Name: a simple and efficient method to detect nuclear factor activation in human neutrophils by flow cytometry
Uploaded: 2013-04-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple and Efficient Method to Detect Nuclear Factor Activation in Human Neutrophils by Flow Cytometry at JoVE.com

Författarna vill tacka Nancy Mora för hennes hjälp. Detta arbete har finansierats av forskningsbidrag 48.573-M och 168.098 från Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologia, Mexiko och genom bidrag IN212308 och IN205311-2 från Dirección General de Asuntos del personal Academico, Universidad Nacional Autonoma de Mexico, Mexiko.

1. Isolering av neutrofiler (PMN) från humant blod <ol><li> Användning ca 20 ml humant blod med heparin (10 U / ml) som antikoagulant. Blod samlades från vuxna friska frivilliga med venopuncture. Alla experiment utfördes under godkännande av bioetiska kommittén vid Instituto de Investigaciones Biomédicas - UNAM. </li><li> Sätt 2 ml 6% dextran T500 i PBS i ett 15 ml koniskt centrifugrör och tillsätt 10 ml blod. Blanda genom att vända röret två eller tre gånger och låt det sitta i 45 minuter för att möj...

<ol>
	<li>Sendo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+neutrophil+apoptosis:+its+biological+significance+in+inflammation+and+the+immune+response.">Regulation of neutrophil apoptosis: its biological significance in inflammation and the immune response.</a> Human Cell. 9, 215-222 (1996).</li><li>Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils,+from+marrow+to+microbes.">Neutrophils, from marrow to microbes.</a> Immunity. 33, 657-670 (2010).</li><li>Naussef, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+human+neutrophils+kill+and+degrade+microbes.+An+integrated+view.">How human neutrophils kill and degrade microbes. An integrated view.</a> Immunol. Rev. 219, 88-102 (2007).</li><li>Scapini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neutrophil+as+a+cellular+source+of+chemokines.">The neutrophil as a cellular source of chemokines.</a> Immunol. Rev. 177, 195-203 (2000).</li><li>Hamilton, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+type-+and+stimulus-specific+mechanisms+for+post-transcriptional+control+of+neutrophil+chemokine+gene+expression.">Cell type- and stimulus-specific mechanisms for post-transcriptional control of neutrophil chemokine gene expression.</a> J. Leukoc. Biol. 91, 377-383 (2012).</li><li>Simon, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+apoptosis+pathways+and+their+modifications+in+inflammation.">Neutrophil apoptosis pathways and their modifications in inflammation.</a> Immunol. Rev. 193, 101-110 (2003).</li><li>Akgul, C., Moulding, D. A., Edwards, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+control+of+neutrophil+apoptosis.">Molecular control of neutrophil apoptosis.</a> FEBS Lett. 487, 318-322 (2001).</li><li>Witko-Sarsat, V., Pederzoli-Ribeil, M., Hirsch, E., Sozzani, S., Cassatella, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulating+neutrophil+apoptosis:+new+players+enter+the+game.">Regulating neutrophil apoptosis: new players enter the game.</a> Trends Immunol. 32, 117-124 (2011).</li><li>Green, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Death+and+NF-&#954;B+in+T+cell+activation:+life+at+the+edge.">Death and NF-&#954;B in T cell activation: life at the edge.</a> Mol. Cell. 11, 551-552 (2003).</li><li>Papa, S., Zazzeroni, F., Pham, C. G., Bubici, C., Franzoso, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+JNK+signaling+to+NF-&#954;B:+a+key+to+survival.">Linking JNK signaling to NF-&#954;B: a key to survival.</a> J. Cell Sci. 117, 5197-5208 (2004).</li><li>Valente, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+increases+camptothecin-induced+apoptosis+by+inhibition+of+NF-&#954;B.">TNF increases camptothecin-induced apoptosis by inhibition of NF-&#954;B.</a> Eur. J. Cancer. 39, 1468-1477 (2003).</li><li>Choi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+NF-&#954;B+by+a+TAT-NEMO-binding+domain+peptide+accelerates+constitutive+apoptosis+and+abrogates+LPS-delayed+neutrophil+apoptosis.">Inhibition of NF-&#954;B by a TAT-NEMO-binding domain peptide accelerates constitutive apoptosis and abrogates LPS-delayed neutrophil apoptosis.</a> Blood. 102, 2259-2267 (2003).</li><li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+neutrophil+apoptosis+by+type+1+IFN+depends+on+cross-talk+between+phosphoinositol+3-kinase,+protein+kinase+C-d,+and+NF-&#954;B+signaling+pathways.">Inhibition of neutrophil apoptosis by type 1 IFN depends on cross-talk between phosphoinositol 3-kinase, protein kinase C-d, and NF-&#954;B signaling pathways.</a> J. Immunol. 171, 1035-1041 (2003).</li><li>Schnoor, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+non-viral+transfection+of+THP-1+cells.">Efficient non-viral transfection of THP-1 cells.</a> J. Immunol. Meth. 344, 109-115 (2009).</li><li>Garcia-Garcia, E., Rosales, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+factor+activation+by+Fc&#947;R+in+human+peripheral+blood+neutrophils+detected+by+a+novel+flow+cytometry-based+method.">Nuclear factor activation by Fc&#947;R in human peripheral blood neutrophils detected by a novel flow cytometry-based method.</a> J. Immunol. Meth. 320, 104-118 (2007).</li><li>Garcia-Garcia, E., Nieto-Castaneda, G., Ruiz-Saldana, M., Mora, N., Rosales, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc&#947;RIIA+and+Fc&#947;RIIIB+mediate+nuclear+factor+activation+through+separate+signaling+pathways+in+human+neuthophils.">Fc&#947;RIIA and Fc&#947;RIIIB mediate nuclear factor activation through separate signaling pathways in human neuthophils.</a> J. Immunol. 182, 4547-4556 (2009).</li></ol>

