Name: measuring intracellular ca2+ changes in human sperm using four techniques: conventional fluorometry, stopped flow fluorometry, flow cytometry and single cell imaging
Uploaded: 2013-05-24T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell

المؤلفان بالشكر خوسيه لويس دي لا فيغا، اريكا Melchy والدكتور تاكويا نيشيجاكي للحصول على المساعدة الفنية. وأيد هذا العمل من قبل المجلس الوطني للبحوث والتكنولوجيا Ciencia (CONACYT والمكسيك) (99333 و 128566 لCT)؛ المديرية العامة للAsuntos ديل الشخصية Académico / جامعة المكسيك الوطنية المستقلة (IN202212-3 إلى CT).

في هذه الورقة ونحن التقرير استخدام أربعة أساليب المذكورة أعلاه لقياس [كا 2 +] ط التغيرات في خلايا الحيوانات المنوية البشرية. كنا البروجسترون لاشعال كا 2 + ردا على ذلك، كما يتم تأسيس جيدا أن هذا الستيرويد تنتج عابر [كا 2 +] ط زيادة في الحيوانات...

<ol>
	<li>Bouschet, T., Henley, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+as+an+extracellular+signalling+molecule:+perspectives+on+the+Calcium+Sensing+Receptor+in+the+brain.">Calcium as an extracellular signalling molecule: perspectives on the Calcium Sensing Receptor in the brain.</a> Comptes Rendus Biologies. 328, 691-700 (2005).</li><li>Darszon, A., Nishigaki, T., Beltran, C., Trevino, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+channels+in+the+development,+maturation,+and+function+of+spermatozoa.">Calcium channels in the development, maturation, and function of spermatozoa.</a> Physiol. Rev. 91, 1305-1355 (2011).</li><li>Esposito, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+deficient+for+soluble+adenylyl+cyclase+are+infertile+because+of+a+severe+sperm-motility+defect.">Mice deficient for soluble adenylyl cyclase are infertile because of a severe sperm-motility defect.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 2993-2998 (2004).</li><li>Avenarius, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+male+infertility+caused+by+mutations+in+the+CATSPER1+channel+protein.">Human male infertility caused by mutations in the CATSPER1 channel protein.</a> American Journal of Human Genetics. 84, 505-510 (2009).</li><li>Carlson, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+targeting+of+native+CatSper+channels+reveals+a+required+role+in+maintenance+of+sperm+hyperactivation.">Pharmacological targeting of native CatSper channels reveals a required role in maintenance of sperm hyperactivation.</a> PLoS ONE. 4, e6844 (2009).</li><li>Brokaw, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+flagellar+response+during+the+chemotaxis+of+bracken+spermatozoids.">Calcium and flagellar response during the chemotaxis of bracken spermatozoids.</a> J. Cell. Physiol. 83, 151-158 (1974).</li><li>Visconti, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capacitation+of+mouse+spermatozoa.+II.+Protein+tyrosine+phosphorylation+and+capacitation+are+regulated+by+a+cAMP-dependent+pathway.">Capacitation of mouse spermatozoa. II. Protein tyrosine phosphorylation and capacitation are regulated by a cAMP-dependent pathway.</a> Development. 121, 1139-1150 (1995).</li><li>Svahn, H. A., van den Berg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cells+or+large+populations.">Single cells or large populations.</a> Lab on a chip. 7, 544-546 (2007).</li><li>Pepperkok, R., Ellenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+fluorescence+microscopy+for+systems+biology.">High-throughput fluorescence microscopy for systems biology.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 690-696 (2006).</li><li>Strunker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CatSper+channel+mediates+progesterone-induced+Ca2++influx+in+human+sperm.">The CatSper channel mediates progesterone-induced Ca2+ influx in human sperm.</a> Nature. 471, 382-386 (2011).</li><li>Lishko, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Control+of+Male+Fertility+by+Spermatozoan+Ion+Channels.">The Control of Male Fertility by Spermatozoan Ion Channels.</a> Annu. Rev. Physiol. , (2011).</li><li>Kao, J. P., Harootunian, A. T., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+generated+cytosolic+calcium+pulses+and+their+detection+by+fluo-3.">Photochemically generated cytosolic calcium pulses and their detection by fluo-3.</a> J. Biol. Chem. 264, 8179-8184 (1989).</li><li>Kilic, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caged+progesterone:+a+new+tool+for+studying+rapid+nongenomic+actions+of+progesterone.">Caged progesterone: a new tool for studying rapid nongenomic actions of progesterone.</a> Journal of the American Chemical Society. 131, 4027-4030 (2009).</li><li>Lishko, P. V., Botchkina, I. L., Kirichok, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+activates+the+principal+Ca2++channel+of+human+sperm.">Progesterone activates the principal Ca2+ channel of human sperm.</a> Nature. 471, 387-391 (2011).</li><li>Xia, J., Ren, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BSA-induced+Ca2++influx+during+sperm+capacitation+is+CATSPER+channel-dependent.">The BSA-induced Ca2+ influx during sperm capacitation is CATSPER channel-dependent.</a> Reprod. Biol. Endocrinol. 7, 119 (2009).</li><li>Galantino-Homer, H. L., Florman, H. M., Storey, B. T., Dobrinski, I., Kopf, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+sperm+capacitation:+assessment+of+phosphodiesterase+activity+and+intracellular+alkalinization+on+capacitation-associated+protein+tyrosine+phosphorylation.">Bovine sperm capacitation: assessment of phosphodiesterase activity and intracellular alkalinization on capacitation-associated protein tyrosine phosphorylation.</a> Mol. Reprod. Dev. 67, 487-500 (2004).</li><li>Baldi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+calcium+accumulation+and+responsiveness+to+progesterone+in+capacitating+human+spermatozoa.">Intracellular calcium accumulation and responsiveness to progesterone in capacitating human spermatozoa.</a> J. Androl. 12, 323-330 (1991).</li></ol>

