Name: culturing primary rat inner medullary collecting duct cells
Uploaded: 2013-06-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل جمعية الألمانية للبحوث (DFG؛ KL 1415/3-2 وKL 1415/4-2).

1. إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد أطباق ثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذوبان الكولاجين النوع الرابع O / N عند 4 ° C وحلها في 0.1٪ حامض الخليك العقيمة. حجم لاستخدام يعتمد على نوع وعدد من الأطباق التي كانت الخلايا ليكون ا...

<ol>
	<li>Stoos, B. A., Naray-Fejes-Toth, A., Carretero, O. A., Ito, S., Fejes-Toth, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+mouse+cortical+collecting+duct+cell+line.">Characterization of a mouse cortical collecting duct cell line.</a> Kidney International. 39, 1168-1175 (1991).</li><li>Graham, F. L., Smiley, J., Russell, W. C., Nairn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+a+human+cell+line+transformed+by+DNA+from+human+adenovirus+type+5.">Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5.</a> The Journal of general virology. 36, 59-74 (1977).</li><li>Gluzman, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SV40-transformed+simian+cells+support+the+replication+of+early+SV40+mutants.">SV40-transformed simian cells support the replication of early SV40 mutants.</a> Cell. 23, 175-182 (1981).</li><li>Ala, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+studies+of+twelve+mutant+V2+vasopressin+receptors+related+to+nephrogenic+diabetes+insipidus:+molecular+basis+of+a+mild+clinical+phenotype.">Functional studies of twelve mutant V2 vasopressin receptors related to nephrogenic diabetes insipidus: molecular basis of a mild clinical phenotype.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 9, 1861-1872 (1998).</li><li>Richardson, J. C., Scalera, V., Simmons, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+strains+of+MDCK+cells+which+resemble+separate+nephron+tubule+segments.">Identification of two strains of MDCK cells which resemble separate nephron tubule segments.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 673, 26-36 (1981).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+2+Promotes+Cell+Migration+and+Epithelial+Morphogenesis.">Aquaporin 2 Promotes Cell Migration and Epithelial Morphogenesis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. , (2012).</li><li>Perantoni, A., Berman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+Wilms'+tumor+line+(TuWi)+and+pig+kidney+line+(LLC-PK1)+typical+of+normal+kidney+tubular+epithelium.">Properties of Wilms' tumor line (TuWi) and pig kidney line (LLC-PK1) typical of normal kidney tubular epithelium.</a> In vitro. 15, 446-454 (1979).</li><li>Katsura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutive+and+regulated+membrane+expression+of+aquaporin+1+and+aquaporin+2+water+channels+in+stably+transfected+LLC-PK1+epithelial+cells.">Constitutive and regulated membrane expression of aquaporin 1 and aquaporin 2 water channels in stably transfected LLC-PK1 epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92, 7212-7216 (1995).</li><li>Hull, R. N., Cherry, W. R., Weaver, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+characteristics+of+a+pig+kidney+cell+strain,+LLC-PK.">The origin and characteristics of a pig kidney cell strain, LLC-PK.</a> In vitro. 12, 670-677 (1976).</li><li>Nedvetsky, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+regulation+of+aquaporin-2+abundance+and+degradation+by+protein+kinase+A+and+p38-MAP+kinase.">Reciprocal regulation of aquaporin-2 abundance and degradation by protein kinase A and p38-MAP kinase.