Name: real-time imaging of heterotypic platelet-neutrophil interactions on the activated endothelium during vascular inflammation and thrombus formation in live mice
Uploaded: 2013-04-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Imaging of Heterotypic Platelet-neutrophil Interactions on the Activated Endothelium During Vascular Inflammation and Thrombus Formation in Live Mic

इस काम के हिस्से में स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों से अनुदान (HL101302 P30 और RO1 जे.सी. HL109439) और अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन (जे.सी. 5270005 SDG) द्वारा समर्थित किया गया. ए Barazia T32HL007829 NIH प्रशिक्षण अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.

1. Intravital माइक्रोस्कोप (चित्रा 1 ए) की तैयारी <ol><li> (125 मिमी NaCl, 4.5 मिमी KCl, 2.5 मिमी 2 CACL, 1 मिमी MgCl 2, और 17 मिमी NaHCO 3, पीएच 7.4) superfusion बफर तैयार. </li><li> एक संचार पानी के स्नान पर चालू करने के लिए 37 पर बफर का तापमान बनाए रखने औ...

<ol>
	<li>Wagner, D. D., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vessel+wall+and+its+interactions.">The vessel wall and its interactions.</a> Blood. 111, 5271-5281 (2008).</li><li>Nieswandt, B., Kleinschnitz, C., Stoll, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischaemic+stroke:+a+thrombo-inflammatory+disease.">Ischaemic stroke: a thrombo-inflammatory disease.</a> J. Physiol. 589, 4115-4123 (2011).</li><li>Yang, J., Furie, B. C., Furie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+of+P-selectin+glycoprotein+ligand-1:+its+role+as+a+selectin+counterreceptor+in+leukocyte-endothelial+and+leukocyte-platelet+interaction.">The biology of P-selectin glycoprotein ligand-1: its role as a selectin counterreceptor in leukocyte-endothelial and leukocyte-platelet interaction.</a> Thromb. Haemost. 81, 1-7 (1999).</li><li>Zarbock, A., Polanowska-Grabowska, R. K., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-neutrophil-interactions:+linking+hemostasis+and+inflammation.">Platelet-neutrophil-interactions: linking hemostasis and inflammation.</a> Blood Rev. 21, 99-111 (2007).</li><li>Chen, J., Lopez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+of+platelets+with+subendothelium+and+endothelium.">Interactions of platelets with subendothelium and endothelium.</a> Microcirculation. 12, 235-246 (2005).</li><li>Konstantopoulos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+levels+of+shear+support+neutrophil-platelet+adhesion+and+neutrophil+aggregation+in+blood+via+P-selectin+and+beta2-integrin.">Venous levels of shear support neutrophil-platelet adhesion and neutrophil aggregation in blood via P-selectin and beta2-integrin.</a> Circulation. 98, 873-882 (1998).</li><li>Maugeri, N., de Gaetano, G., Barbanti, M., Donati, M. B., Cerletti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+platelet-polymorphonuclear+leukocyte+interactions:+new+clues+to+the+antithrombotic+properties+of+parnaparin,+a+low+molecular+weight+heparin.">Prevention of platelet-polymorphonuclear leukocyte interactions: new clues to the antithrombotic properties of parnaparin, a low molecular weight heparin.</a> Haematologica. 90, 833-839 (2005).</li><li>Hidalgo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotypic+interactions+enabled+by+polarized+neutrophil+microdomains+mediate+thromboinflammatory+injury.">Heterotypic interactions enabled by polarized neutrophil microdomains mediate thromboinflammatory injury.</a> Nat. Med. 15, 384-391 (2009).</li><li>Cho, J., Furie, B. C., Coughlin, S. R., Furie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+extracellular+protein+disulfide+isomerase+during+thrombus+formation+in+mice.">A critical role for extracellular protein disulfide isomerase during thrombus formation in mice.</a> J. Clin. Invest. 118, 1123-1131 (2008).</li><li>Cho, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+disulfide+isomerase+capture+during+thrombus+formation+in+vivo+depends+on+the+presence+of+beta3+integrins.">Protein disulfide isomerase capture during thrombus formation in vivo depends on the presence of beta3 integrins.</a> Blood. 120, 647-655 (2012).</li><li>Gross, P. L., Furie, B. C., Merrill-Skoloff, G., Chou, J., Furie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte-versus+microparticle-mediated+tissue+factor+transfer+during+arteriolar+thrombus+development.">Leukocyte-versus microparticle-mediated tissue factor transfer during arteriolar thrombus development.</a> Journal of Leukocyte Biology. 78, 1318-1326 (2005).</li><li>Falati, S., Gross, P., Merrill-Skoloff, G., Furie, B. C., Furie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+in+vivo+imaging+of+platelets,+tissue+factor+and+fibrin+during+arterial+thrombus+formation+in+the+mouse.">Real-time in vivo imaging of platelets, tissue factor and fibrin during arterial thrombus formation in the mouse.</a> Nat. Med. 8, 1175-1181 (2002).</li><li>Barthel, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha+1,3+fucosyltransferases+are+master+regulators+of+prostate+cancer+cell+trafficking.">Alpha 1,3 fucosyltransferases are master regulators of prostate cancer cell trafficking.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 19491-19496 (2009).</li><li>Trzpis, M., McLaughlin, P. M., de Leij, L. M., Harmsen, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+adhesion+molecule:+more+than+a+carcinoma+marker+and+adhesion+molecule.">Epithelial cell adhesion molecule: more than a carcinoma marker and adhesion molecule.</a> The American Journal of Pathology. 171, 386-395 (2007).</li><li>Junt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+visualization+of+thrombopoiesis+within+bone+marrow.">Dynamic visualization of thrombopoiesis within bone marrow.</a> Science. 317, 1767-1770 (2007).</li><li>Egan, C. E., Sukhumavasi, W., Bierly, A. L., Denkers, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+multiple+functions+of+Gr-1(+)+cell+subpopulations+during+microbial+infection.">Understanding the multiple functions of Gr-1(+) cell subpopulations during microbial infection.</a> Immunologic Research. 40, 35-48 (2008).</li></ol>