إشارات بين الخلايا هو أمر حيوي لمعظم الأنشطة الخلوية؛ كا 2 + هو رسول في كل مكان التي ترافق خلايا الثدييات في جميع أنحاء كامل حياتها، من أصلهم في التسميد، إلى نهاية دورة حياتها. في استجابة للمؤثرات مختلفة، [كا 2 +] ط الزيادات، يتذبذب والنقصان مع تدوين المكاني?...

كا 2 + هو رسول الثاني العالمي لمسارات نقل الإشارة في الخلايا حقيقية النواة. داخل الخلايا كا 2 + (كا 2 + ط) يشارك في تنظيم العديد من العمليات الفسيولوجية الأساسية في الخلايا على حد سواء منفعل وغير منفعل. مشتق أهمية وعالمية كا 2 + كرسول الثانية خلال الأحداث نقل الإشارة من تنوعها المكانية والزمانية في نقل المعلومات داخل الخلية. بينما كا 2 + لا يمكن توليفها من جديد أو المتدهورة داخل الخلية، وتركيزه داخل الخلايا ([كا 2 +] ط) يتم الاحتفاظ ضمن حدود صارمة للغاية من خلال الآليات الخلوية المختلفة التي العازلة بشكل مستمر، تنحية، تجزئة، و / أو تتراكم كا 2 +. يمكن أن تحدث تغييرات في تركيز أيون في هذه المناطق المترجمة للغاية داخل الخلية 1، وفك رموز هذه التقلبات أمر ضروري لاكتساب ديفهم EPER من (1) دورهم في آلية يشير، (2) أهميتها الفسيولوجية، و (3) آليات العام للإشارة الخلية. كا 2 + إشارات بوساطة له أهمية خاصة في علم وظائف الأعضاء الحيوانات المنوية 2. الحيوانات المنوية على الحركة هي واحدة من أهم وظائف للنجاح الإخصاب، في واقع الأمر، يمكن أن العديد من العيوب الحيوانات المنوية على الحركة يسبب العقم 3-5. أهمية الكالسيوم 2 + في حركة سوطي وقد أدركت منذ فترة طويلة 6، ولكن آلية لكيفية كا 2 + يتحكم في شكل محدد من أشكال سوطي الانحناء ليست مفهومة تماما. قبل التفجير مع البويضة، يجب أن تخضع الحيوانات المنوية وتمكين الطاقات، وهي عملية معقدة تعتمد على الإقامة الحيوانات المنوية داخل المسالك الإناث. خلال تمكين الطاقات، يتم تعديل بنية الدهون غشاء الحيوانات المنوية ومنظمة، وذلك أساسا نتيجة لإزالة الكوليسترول من غشاء البلازما. بالإضافة إلى ذلك، العديد من البروتينات هي التيروزين-الفوسفورylated 7. الأهم من ذلك، خلال تمكين الطاقات هناك زيادة في درجة الحموضة داخل الخلايا (درجة الحموضة ط) و في [كا 2 +] ط، وhyperpolarizes غشاء المحتملة في بعض الأنواع 2. تمكين الطاقات يستغرق سوى مكان في جزء من السكان من الحيوانات المنوية (20-40٪)، والآليات التي تشارك في كل هذه التغيرات الخلوية لا تزال بعيدة عن الوضوح. ومن المسلم به عموما أن فقط جزء من السكان من الحيوانات المنوية باكتسابها الخضوع لتفاعل الجسيم الطرفي (AR) عندما تتعرض لفائف الفسيولوجية. ع هو أيضا كا 2 + حدث التنظيم المطلوب للإخصاب في جميع الأنواع امتلاك الجسيم الطرفي (عضية المتخصصة مع الأغشية الخارجية والداخلية). خلال هذه العملية الصمامات غشاء الجسم الطرفي الخارجي مع غشاء البلازما المنوية، والإفراج عن الانزيمات حلمهي التي تسمح للخلية الحيوان المنوي على اختراق مصفوفة غليكو-البروتينية المحيطة البيض (المنطقة الشفافة، أو ZP). أيضا يعرض AR جديدة fusogenic الحيوانات المنوية سطح الخلية التي تتفاعل معغشاء البلازما البيض للانصهار النهائي كل من الأمشاج. هناك عدة بروابط الخلوية التي تحفز AR، البروجسترون كونها واحدة من أكثر درس فيما بينها. في هذا العمل نقدم أربع تقنيات مختلفة تنطوي على استخدام كا 2 صبغة الفلورسنت حساسة + لقياس [كا 2 +] ط التغيرات في الحيوانات المنوية البشرية الناجمة عن البروجسترون (باستثناء التدفق الخلوي، الذي قمنا بقياس [كا 2 + ] أنا يسببها زيادة خلال عملية تمكين الطاقات في المختبر). في هذه الحالة بالذات كنا فلوو-3 AM (الحياة تكنولوجيز، وغراند ايلاند، نيويورك)، صبغة نفاذية الغشاء مع K د = 325 نانومتر. في المختبر فإننا رصد التغيرات