Name: culturing primary rat inner medullary collecting duct cells
Uploaded: 2013-06-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells at JoVE.com

Detta arbete stöddes av Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, KL 1415/3-2 och KL 1415/4-2).

Ett. Framställning <ol><li> Förbereda odlingsskålarna <ol><li> Tina Kollagen Typ IV O / N vid 4 ° C och lös den i 0,1% steril ättiksyra. Volymen som ska användas beror på typ och antal rätter där cellerna ska ympas. Använd 2 | ig / cm 2. </li><li> Inkubera rätter åtminstone under 1 h vid RT och tvätta två gånger med destillerat vatten (A. tridest). </li><li> Låt disken torka ordentligt. </li></ol></li><li> Komplettering av mediet <ol><li> Öka glukos nivå upp till 4,5 g / L genom att tills...

<ol>
	<li>Stoos, B. A., Naray-Fejes-Toth, A., Carretero, O. A., Ito, S., Fejes-Toth, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+mouse+cortical+collecting+duct+cell+line.">Characterization of a mouse cortical collecting duct cell line.</a> Kidney International. 39, 1168-1175 (1991).</li><li>Graham, F. L., Smiley, J., Russell, W. C., Nairn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+a+human+cell+line+transformed+by+DNA+from+human+adenovirus+type+5.">Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5.</a> The Journal of general virology. 36, 59-74 (1977).</li><li>Gluzman, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SV40-transformed+simian+cells+support+the+replication+of+early+SV40+mutants.">SV40-transformed simian cells support the replication of early SV40 mutants.</a> Cell. 23, 175-182 (1981).</li><li>Ala, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+studies+of+twelve+mutant+V2+vasopressin+receptors+related+to+nephrogenic+diabetes+insipidus:+molecular+basis+of+a+mild+clinical+phenotype.">Functional studies of twelve mutant V2 vasopressin receptors related to nephrogenic diabetes insipidus: molecular basis of a mild clinical phenotype.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 9, 1861-1872 (1998).</li><li>Richardson, J. C., Scalera, V., Simmons, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+strains+of+MDCK+cells+which+resemble+separate+nephron+tubule+segments.">Identification of two strains of MDCK cells which resemble separate nephron tubule segments.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 673, 26-36 (1981).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+2+Promotes+Cell+Migration+and+Epithelial+Morphogenesis.">Aquaporin 2 Promotes Cell Migration and Epithelial Morphogenesis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. , (2012).</li><li>Perantoni, A., Berman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+Wilms'+tumor+line+(TuWi)+and+pig+kidney+line+(LLC-PK1)+typical+of+normal+kidney+tubular+epithelium.">Properties of Wilms' tumor line (TuWi) and pig kidney line (LLC-PK1) typical of normal kidney tubular epithelium.</a> In vitro. 15, 446-454 (1979).</li><li>Katsura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutive+and+regulated+membrane+expression+of+aquaporin+1+and+aquaporin+2+water+channels+in+stably+transfected+LLC-PK1+epithelial+cells.">Constitutive and regulated membrane expression of aquaporin 1 and aquaporin 2 water channels in stably transfected LLC-PK1 epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92, 7212-7216 (1995).</li><li>Hull, R. N., Cherry, W. R., Weaver, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+characteristics+of+a+pig+kidney+cell+strain,+LLC-PK.">The origin and characteristics of a pig kidney cell strain, LLC-PK.</a> In vitro. 12, 670-677 (1976).