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 21, 1645-1656 (2010).</li><li>Iolascon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Two+Novel+Missense+Mutations+in+the+AQP2+Gene+Causing+Nephrogenic+Diabetes+Insipidus.">Characterization of Two Novel Missense Mutations in the AQP2 Gene Causing Nephrogenic Diabetes Insipidus.</a> Nephron Physiology. 105, p33-p41 (2007).</li><li>Deen, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-2+transfection+of+Madin-Darby+canine+kidney+cells+reconstitutes+vasopressin-regulated+transcellular+osmotic+water+transport.">Aquaporin-2 transfection of Madin-Darby canine kidney cells reconstitutes vasopressin-regulated transcellular osmotic water transport.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 8, 1493-1501 (1997).</li><li>Valenti, G., Frigeri, A., Ronco, P. M., D'Ettorre, C., Svelto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+functional+analysis+of+water+channels+in+a+stably+AQP2-transfected+human+collecting+duct+cell+line.">Expression and functional analysis of water channels in a stably AQP2-transfected human collecting duct cell line.</a> The Journal of Biological Chemistry. 271, 24365-24370 (1996).</li><li>Steele, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+immortalization+of+principal+cells+from+mouse+collecting+duct.">Telomerase immortalization of principal cells from mouse collecting duct.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 299, F1507-F1514 (2010).</li><li>Bens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticosteroid-dependent+sodium+transport+in+a+novel+immortalized+mouse+collecting+duct+principal+cell+line.">Corticosteroid-dependent sodium transport in a novel immortalized mouse collecting duct principal cell line.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 10, 923-934 (1999).</li><li>Hasler, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+regulation+of+aquaporin-2+expression+in+vasopressin-responsive+renal+collecting+duct+principal+cells.">Long term regulation of aquaporin-2 expression in vasopressin-responsive renal collecting duct principal cells.</a> The Journal of Biological Chemistry. 277, 10379-10386 (1074).</li><li>Miller, R. L., Sandoval, P. C., Pisitkun, T., Knepper, M. A., Hoffert, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin+inhibits+apoptosis+in+renal+collecting+duct+cells.">Vasopressin inhibits apoptosis in renal collecting duct cells.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. , (2012).</li><li>Kleinman, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+complexes+with+biological+activity.">Basement membrane complexes with biological activity.</a> Biochemistry. 25, 312-318 (1986).</li><li>Storm, R., Klussmann, E., Geelhaar, A., Rosenthal, W., Maric, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osmolality+and+solute+composition+are+strong+regulators+of+AQP2+expression+in+renal+principal+cells.">Osmolality and solute composition are strong regulators of AQP2 expression in renal principal cells.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 284, 189-198 (2003).</li><li>Maric, K., Oksche, A., Rosenthal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-2+expression+in+primary+cultured+rat+inner+medullary+collecting+duct+cells.">Aquaporin-2 expression in primary cultured rat inner medullary collecting duct cells.</a> Am. J. Physiol. 275, 796-801 (1998).</li><li>Liebenhoff, U., Rosenthal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Rab3-,+Rab5a-+and+synaptobrevin+II-like+proteins+in+a+preparation+of+rat+kidney+vesicles+containing+the+vasopressin-regulated+water+channel.">Identification of Rab3-, Rab5a- and synaptobrevin II-like proteins in a preparation of rat kidney vesicles containing the vasopressin-regulated water channel.