مضان بوصفها وظيفة من الوقت مع ثلاثة من المنهجيات، ومع تقنية الرابع قمنا بقياس القيم مضان في نقطة واحدة معينة من الزمن. هذه المقاربات المختلفة تكمل بعضها البعض، تماما منذ أنها توفر الدقة المكانية والزمانيةolution في كل من خلية واحدة ومستويات السكان الخلية. السكان الخلية أو التجارب السائبة وتستخدم تقنيات السائبة على نطاق واسع ليس فقط لأن الصكوك التي تتطلب متوفرة بسهولة، ولكن أيضا لأنها بسيطة، راسخة، والسماح للفي المتوسط ​​من المعلومات من القياسات التي أجريت على ملايين الخلايا في تجربة واحدة. تقنية # 1. قياس التألق التقليدية هذه التقنية تراقب التغيرات في مضان بوصفها وظيفة من الزمن؛ يتم تنفيذ التجارب في cuvettes الزجاج مع حجم العينة تتراوح ما بين 200 إلى 1،000 ميكرولتر. الخلط السليم من الكواشف وأضاف يتطلب التحريك المغناطيسي، وبالتالي فإن القرار الزماني حصلنا عليها في ترتيب ثواني. نموذجية خلية تركيز مجموعة من العينات التي تم تحليلها هي 10 5 -10 8 خلية / مل. تقنية # 2. توقف تدفق قياس التألق Tأسلوبه أيضا تراقب التغيرات في مضان بوصفها وظيفة من الوقت، ولكن الكواشف بسرعة تختلط معا (باستخدام ضغط) في كفيت تسجيل يحتوي على حجم عينة صغيرة جدا (تتراوح 25-100 ميكرولتر). ولذلك، تجانس الكواشف بشكل فوري، مما يتيح قرار زمنية عالية في ترتيب ميلي ثانية. تحليل مضان مقابل الوقت مما آثار هي مناسبة لتحديد معدلات التفاعل، توضيح مدى تعقيد آلية رد الفعل، والحصول على معلومات عن رد فعل وسيطة لم يدم طويلا، وما إلى ذلك مجموعة تركيز خلية مشتركة من العينات التي تم تحليلها هي 10 5 -10 7 خلية / مل. تجارب خلية واحدة تجارب السائبة تقرير السلوك متوسط ​​لعدد كبير من الخلايا، ومع ذلك، قد يبلغ عدد سكانها تظهر في كثير من الأحيان الخصائص غير المتجانسة التي يتم التغاضي عنها خلال هذا النوع من القياسات. وبالتالي تستخدم تقنيات خلية واحدة لتكمل المعلومات البريد التي تم الحصول عليها مع التجارب السكان الخلية. تقنية # 3. التدفق الخلوي وعلى الرغم من أهمية المعلومات الناتجة عن القياسات خلية واحدة، فمن المهم لتحليل عدد كبير من الخلايا من أجل منع استقراء الخاطئة من خصائص خلية محددة لشعب بأكمله. لهذا السبب، ويفضل التقنيات الإنتاجية العالية والأسلوب الأكثر شعبية هو التدفق الخلوي، التي يتم تحليلها في تقليديا 10،000 خلية لكل حالة. تمكن هذه الطريقة تحليل متعدد حدودي من السكان غير متجانسة لأنها تصنف الخلايا وفقا لحجمها (مبعثر إلى الأمام (FSC))، تحبب (مبعثر الجانب (SSC)) وكثافة مضان (وضع العلامات المحددة مع الأجسام المضادة، علامة السلامة، الخ.) ، وبالتالي توفير المعلومات عن توزيع المعلمات &quot;لمجموعة من الخلايا. التدفق الخلوي يوفر الفوري بدلا من المعلومات التي تعتمد على الوقت 8. إلى الأمام والجانب مبعثر القيم عيجب أيضا أن يدرج ه مفيدة أيضا لاختيار البوابة التي تشمل الخلايا ولكن يميز الحطام الخلوية، والغبار، وغيرها للحصول على قياسات مضان، مضان ضوابط السلبية والإيجابية. إذا تم استخدام قناة مضان أكثر من واحد، وهي عملية تعرف باسم التعويض يجب أن يؤديها (لمزيد من التفاصيل انظر <a href="http://www.bdbiosciences.com/resources/protocols/setting_compensation.jsp" target="_blank">http://www.bdbiosciences.com/resources/protocols/setting_compensation.jsp</a> ). التعويض يسمح للتداخل الطيفية التمييز بين fluorophores. التدفق الخلوي كما يتيح التمييز من الخلايا الميتة، عموما عن طريق propidium تلطيخ يوديد. تقنية # 4. التصوير خلية واحدة المجهري هو طريقة أخرى شائعة لدراسة سلوك خلية واحدة، بل هي مناسبة تماما للدراسات التي تعتمد على الوقت وأنه يوفر أيضا القرار المكانية. والعيب الرئيسي هو أن تحليل الإنتاجية العالية ليست سوى في بداياتها في الوقت الحاضر <sتصل&gt; 9.