यहाँ हम वास्तविक समय प्रतिदीप्ति intravital संवहनी सूजन और घनास्त्रता के दौरान सक्रिय endothelium पर heterotypic प्लेटलेट न्युट्रोफिल बातचीत कल्पना माइक्रोस्कोपी के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन. पहले, thrombus गठन और सं?...

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7447-40-7</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 2H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10035-04-8</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2 6H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7791-18-6</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>144-55-8</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% NaCl Saline</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>0409-4888-10</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>0409-2051-05</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Lloyd</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic Tubing (PE 90)</td>
			<td>BD Diagnostics</td>
			<td>427421</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic Tubing (PE 10)</td>
			<td>BD Diagnostics</td>
			<td>427401</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine TNF-&alpha;</td>
			<td>R&amp;D Systems</td>
			<td>410-MT</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dylight 488- labeled rat anti-mouse CD42b antibody</td>
			<td>Emfret Analytics</td>
			<td>X488</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647-conjugated anti-mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>108418</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NESLAB EX water bath/circulator</td>
			<td>Thermo-Scientific</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus BX61W microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TH4-100 Power</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda DG-4</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MPC-200 multi-manipulator</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROE-200 stage controller</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C9300 high-speed camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intensifier</td>
			<td>Video Scope International</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ablation Laser</td>
			<td>Photonic Instruments, Inc.</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SlideBook 5.0</td>
			<td>Intelligent Imaging Innovations</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time imaging of heterotypic platelet-neutrophil interactions on the activated endothelium during vascular inflammation and thrombus formation in live mice