</li><li>Nedvetsky, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+regulation+of+aquaporin-2+abundance+and+degradation+by+protein+kinase+A+and+p38-MAP+kinase.">Reciprocal regulation of aquaporin-2 abundance and degradation by protein kinase A and p38-MAP kinase.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 21, 1645-1656 (2010).</li><li>Iolascon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Two+Novel+Missense+Mutations+in+the+AQP2+Gene+Causing+Nephrogenic+Diabetes+Insipidus.">Characterization of Two Novel Missense Mutations in the AQP2 Gene Causing Nephrogenic Diabetes Insipidus.</a> Nephron Physiology. 105, p33-p41 (2007).</li><li>Deen, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-2+transfection+of+Madin-Darby+canine+kidney+cells+reconstitutes+vasopressin-regulated+transcellular+osmotic+water+transport.">Aquaporin-2 transfection of Madin-Darby canine kidney cells reconstitutes vasopressin-regulated transcellular osmotic water transport.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 8, 1493-1501 (1997).</li><li>Valenti, G., Frigeri, A., Ronco, P. M., D'Ettorre, C., Svelto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+functional+analysis+of+water+channels+in+a+stably+AQP2-transfected+human+collecting+duct+cell+line.">Expression and functional analysis of water channels in a stably AQP2-transfected human collecting duct cell line.</a> The Journal of Biological Chemistry. 271, 24365-24370 (1996).</li><li>Steele, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+immortalization+of+principal+cells+from+mouse+collecting+duct.">Telomerase immortalization of principal cells from mouse collecting duct.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 299, F1507-F1514 (2010).</li><li>Bens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticosteroid-dependent+sodium+transport+in+a+novel+immortalized+mouse+collecting+duct+principal+cell+line.">Corticosteroid-dependent sodium transport in a novel immortalized mouse collecting duct principal cell line.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 10, 923-934 (1999).</li><li>Hasler, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+regulation+of+aquaporin-2+expression+in+vasopressin-responsive+renal+collecting+duct+principal+cells.">Long term regulation of aquaporin-2 expression in vasopressin-responsive renal collecting duct principal cells.</a> The Journal of Biological Chemistry. 277, 10379-10386 (1074).</li><li>Miller, R. L., Sandoval, P. C., Pisitkun, T., Knepper, M. A., Hoffert, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin+inhibits+apoptosis+in+renal+collecting+duct+cells.">Vasopressin inhibits apoptosis in renal collecting duct cells.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. , (2012).</li><li>Kleinman, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+complexes+with+biological+activity.">Basement membrane complexes with biological activity.</a> Biochemistry. 25, 312-318 (1986).</li><li>Storm, R., Klussmann, E., Geelhaar, A., Rosenthal, W., Maric, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osmolality+and+solute+composition+are+strong+regulators+of+AQP2+expression+in+renal+principal+cells.">Osmolality and solute composition are strong regulators of AQP2 expression in renal principal cells.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 284, 189-198 (2003).</li><li>Maric, K., Oksche, A., Rosenthal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-2+expression+in+primary+cultured+rat+inner+medullary+collecting+duct+cells.">Aquaporin-2 expression in primary cultured rat inner medullary collecting duct cells.</a> Am. J. Physiol. 275, 796-801 (1998).