Reningen här beskrivna metoden medger isolering av ostimulerade neutrofiler (PMN) med renhet större än 95% (bedömas genom mikroskopisk observation), på kort tid. Ibland neutrofiler kan förorenas av erytrocyter om dessa inte lyseras helt. Detta brukar vanligtvis inte påverkar tekniken, eftersom erytrocyter och PMN kan enkelt särskiljas som distinkta cellpopulationer genom flödescytometri. Isolerade PMN kan sedan stimuleras genom tvärbindning speciella receptorer med specifika monoklonala antikroppar. I själva ...

Neutrofiler är de mest rikligt förekommande leukocyter i perifert blod 1. Under inflammation och infektion neutrofiler är de första cellerna ska visas på den drabbade platsen där de fungerar som första försvarslinjen 2. Neutrofiler har flera antimikrobiella mekanismer 3 inklusive fagocytos, produktion av reaktiva syreradikaler, frisättning av lytiska enzymer genom degranulering, och produktion av proinflammatoriska cytokiner 4,5. Neutrofiler är kortlivade celler som snabbt blir aktiverade genom signalering från olika cellytereceptorer. Även neutrofiler har ansetts terminal celler på grund av deras korta liv och eftersom de genomgår apoptos inte aktiveras under den inflammatoriska processen 6, är det nu klart att de också kan ändra sin fenotyp genom att ändra nivån för transkription av specifika gener. Produktionen av cytokiner 5 och hämningen av apoptos 7,8 är två iVIKTIG aktivering-beroende cellfunktioner regleras vid nivån för transkription i neutrofiler. Nukleär faktor kB (NF-kB) deltar i den transkriptionella kontrollen av cytokinproduktion 4 och i regleringen av cellöverlevnad och apoptos 9-11 i olika celltyper. De signalvägar som leder till nukleär faktor aktivering vanligtvis studeras genom analyser reportergen eller genom elektroforetiska mobilitetsförskjutningsanalyser analyser (EMSA). Men eftersom neutrofiler är kortlivade celler, kan studier av transkriptionellt reglerade svar i dessa celler inte utföras med analyser reportergen, eftersom det inte finns några effektiva metoder för neutrofil transfektion. EMSA-analyser har använts i neutrofiler för att utforska nukleär faktor aktivering 12,13, men är denna metod komplicerad och dyr eftersom den förutsätter användning av radioaktivt material. Nucleofection är en annan teknik som har använts successfully att transfektera monocyter 14. Sålunda, åtminstone i teorin, kan nukleär faktor aktivering detekteras i neutrofiler efter transfektion (trots låg verkningsgrad). Emellertid skulle denna teknik vara dyrare, tidskrävande och förmodligen mindre kvantitativ. Mikroskopisk analys av immunofärgade celler skulle också kunna användas för att detektera nukleära faktorer i kärnan. I själva verket har vi upptäckt NF-KB translokation in i kärnan på detta sätt 15. Tyvärr är denna teknik också tidskrävande, mindre kvantitativ och med förbehåll för observatörens partiskhet. Här presenterar vi en enkel och effektiv metod som möjliggör detektion och kvantifiering av nukleära faktorer i isolerade och immunolabeled kärnor med flödescytometri. Vi beskriver tekniker för att isolera neutrofiler från humant perifert blod, stimulera dessa celler via integriner eller Fc-receptorer med anti-receptor-antikroppar, isolera och immunolabel kärnor, och analysera kärnor med flödescytometri (Figure 1). Metoden har framgångsrikt använts för att detektera NF-kB 15 och älg-1 16 nukleära faktorer i neutrofil kärnor. Känsligheten hos denna metod medger detektering av små förändringar i nukleär faktor nivåer i kärnan. Denna metod kan också användas för att analysera nivån av transkriptionsfaktorer i kärnor från andra celltyper.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>REAGENTS</td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Heparin </td>
 <td >PiSA (Mexico)</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Dextran T500</td>
 <td >Pharmacosmos A/S (Holbaek, Denmark) </td>
 <td>T1-Dextran T500</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Ficoll-Paque</td>
 <td >Pharmacia</td>
 <td>17-0320-01 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Sodium chloride </td>
 <td >Sigma</td>
 <td>S7653 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Sodium phosphate monobasic</td>
 <td >Sigma</td>
 <td>S9638</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Sodium phosphate dibasic</td>