</a> FEBS Lett. 365, 209-213 (1995).</li><li>Lorenz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP+is+sufficient+for+triggering+the+exocytic+recruitment+of+aquaporin-2+in+renal+epithelial+cells.">Cyclic AMP is sufficient for triggering the exocytic recruitment of aquaporin-2 in renal epithelial cells.</a> EMBO Rep. 4, 88-93 (2003).</li><li>Tamma, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prostaglandin+E2+analogue+sulprostone+antagonizes+vasopressin-induced+antidiuresis+through+activation+of+Rho.">The prostaglandin E2 analogue sulprostone antagonizes vasopressin-induced antidiuresis through activation of Rho.</a> J. Cell Sci. 116, 3285-3294 (2003).</li><li>Maric, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+volume+kinetics+of+adherent+epithelial+cells+measured+by+laser+scanning+reflection+microscopy:+determination+of+water+permeability+changes+of+renal+principal+cells.">Cell volume kinetics of adherent epithelial cells measured by laser scanning reflection microscopy: determination of water permeability changes of renal principal cells.</a> Biophys. J. 80, 1783-1790 (2001).</li><li>Gonzalez, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+stimulates+renin+in+inner+medullary+collecting+duct+cells+via+protein+kinase+C+and+independent+of+epithelial+sodium+channel+and+mineralocorticoid+receptor+activity.">Angiotensin II stimulates renin in inner medullary collecting duct cells via protein kinase C and independent of epithelial sodium channel and mineralocorticoid receptor activity.</a> Hypertension. 57, 594-599 (2011).</li><li>Chou, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+aquaporin-2+trafficking+by+vasopressin+in+the+renal+collecting+duct.+Roles+of+ryanodine-sensitive+Ca2++stores+and+calmodulin.">Regulation of aquaporin-2 trafficking by vasopressin in the renal collecting duct. Roles of ryanodine-sensitive Ca2+ stores and calmodulin.</a> The Journal of Biological Chemistry. 275, 36839-36846 (2000).</li><li>Uawithya, P., Pisitkun, T., Ruttenberg, B. E., Knepper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+profiling+of+native+inner+medullary+collecting+duct+cells+from+rat+kidney.">Transcriptional profiling of native inner medullary collecting duct cells from rat kidney.</a> Physiological Genomics. 32, 229-253 (2008).</li><li>Tchapyjnikov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+profiling+of+nuclei+from+native+renal+inner+medullary+collecting+duct+cells+using+LC-MS/MS.">Proteomic profiling of nuclei from native renal inner medullary collecting duct cells using LC-MS/MS.</a> Physiological Genomics. 40, 167-183 (2010).</li><li>Stefan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalization+of+cAMP-dependent+signaling+by+phosphodiesterase-4D+is+involved+in+the+regulation+of+vasopressin-mediated+water+reabsorption+in+renal+principal+cells.">Compartmentalization of cAMP-dependent signaling by phosphodiesterase-4D is involved in the regulation of vasopressin-mediated water reabsorption in renal principal cells.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 18, 199-212 (2007).</li><li>Klussmann, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibitory+role+of+Rho+in+the+vasopressin-mediated+translocation+of+aquaporin-2+into+cell+membranes+of+renal+principal+cells.">An inhibitory role of Rho in the vasopressin-mediated translocation of aquaporin-2 into cell membranes of renal principal cells.</a> J. Biol. Chem. 276, 20451-20457 (2001).</li></ol>

