflammation and thrombus formation in live mice

تفاعل الصفائح الدموية المنشط والكريات البيضاء (العدلات في المقام الأول) على تخثر البطانة يتوسط المنشط والتهاب الأوعية الدموية. 1،2 خلال تشكيل خثرة في موقع الإصابة شريني، الصفائح الدموية تمسكا البطانة تنشيط والبروتينات المصفوفة تحت البطانة دعم المتداول العدلة والتصاق .. 3 وعلى العكس، في ظل ظروف التهابات venular، يمكن العدلات تمسكا البطانة تنشيط دعم التصاق وتراكم الصفائح الدموية في الدورة الدموية. غيروي الصفيحات التجميع العدلات، يتطلب عمليات متسلسلة من التفاعلات المحددة مستقبلات مستقبلات المضادة بين الخلايا .. 4 ومن المعروف أن الخلايا البطانية المنشط الإفراج جزيئات الالتصاق مثل عامل فون ويلبراند، وبالتالي الشروع التصاق الصفائح الدموية وتراكمها في ظل ظروف ارتفاع القص .. 5 أيضا، تنشيط الخلايا البطانية دعم المتداول العدلة والتصاق من إبداء selectinsد جزيء التصاق بين الخلايا-1 (ICAM-1)، على التوالي، في ظل ظروف القص منخفضة .. 4 صفائح الدم P-selectin يتفاعل مع العدلات من خلال P-selectin سكري يجند-1 (PSGL-1)، الأمر الذي أدى بالتالي تفعيل العدلات من integrins β2 وشركة التصاق بين أنواع الخلايا اثنين. على الرغم من التقدم في المختبر في التجارب التي يتم فيها تحديد غيروي الصفائح الدموية في الدم التفاعلات العدلات كليا أو الخلايا المعزولة، 6،7 يمكن التلاعب تلك الدراسات لم ظروف الإجهاد الناتج عن الأكسدة أثناء أمراض الأوعية الدموية. في هذا التقرير، وذلك باستخدام fluorescently التي تحمل علامات، والأجسام المضادة محددة ضد ماوس الصفائح الدموية وعلامة العدلات، ونحن تصف بروتوكول مفصلة لمراقبة مجهرية intravital التفاعلات غيروي من الصفائح الدموية والعدلات على البطانة تنشيط TNF-α خلال الناجم عن التهاب أو بعد الليزر التي يسببها إصابة في العضلة المشمرة microvessels من الفئران الحية.

باستخدام تحليل مفصل المجهر intravital، كانت الصفائح الدموية غيروي-العدلات التفاعلات على البطانة تصور المنشط عن طريق التسريب من الأجسام المضادة التي تحمل علامات fluorescently ضد الصفائح الدموية (CD42c) أو علامة العدلات (GR-1) في الفئران الحية. ف?...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Imaging of Heterotypic Platelet-neutrophil Interactions on the Activated Endothelium During Vascular Inflammation and Thrombus Formation in Live Mic

Real-time Imaging of Heterotypic Platelet-neutrophil Interactions on the Activated Endothelium During Vascular Inflammation and Thrombus Formation in Live Mice

نحن هنا نورد التجريبي لتقنية المجهر مضان intravital لتصور غيروي الصفائح الدموية العدلات التفاعلات على البطانة الوعائية التهاب تنشيط خلال تشكيل خثرة في والفئران حية. وهذه التكنولوجيا المجهرية تكون ذات قيمة لدراسة الآلية الجزيئية لأمراض الأوعية الدموية وكلاء الدوائية لاختبار في ظل ظروف المرضية في جسم المريض.

في الوقت الحقيقي التصوير من التفاعلات صفائح الدم، العدلات غيروي على البطانة الوعائية التهاب المنشط خلال تشكيل خثرة في والفئران الحية

Interaction of activated platelets and leukocytes (mainly neutrophils) on the activated endothelium mediates thrombosis and vascular inflammation.1,2 ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Real-time Imaging of Leukotriene B4 Mediated Cell Migration and BLT1 Interactions with &beta;-arrestin

Real-time Imaging of Leukotriene B4 Mediated Cell Migration and BLT1 Interactions with ÃƒÅ½Ã‚Â²-arrestin

في الوقت الحقيقي التصوير باء Leukotriene 4 الهجرة خلية وساطة BLT1 التفاعلات مع arrestin - β

G-protein coupled receptors (GPCRs) belong to the seven transmembrane protein family and mediate the transduction of extracellular signals to ...

Imaging Leukocyte Adhesion to the Vascular Endothelium at High Intraluminal Pressure

التصوير التصاق كريات بيضاء لبطانة الأوعية الدموية في الضغط داخل اللمعة السامية

Worldwide, hypertension is reported to be in approximately a quarter of the population and is the leading biomedical risk factor for mortality worldwide. ...

Detection of MicroRNAs in Microglia by Real-time PCR in Normal CNS and During Neuroinflammation

الكشف عن MicroRNAs في الخلايا الدبقية الصغيرة من قبل في الوقت الحقيقي PCR في الجهاز العصبي المركزي للمعلمين وأثناء Neuroinflammation

Microglia are cells of the myeloid lineage that reside in the central nervous system (CNS)1. These cells play an important role in pathologies of many ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

في الوقت الحقيقي تصوير لايف تي خلية اشارة تشكيل مجمع

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Real-time Imaging of Endothelial Cell-cell Junctions During Neutrophil Transmigration Under Physiological Flow

التصوير في الوقت الحقيقي من غشائي المفارق خلايا العدلات خلية أثناء التهجير تحت الفسيولوجية تدفق

During inflammation, leukocytes leave the circulation and cross the endothelium to fight invading pathogens in underlying tissues. This process is known ...

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

فك رموز والتصوير إمراض وحبال من<em&gt; المتفطرة خراج</em&gt; في الزرد الأجنة

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as an infection model to study the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

التصوير العدلات وحيدات في مساريقي الأوردة التي كتبها حيوي داخلي المجهري على الفئران مخدرة في الوقت الحقيقي

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Metabolic Characterization of Polarized M1 and M2 Bone Marrow-derived Macrophages Using Real-time Extracellular Flux Analysis

توصيف الأيض من الاستقطاب M1 M2 الضامة والعظام نخاع المستمدة من طريق في الوقت الحقيقي التحليل خارج الخلية الجريان

Specific metabolic pathways are increasingly being recognized as critical hallmarks of macrophage subsets. While LPS-induced classically activated M1 or ...

In Vitro Microfluidic Disease Model to Study Whole Blood-Endothelial Interactions and Blood Clot Dynamics in Real-Time

في نموذج المرض Microfluidic في المختبر لدراسة تفاعلات الدم الواهية الكاملة وديناميات تجلط الدم في الوقت الحقيقي

The formation of blood clots involves complex interactions between endothelial cells, their underlying matrix, various blood cells, and proteins. The ...

Blocking Lymph Flow by Suturing Afferent Lymphatic Vessels in Mice

منع تدفق اللمفاوية عن طريق خياطة الأوعية اللمفاوية Afferent في الفئران

Lymphatic vessels are critical in maintaining tissue fluid balance and optimizing immune protection by transporting antigens, cytokines, and cells to ...