</li><li>Liebenhoff, U., Rosenthal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Rab3-,+Rab5a-+and+synaptobrevin+II-like+proteins+in+a+preparation+of+rat+kidney+vesicles+containing+the+vasopressin-regulated+water+channel.">Identification of Rab3-, Rab5a- and synaptobrevin II-like proteins in a preparation of rat kidney vesicles containing the vasopressin-regulated water channel.</a> FEBS Lett. 365, 209-213 (1995).</li><li>Lorenz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP+is+sufficient+for+triggering+the+exocytic+recruitment+of+aquaporin-2+in+renal+epithelial+cells.">Cyclic AMP is sufficient for triggering the exocytic recruitment of aquaporin-2 in renal epithelial cells.</a> EMBO Rep. 4, 88-93 (2003).</li><li>Tamma, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prostaglandin+E2+analogue+sulprostone+antagonizes+vasopressin-induced+antidiuresis+through+activation+of+Rho.">The prostaglandin E2 analogue sulprostone antagonizes vasopressin-induced antidiuresis through activation of Rho.</a> J. Cell Sci. 116, 3285-3294 (2003).</li><li>Maric, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+volume+kinetics+of+adherent+epithelial+cells+measured+by+laser+scanning+reflection+microscopy:+determination+of+water+permeability+changes+of+renal+principal+cells.">Cell volume kinetics of adherent epithelial cells measured by laser scanning reflection microscopy: determination of water permeability changes of renal principal cells.</a> Biophys. J. 80, 1783-1790 (2001).</li><li>Gonzalez, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+stimulates+renin+in+inner+medullary+collecting+duct+cells+via+protein+kinase+C+and+independent+of+epithelial+sodium+channel+and+mineralocorticoid+receptor+activity.">Angiotensin II stimulates renin in inner medullary collecting duct cells via protein kinase C and independent of epithelial sodium channel and mineralocorticoid receptor activity.</a> Hypertension. 57, 594-599 (2011).</li><li>Chou, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+aquaporin-2+trafficking+by+vasopressin+in+the+renal+collecting+duct.+Roles+of+ryanodine-sensitive+Ca2++stores+and+calmodulin.">Regulation of aquaporin-2 trafficking by vasopressin in the renal collecting duct. Roles of ryanodine-sensitive Ca2+ stores and calmodulin.</a> The Journal of Biological Chemistry. 275, 36839-36846 (2000).</li><li>Uawithya, P., Pisitkun, T., Ruttenberg, B. E., Knepper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+profiling+of+native+inner+medullary+collecting+duct+cells+from+rat+kidney.">Transcriptional profiling of native inner medullary collecting duct cells from rat kidney.</a> Physiological Genomics. 32, 229-253 (2008).</li><li>Tchapyjnikov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+profiling+of+nuclei+from+native+renal+inner+medullary+collecting+duct+cells+using+LC-MS/MS.">Proteomic profiling of nuclei from native renal inner medullary collecting duct cells using LC-MS/MS.</a> Physiological Genomics. 40, 167-183 (2010).</li><li>Stefan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalization+of+cAMP-dependent+signaling+by+phosphodiesterase-4D+is+involved+in+the+regulation+of+vasopressin-mediated+water+reabsorption+in+renal+principal+cells.">Compartmentalization of cAMP-dependent signaling by phosphodiesterase-4D is involved in the regulation of vasopressin-mediated water reabsorption in renal principal cells.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 18, 199-212 (2007).</li><li>Klussmann, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibitory+role+of+Rho+in+the+vasopressin-mediated+translocation+of+aquaporin-2+into+cell+membranes+of+renal+principal+cells.">An inhibitory role of Rho in the vasopressin-mediated translocation of aquaporin-2 into cell membranes of renal principal cells.</a> J. Biol. Chem. 276, 20451-20457 (2001).</li></ol>