نقدم بروتوكول مفصلة لإعداد وزراعة الخلايا IMCD الفئران الأولية. النهج غلة تصل إلى 21 سم 2 من الخلايا من الفئران واحدة 20. التجربة يتطلب معيار معدات زراعة الخلايا ويمكن أن يقوم بها شخص واحد في غضون ما يقرب من 6 ساعة. ولذلك، فإن هذا النهج هو مناسبة كوسيلة المختبر ?...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50366">Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to: Enno Klussmann instead of: Enno Klussman

A correction to author list has been made for article Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells.

Erratum: Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

في الكلى جمع الخلايا الرئيسية لاصق، أرجينين-فاسوبريسين (AVP) تسيطر على استيعاب المياه من خلال تحفيز الإدراج من الماء قناة aquaporin-2 (AQP2) في غشاء البلازما. AVP بربط البروتين يقترن G فاسوبريسين نوع 2 مستقبلات (V2R) تحفيز محلقة أدينيليل وبالتالي تشكيل المخيم. بدء هذه السلسلة يشير يؤدي إلى تنشيط بروتين كيناز ألف (PKA). PKA phosphorylates AQP2 في سيرين 256 (S256)، والذي هو المحرك الرئيسي لإعادة توزيعها في الفترة من حويصلات داخل الخلايا في غشاء البلازما. إدراج غشاء يسهل استيعاب المياه على طول الانحدار ناضح وغرامة الإيقاعات الجسم التوازن المياه. ويرتبط التقلبات من استيعاب المياه AVP بوساطة، وذلك بسبب الانحرافات من إفراز AVP أو أسباب إشارات AVP تنشيط أو يعانون من أمراض حادة. انخفضت استيعاب المياه التي تسببها طفرات من V2R أو AQP2 يؤدي إلى مرض السكري الكاذب كلوي، في حين أن ELEVويرتبط انبعاث العوادم بلازما الدم مستوى AVP مع استيعاب المفرط للمياه في أمراض القلب والأوعية الدموية مثل قصور القلب المزمن ومتلازمة غير لائق المضاد لإدرار البول إفراز هرمون (SIADH). أهمية استيعاب المياه AVP بوساطة لا ينبع فقط من آثاره في المرض. وإزفاء AVP التي يسببها من الحويصلات AQP2 الحاملة لوالانصهار مع غشاء البلازما يمثل عملية exocytic بدقة مخيم معتمدة، وهو حاليا غير مفهومة جيدا. أمثلة أخرى لإيماس التي تعتمد على المخيم إفراز الرينين في الكلى وH + إفراز في المعدة. ولذلك، توضيح من الآليات الجزيئية التي تنظم AQP2-إزفاء في الخلايا الرئيسية الكلوي لا يساعد فقط على فهم العمليات الجزيئية مماثلة في أنواع الخلايا الأخرى ولكن أيضا قد يمهد الطريق لعلاجات جديدة لعلاج الأمراض المرتبطة اضطرابات من استيعاب المياه AVP بوساطة . Elucidating آليات السيطرة AQP2 يتطلب جمع القناة نماذج الخلية الرئيسية. لهذا عدد من مختلف الثدييات خطوط الخلايا الكلى متوفرة. ومع ذلك، هذه النماذج لديها العديد من السلبيات. في كثير من النظم خلية مستوى البروتين من AQP2 منخفضة (الجدول 1؛ M1، HEK293، COS-7، MDCK، LLC-PK1) 1-10، والبعض الآخر ectopically overexpress الإنسان (MCD4، WT10) 11،12 أو الفئران (CD8) 13 AQP2. في MCD4 وCOS-7 الخلايا لا يتم التعبير عن مستقبلات V2. على حد علمنا ليس هناك خط خلية دائمة كنموذج المتاحة، والتي هي مستمدة من النخاعية الداخلية الكلى جمع القناة، أن جزءا من الكلى حيث AQP2 التعبير هو الأكثر وفرة، ولكن من القشرية جمع القناة 1،11،13-16 . نماذج الخلية مثل هذه هي على سبيل المثال تستخدم على نطاق واسع خلد mpkCCD (مثلا 17) أو mTERT-CCD 14 خطوط الخلايا التي أنشئت مؤخرا. كلا الخطين الخلية التطور الطبيعي صريحة AQP2 ولكن منذ V2R أنها مشتقة منالقشرية القناة جمع الأرجح تحتوي على بروتيوم مختلفة مقارنة النخاعية الداخلية جمع مجاري الهواء (IMCD) الخلايا. يجب عليهم على سبيل المثال التعبير عن مختلف نا + أنظمة النقل. هنا، نقدم بروتوكول لثقافة الخلايا IMCD الابتدائية تعبر عن V2R وAQP2 التطور الطبيعي. هذا النموذج، وبالتالي، يمثل أكثر عن كثب الوضع الفسيولوجية في القناة جمع الكلوي. كما يتطلب إنشاء ثقافة فقط المعدات المختبرية القياسية مختبرات أخرى يمكن اعتماد هذا النهج بسهولة.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name </td>
			<td>Company Catalog</td>
			<td>Number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type IV Mouse</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356233</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>H6254</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type CLS-II</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td>C2-22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM + GlutMAX</td>
			<td>Invitrogen GIBCO</td>
			<td>21885108</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>N4014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultroser G</td>
			<td>Cytogen</td>
			<td>15950-017</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non essential amino acids (NEA)</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td>K0293</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Invitrogen GIBCO</td>
			<td>15710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DBcAMP</td>
			<td>BIOLOG</td>
			<td>D009</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