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ham's F-10</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>N-6013</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Bovine Serum Albumin</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>A-7906</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calcium Chloride Dihydrate approx. 99%</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>C-3881</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Makler Counting Chamber</td>
 <td>SEFI Medical Insruments LTD</td>
 <td>SEF-MAKL</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluo-3 AM</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>F-1242</td>
 <td>20 vials/50 &mu;g each</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ionomycin</td>
 <td>Alomone</td>
 <td>I-700</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Progesterone</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P0130</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>S-9888</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Potassium chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P-3911</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium bicarbonate</td>
 <td>JT Baker</td>
 <td>3506</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Magnesium chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>M-2670</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calcium chloride anhydrous</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>C-1016</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>HEPES</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>H-3125</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>D-Glucose</td>
 <td>JT Baker</td>
 <td>1906-01</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium pyruvate</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P-2256</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium L-lactate (aprox. 99%)</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>L- 7022</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Propidium Iodide </td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>L-7011 </td>
 <td>Component B</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Triton X-100 (t-Octylphenoxypolyethoxyethanol)</td>
 <td>Sigma- Aldrich</td>
 <td>X-100</td>
 <td>2.4 mM solution in water </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Round coverslip </td>
 <td>VWR</td>
 <td>48380 080</td>
 <td>25 mm diameter</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Poly-L-lysine solution </td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P8920</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Manganese chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>M-3634</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Attofluor; Cell Chamber, for microscopy</td>
 <td>Life technologies</td>
 <td>A-7816</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dimethyl Sulphoxide</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>D2650</td>
 <td>5x5 ml</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