Vi presenterar ett detaljerat protokoll för beredning och odling av primära celler från råtta IMCD. Tillvägagångssättet ger upp till 21 cm 2 av celler från en råtta 20. Experimentet kräver standardutrustning cellkultur och kan utföras av en enda person inom cirka 6 timmar. Därför är denna metod lämplig som en standard laboratoriemetod. Primära råtta IMCD celler kan seedas i kultur rätter av olika storlek, från 96 brunnar till 60 mm skålar. Men för t...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50366">Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to: Enno Klussmann instead of: Enno Klussman

A correction to author list has been made for article Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells.

Erratum: Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

I renala uppsamlingskanal huvudsakliga celler, kontrollerar arginin-vasopressin (AVP) vatten reabsorption genom att stimulera införandet av vattenkanalen aquaporin-2 (AQP2) i plasmamembranet. AVP binder till G-proteinkopplade vasopressin typ-2-receptorn (V2R) stimulera adenylylcyklas och därigenom cAMP-bildning. Inledande av denna signalering kaskad leder till aktivering av proteinkinas A (PKA). PKA fosforylerar AQP2 på serin 256 (S256), vilket är den viktigaste utlösande faktorn för dess omfördelning från intracellulära vesiklar till plasmamembranet. Membranet insättning underlättar vatten reabsorption längs en osmotisk gradient och finjusterar kropp vatten homeostas. Dysreglering av AVP-medierad vatten reabsorption, på grund av avvikelser från AVP sekretion eller AVP-aktiverade orsaker signalering eller är associerad med svåra sjukdomar. Minskad vatten reabsorption orsakas av mutationer av V2R eller AQP2 leder till nefrogen diabetes insipidus, medan en elevated blodplasma AVP är förknippad med mycket vatten reabsorption i kardiovaskulära sjukdomar såsom kronisk hjärtsvikt och syndrom av antidiuretiskt hormon (SIADH). Betydelsen av AVP-medierad vatten reabsorption härstammar inte bara från dess implikation i sjukdomen. Den AVP-inducerad flyttning av AQP2-bärande vesiklar till och fusion med plasmamembranet representerar en strikt cAMP-beroende exocytisk process, som för närvarande inte är väl förstådd. Andra exempel på ett cAMP-beroende exocytos är reninutsöndring i njuren, och H + sekretion i magen. Därför klarlägga molekylära mekanismer som styr AQP2-translokation i renal huvudsakliga cellerna inte bara hjälper till att förstå liknande molekylära processer i andra celltyper, men kan också bana väg för nya terapier för behandling av sjukdomar förknippade med störningar av AVP-medierad vatten reabsorption . Elucidating mekanismer kontrollerar AQP2 kräver uppsamlingskanal huvudsakliga cell modeller. För detta ett antal olika däggdjursceller linjer njurceller är tillgängliga. Men dessa modeller har flera nackdelar. I många cellsystem proteinnivån av AQP2 är låg (tabell 1, M1, HEK293, COS-7, MDCK, LLC-PK1) 1-10, andra ektopiskt överuttrycker humana (MCD4, WT10) 11,12 eller råtta (CD8) 13 AQP2. I MCD4 och COS-7 celler V2-receptorn inte uttrycks. Till vår kännedom finns ingen permanent cellinje som en modell finns, som härrör från den renal inre medullär samlande kanalen, den del av njuren där AQP2 uttryck är mest förekommande, men från kortikala uppsamlingskanalen 1,11,13-16 . Sådana celler modeller är till exempel flitigt förevigade mpkCCD (t.ex. 17) eller de nyligen etablerade mTERT-CCD 14 cellinjer. Båda cellinjerna endogent uttrycka AQP2 och V2R men eftersom de är härledda frånkortikala uppsamlingskanalen troligen innehåller en annan proteomet jämfört med inre medullär uppsamlingskanal (IMCD) celler. De måste till exempel uttrycker annorlunda Na + transportsystem. Här presenterar vi ett protokoll till kultur primära IMCD celler som uttrycker V2R och AQP2 endogent. Denna modell representerar därför närmast den fysiologiska situationen i den renala uppsamlingskanalen. Som upprättandet av kulturen kräver endast standardlaboratorieutrustning andra laboratorier kan lätt anta detta synsätt.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name </td>
			<td>Company Catalog</td>
			<td>Number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type IV Mouse</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356233</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>H6254</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type CLS-II</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td>C2-22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM + GlutMAX</td>
			<td>Invitrogen GIBCO</td>
			<td>21885108</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>N4014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultroser G</td>
			<td>Cytogen</td>
			<td>15950-017</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non essential amino acids (NEA)</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td>K0293</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Invitrogen GIBCO</td>
			<td>15710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DBcAMP</td>
			<td>BIOLOG</td>
			<td>D009</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