 <td >Sigma</td>
 <td>S9390</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Bovine serum albumin (BSA)</td>
 <td >Sigma</td>
 <td>A2153</td>
 <td>Cohn Fraction V</td>
 </tr>
 <tr>
 <td >HEPES</td>
 <td >Sigma</td>
 <td>H3375 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Potassium chloride</td>
 <td >Sigma</td>
 <td>P9541 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Magnesium chloride anhydrous </td>
 <td >Sigma</td>
 <td>M8266 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >DL-dithiothreitol (DTT) </td>
 <td >Sigma</td>
 <td>D9163</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Trypan Blue (0.4 % solution)</td>
 <td >Sigma</td>
 <td>T8154</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Paraformaldehyde</td>
 <td >Sigma</td>
 <td>P6148 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Triton X-100 </td>
 <td >Sigma</td>
 <td>X100</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Fetal bovine serum (FBS)</td>
 <td >GIBCO</td>
 <td>10437-028</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Monoclonal antibody IV.3</td>
 <td >Medarex (Annandale, NJ) </td>
 <td>025-1 </td>
 <td>Human-specific anti-FcRII (CD32) </td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Monoclonal antibody 3G8</td>
 <td >Medarex (Annandale, NJ) </td>
 <td>028-2 </td>
 <td>Human-specific anti-FcRIII (CD16) </td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Monoclonal antibody TS2/16</td>
 <td >Dana Farber Cancer Research Institute (Boston, MA) </td>
 <td>Donated by Dr. Martin Hemler </td>
 <td>Human-specific anti-&beta;1 integrin (CD29)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Monoclonal antibody IB4</td>
 <td >University of California, San Francisco </td>
 <td>Donated by Dr. Eric J. Brown </td>
 <td>Human-specific anti-&beta;2 integrin (CD18)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td >F(ab')2 goat anti-mouse IgG </td>
 <td >Cappel (Aurora, OH)</td>
 <td>55468</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>FITC-conjugated F(ab')2 goat anti-mouse IgG</td>
 <td >Cappel (Aurora, OH)</td>
 <td>55522</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>FITC-conjugated F(ab')2 goat anti-rabbit IgG</td>
 <td >Cappel (Aurora, OH)</td>
 <td>55665</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Anti-NF-&kappa;B p50</td>
 <td >Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA)</td>
 <td>sc-114</td>
 <td>Rabbit polyclonal antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Anti-NF-&kappa;B p65</td>
 <td >Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA)</td>
 <td>sc-109</td>
 <td>Rabbit polyclonal antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>EQUIPMENT</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>15-ml centrifuge tube</td>
 <td >Corning</td>
 <td>430791</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>50-ml centrifuge tube</td>
 <td >Corning</td>
 <td>430291</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Centrifuge, Sorvall Tabletop</td>
 <td >Dupont Instruments</td>
 <td>RT 6000D</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>pH-meter</td>
 <td >Corning</td>
 <td>340</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pipetman pipette P-20</td>
 <td >Gilson </td>
 <td>F123600</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pipetman pipette P-200</td>
 <td >Gilson </td>
 <td>F123601</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pipetman pipette P-1000</td>
 <td >Gilson </td>
 <td>F123602</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hemocytometer</td>
 <td >Fisher Scientific</td>
 <td>0267110</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td >Nikon </td>
 <td>Eclipse E600</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Inverted microscope</td>
 <td >Nikon </td>
 <td>TMS</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Water Bath Incubator</td>
 <td >Fisher Scientific </td>
 <td>2IS-M</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microcentrifuge</td>
 <td >Eppendorf</td>
 <td>5414C</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microcentrifuge</td>
 <td >Eppendorf</td>
 <td>5418</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Flow Cytometer</td>
 <td >Becton Dickinson (Franklin Lakes, NJ) </td>
 <td>FACScalibur </td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