measuring intracellular ca2+ changes in human sperm using four techniques: conventional fluorometry, stopped flow fluorometry, flow cytometry and single cell imaging

الحيوانات المنوية هي خلايا التناسلية للذكور صمم خصيصا للوصول والتعرف عليها وتندمج مع البيضة. لأداء هذه المهام، الخلايا المنوية يجب أن يكون مستعدا لمواجهة بيئة متغيرة باستمرار والتغلب على العديد من الحواجز المادية. يجري في جوهر transcriptionally وtranslationally صامتة، وهذه الخلايا متحركة تعتمد بشكل كبير على آليات متنوعة مما يشير إلى توجيه نفسها والسباحة بطريقة موجهة، ويتعامل مع ظروف بيئية قاسية خلال رحلتهم للبحث عن البيض. على وجه الخصوص، كا 2 + إشارات بوساطة أمر حيوي لعدة وظائف الحيوانات المنوية: تفعيل الحركة، وتمكين الطاقات (عملية معقدة التي تعد الحيوانات المنوية للتفاعل الجسيم الطرفي) وردود الفعل الجسيم الطرفي (حدثا exocytotic التي تسمح الانصهار الحيوانات المنوية البيضة). استخدام الأصباغ الفلورية لتتبع تقلبات الخلايا من أيون هذا له أهمية ملحوظة نظرا لسهولة تطبيقها، والحساسية، وبراعة ديتection. باستخدام بروتوكول واحد واحد صبغ التحميل نستخدم أربع تقنيات مختلفة لمراقبة فلوروميتريك الحيوانات المنوية كا 2 + ديناميات. يوفر كل تقنية المعلومات المتميزة التي تمكن القرار المكانية و / أو الزماني، وتوليد البيانات سواء في خلية واحدة ومستويات السكان الخلية.

<img alt="الشكل 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50344/50344fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50344/50344fig1.jpg" /> الشكل 1. ويوضح الرسم التخطيطي للبروتوكول تجريبي لعينة الحيوانات المنوية من خلال طريقة إعداد حمام السباحة. الخطوات الرئيسية لفصل الحيوانات الم?...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell 

Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell Imaging

الكالسيوم داخل الخلايا<sup&gt; 2 +</sup&gt; ديناميات هي مهمة جدا في علم وظائف الأعضاء الحيوانات المنوية والكالسيوم<sup&gt; 2 +</sup&gt; حساسة الأصباغ الفلورية تشكل أداة مرنة لدراستها. وتستخدم التجارب السكان (قياس التألق وتوقف تدفق قياس التألق) والتجارب خلية واحدة (التدفق الخلوي والتصوير خلية واحدة) لتعقب المكانية والزمانية [كا<sup&gt; 2 +</sup&gt;] تغيرات في خلايا الحيوانات المنوية البشرية.

قياس الكالسيوم داخل الخلايا<sup&gt; 2 +</sup&gt; التغييرات في الحيوانات المنوية البشرية باستخدام تقنيات أربعة: قياس التألق التقليدية، وتوقفت قياس التألق التدفق، التدفق الخلوي والتصوير خلية واحدة

Spermatozoa  are male reproductive cells especially designed to reach, recognize and fuse  with the egg. To perform these tasks, sperm cells must be ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell Imaging

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

تقنيات التصوير كاليفورنيا 2 + في اشارة الى الحيوانات المنوية البشرية

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

تدفق تنقية الخلوي للخلايا الفأر الانتصافي

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

قياس حركية تقدم دورة الخلية مع وصفها الأيض والتدفق الخلوي

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

الأمثل أساليب النمذجة وتلوين لرصد انتشار استخدام الأصباغ انقسام الخلية خلية تتبع

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

ال<em&gt; القيطم</em&gt; سيت قص مفتوحة الفازلين جاب الجهد المشبك تقنية مع التألق

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

تقنيات لتحليل خارج الخلية الحويصلات عن طريق التدفق الخلوي

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

LED Thermo Flow &#8212; Combining Optogenetics with Flow Cytometry

LED الحرارية تدفق - الجمع بين علم البصريات الوراثي مع التدفق الخلوي

Optogenetic tools allow isolated, functional investigations of almost any signaling molecule within complex signaling pathways. A major obstacle is the ...

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

تحليل معلقات خلية معزولة من الأنسجة الصلبة من قبل الطيفي التدفق الخلوي

Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

تقييم التمويه الذاتي عن طريق قياس LC3، p62، و LAMP1 المشاركة في التعريب باستخدام قياس التدفق المتعدد الأطياف الخلوي

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

Measuring Endoreduplication by Flow Cytometry of Isolated Tuber Protoplasts

قياس اندوريدوبليكيشن بقياس التدفق الدرنات المعزولة بروتوبلاستس

Endoreduplication, the replication of a cell's nuclear genome without subsequent cytokinesis, yields cells with increased DNA content and is associated ...