culturing primary rat inner medullary collecting duct cells

Arginin-vasopressin (AVP) underlättar vatten reabsorption av renal uppsamlingskanal huvudsakliga celler och därigenom finjusterar kropp vatten homeostas. AVP binder till vasopressin V2-receptorer (V2R) på ytan av cellerna och därigenom inducerar syntes av cAMP. Detta stimulerar cellulär signalering processer som leder till förändringar i fosforyleringen av vattenrännan aquaporin-2 (AQP2). Protein kinase A phoshorylates AQP2 och därigenom utlöser translokation av AQP2 från intracellulära vesiklar till plasmamembranet underlätta vatten reabsorption från primär urin. Aberrationer AVP frisättning från hypofysen eller AVP-aktiverad signalering i huvudsakliga celler kan orsaka centrala eller nephrogenic diabetes insipidus, respektive, en förhöjd blodplasma AVP nivå är associerad med kardiovaskulära sjukdomar såsom kronisk hjärtsvikt och syndrom av antidiuretiskt hormon. Här presenterar vi ett protokoll för cultivatipå primär råtta inre medullär uppsamlingskanal (IMCD) celler, som uttrycker V2R och AQP2 endogent. Cellerna är lämpliga för att belysa molekylära mekanismer bakom kontrollen av AQP2 och således att upptäcka nya målproteiner för behandling av sjukdomar associerade med dysreglering av AVP-medierad vatten reabsorption. IMCD cellerna erhålls från råtta renal inre medullae och används för experiment sex till åtta dagar efter ympning. IMCD celler kan odlas i vanliga rätter cellodling, kolvar och mikro-titerplattor av olika format, kräver förfarandet bara ett par timmar, och är lämplig för vanliga laboratorier cellodling.

Den framgångsrika odling av primära celler från råtta IMCD kommer att resultera i en sammanhängande monoskikt 6-8 dagar efter sådd (figur 2). Per 60 mm kultur maträtt finns cirka 6 x 10 6 celler. Cellerna hålla tätt till odlingsskålarna, eftersom dessa belades med kollagen typ IV, en basalmembranet komponent 18. Därför kommer IMCD cellerna lossnar inte ens under flera grundliga tvättprocedurer. Upp till 80% av de odlade cellerna uttrycker endogent V2R och AQP2. Dessa ?...

Watch this Scientific Journal Video about Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells at JoVE.com

Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

Arginin-vasopressin (AVP) styr finjustering av kroppens vatten homeostas genom att underlätta vatten reabsorption av renal huvudsakliga celler. Här presenterar vi ett protokoll för odling av primära råtta inre medullär uppsamlingskanal celler är lämpliga för att klarlägga molekylära mekanismer bakom AVP-medierad vatten reabsorption.

Odling Primär Rat Inre Medullary uppsamlingskanal Cells

Arginine-vasopressin (AVP) facilitates water reabsorption by renal collecting duct principal cells and thereby fine-tunes body water homeostasis. AVP ...

Research

JoVE Journal

Biology

Collecting and Measuring Nociceptive and Inflammatory Mediators in Surgical Wounds 

Att samla in och mäta nociceptiv och inflammatoriska mediatorer i kirurgiska sår

We describe a methodology by which we are able to collect and measure inflammatory and nociceptive biochemical mediators at the surgical wound site. ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

Protokoll för odling sympatiska nervceller från Rat Superior Cervikal Ganglia (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

Primär kultur Vuxen myocyter Rat hjärta

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Primär mänskliga Bronkial epitelceller vuxit från explants

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea

Isolering av basalceller och submukös körtelceller Duct från mus Luftstrupe

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Isolering och Primär kultur av celler Rat Hepatiska

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Isolering av immunceller från primära tumörer

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Culturing of Human Nasal Epithelial Cells at the Air Liquid Interface

Odling av Human Nasal epitelceller på Air Liquid Interface

In vitro models using human primary  epithelial cells are essential in understanding key functions of the respiratory  epithelium in the context of ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

En metod för odling av embryonala<em&gt; C. elegans</em&gt; Celler

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-inner Cell Mass injektion av embryonala stamceller leder till högre chimärism

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...