पर arteriolar चोट के स्थल पर thrombus गठन के दौरान सक्रिय endothelium mediates घनास्त्रता और संवहनी सूजन पर सक्रिय और प्लेटलेट्स (मुख्य रूप से neutrophils) leukocytes की सहभागिता. 1,2, सक्रिय endothelium और subendothelial मैट्रिक्स प्रोटीन अनुयायी प्लेटलेट्स न्युट्रोफिल रोलिंग और आसंजन का समर्थन 3. इसके विपरीत, venular भड़काऊ शर्तों के तहत, सक्रिय endothelium अनुयायी neutrophils आसंजन और प्लेटलेट्स परिसंचारी के संचय का समर्थन कर सकते हैं. Heterotypic एकत्रीकरण प्लेटलेट न्युट्रोफिल विशिष्ट रिसेप्टर काउंटर कोशिकाओं के बीच रिसेप्टर बातचीत द्वारा अनुक्रमिक प्रक्रियाओं की आवश्यकता है 4. यह ज्ञात है कि वॉन Willebrand कारक के रूप में सक्रिय endothelial कोशिकाओं आसंजन अणुओं जारी है, जिससे उच्च कतरनी शर्तों के तहत प्लेटलेट आसंजन और संचय की शुरुआत. इसके अलावा 5, सक्रिय endothelial कोशिकाओं न्युट्रोफिल रोलिंग और व्यक्त selectins द्वारा आसंजन एक का समर्थनघ कहनेवाला आसंजन अणु 1 (ICAM-1), क्रमशः कम कतरनी की शर्तों के तहत, 4 पी selectin प्लेटलेट. के माध्यम से neutrophils के साथ सूचना का आदान प्रदान पी selectin ligand एक glycoprotein (PSGL-1), जिससे न्युट्रोफिल β2 integrins और फर्म की सक्रियता उत्प्रेरण दो प्रकार की कोशिकाओं के बीच आसंजन. इन विट्रो प्रयोगों में प्रगति है जिसमें heterotypic प्लेटलेट न्युट्रोफिल बातचीत पूरे रक्त या अलग कक्षों, 6,7 में निर्धारित कर रहे हैं के बावजूद उन अध्ययनों oxidant तनाव की स्थिति रोग के दौरान हेरफेर नहीं कर सकते. इस रिपोर्ट में, एक प्लेटलेट और न्युट्रोफिल मार्कर माउस के खिलाफ fluorescently लेबल, विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग करते हुए, हम एक विस्तृत intravital सूक्ष्म प्लेटलेट्स और neutrophils की TNF-α प्रेरित सूजन या लेजर प्रेरित के बाद के दौरान सक्रिय endothelium पर heterotypic बातचीत की निगरानी के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन जीवित चूहों cremaster मांसपेशी microvessels में चोट.

एक विस्तृत intravital माइक्रोस्कोपी विश्लेषण का प्रयोग, सक्रिय endothelium पर heterotypic प्लेटलेट न्युट्रोफिल बातचीत एक (CD42c) प्लेटलेट या जीवित चूहों में न्युट्रोफिल मार्कर (जीआर-1) के खिलाफ fluorescently लेबल एंटीबॉडी के अर्क से द?...

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Real-time Imaging of Heterotypic Platelet-neutrophil Interactions on the Activated Endothelium During Vascular Inflammation and Thrombus Formation in Live Mice

यहाँ हम प्रतिदीप्ति intravital माइक्रोस्कोपी का एक प्रयोगात्मक तकनीक संवहनी सूजन और जीवित चूहों में thrombus गठन के दौरान सक्रिय endothelium पर heterotypic प्लेटलेट न्युट्रोफिल बातचीत कल्पना की रिपोर्ट. इस सूक्ष्म प्रौद्योगिकी रोग के आणविक तंत्र का अध्ययन करने के लिए और pathophysiological शर्तों के तहत pharmacologic एजेंटों का परीक्षण करने के लिए मूल्यवान होगा.

संवहनी और लाइव चूहे में thrombus गठन सूजन के दौरान सक्रिय अन्तःस्तर पर heterotypic प्लेटलेट न्युट्रोफिल बातचीत की वास्तविक समय इमेजिंग

Interaction of activated platelets and leukocytes (mainly neutrophils) on the activated endothelium mediates thrombosis and vascular inflammation.1,2 ...

Research

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