culturing primary rat inner medullary collecting duct cells

أرجينين-فاسوبريسين (AVP) يسهل إعادة امتصاص الماء بواسطة الكلى جمع الخلايا الرئيسية لاصق، وبالتالي غرامة الإيقاعات الجسم توازن الماء. AVP تربط لمستقبلات V2 فاسوبريسين (V2R) على سطح الخلايا وبالتالي يدفع توليف المخيم. هذا يحفز عمليات الإشارات الخلوية مما يؤدي إلى تغييرات في الفسفرة من قناة المياه aquaporin-2 (AQP2). بروتين كيناز A phoshorylates AQP2 وبالتالي يتسبب في إزفاء من AQP2 من حويصلات داخل الخلايا في غشاء البلازما تسهيل استيعاب الماء من البول الابتدائي. الانحرافات الإفراج AVP من إشارات النخامية أو AVP تنشيط في الخلايا الرئيسية يمكن أن يسبب مرض السكري الكاذب المركزي أو كلوي، على التوالي؛ يرتبط على الدم مرتفعة البلازما مستوى AVP مع أمراض القلب والأوعية الدموية مثل قصور القلب المزمن ومتلازمة غير لائق المضاد لإدرار البول إفراز الهرمون. هنا، نقدم بروتوكول للcultivatiعلى من الفئران النخاعية الداخلية الابتدائي جمع مجاري الهواء (IMCD) الخلايا والتي تعبر V2R وAQP2 التطور الطبيعي. الخلايا هي مناسبة لتوضيح الآليات الجزيئية الكامنة وراء سيطرة AQP2 وبالتالي لاكتشاف الأهداف المخدرات رواية لعلاج الأمراض المرتبطة التقلبات من استيعاب المياه AVP بوساطة. ويتم الحصول على الخلايا IMCD من الفئران للنخاع الداخلية الكلوي وتستخدم للتجارب بعد ستة إلى ثمانية أيام البذر. يمكن تربيتها خلايا IMCD في الأطباق العادية خلية ثقافة والقوارير واللوحات عيار الصغرى من الأشكال المختلفة، فإن الإجراء يتطلب بضع ساعات فقط، وغير مناسبة للمختبرات زراعة الخلايا القياسية.

فإن زراعة ناجحة لخلايا الفئران IMCD الأولية يؤدي إلى أحادي الطبقة متموجة بعد 6-8 أيام البذر (الشكل 2). لكل 60 مم طبق الثقافة هناك ما يقرب من 6 × 10 6 خلايا. الخلايا التمسك بإحكام إلى أطباق ثقافة، كما كانت مغلفة هذه مع الكولاجين النوع الرابع، وهو أحد مكونات الغشا...

Watch this Scientific Journal Video about Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells at JoVE.com

Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

أرجينين-فاسوبريسين (AVP) تسيطر على صقل الجسم توازن المياه من خلال تسهيل استيعاب المياه بواسطة الخلايا الرئيسية الكلوي. هنا، نقدم بروتوكول لزراعة النخاع الفئران الداخلية الابتدائي جمع خلايا القناة مناسبة لتوضيح الآليات الجزيئية الكامنة وراء إعادة امتصاص الماء AVP بوساطة.

زراعة النخاع الابتدائية الجرذ الداخلية جمع خلايا القناة

Arginine-vasopressin (AVP) facilitates water reabsorption by renal collecting duct principal cells and thereby fine-tunes body water homeostasis. AVP ...

Research

JoVE Journal

Biology

Collecting and Measuring Nociceptive and Inflammatory Mediators in Surgical Wounds 

جمع وقياس وسطاء Nociceptive والتهاب في الجروح الجراحية

We describe a methodology by which we are able to collect and measure inflammatory and nociceptive biochemical mediators at the surgical wound site. ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

بروتوكول للالخلايا العصبية التثقيف تعاطفية من العقد الجرذ عنق الرحم فخمة (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

الابتدائية ثقافة الكبار Myocytes قلب فأر

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

الإنسان الشعبي الأساسي الخلايا الظهارية نمت من Explants

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea

عزل الخلايا القاعدية والخلايا تحت المخاطية قناة الغدة من القصبة الهوائية ماوس

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

العزلة والثقافة الأساسي في الخلايا الكبدية الجرذ

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

عزل الخلايا المناعية من الأورام الأولية

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Culturing of Human Nasal Epithelial Cells at the Air Liquid Interface

زراعة خلايا الإنسان الظهارية الأنف في واجهة الهواء السائل

In vitro models using human primary  epithelial cells are essential in understanding key functions of the respiratory  epithelium in the context of ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

منهج في التثقيف الجنينية<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; خلايا

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

حقن الخلية الداخلية عبر كتلة من الخلايا الجذعية الجنينية يؤدي إلى ارتفاع في أسعار تشيميريسم

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...