a simple and efficient method to detect nuclear factor activation in human neutrophils by flow cytometry

Neutrofiler är de mest rikligt förekommande leukocyter i perifert blod. Dessa celler är de första att synas på ställen för inflammation och infektion, och blev därmed den första försvarslinjen mot invaderande mikroorganismer. Neutrofiler har viktiga antimikrobiella funktioner som fagocytos, utsläpp av lytiska enzymer och produktion av reaktiva syreradikaler. Utöver dessa viktiga försvar funktioner, neutrofiler utföra andra uppgifter i svar på infektion såsom produktion av proinflammatoriska cytokiner och hämning av apoptos. Cytokiner rekrytera andra leukocyter som hjälper rensa infektion och hämning av apoptos låter neutrofila att leva längre på platsen för infektionen. Dessa funktioner regleras vid nivån för transkription. Men eftersom neutrofiler är kortlivade celler, kan studier av transkriptionellt reglerade svar i dessa celler inte utföras med konventionella metoder reportergen eftersom det inte finns några effektivträckliga tekniker för neutrofil transfektion. Här presenterar vi en enkel och effektiv metod som möjliggör detektion och kvantifiering av nukleära faktorer i isolerade och immunolabeled kärnor med flödescytometri. Vi beskriver tekniker för att isolera rena neutrofiler från humant perifert blod, stimulera dessa celler med anti-receptor-antikroppar, isolera och immunolabel kärnor, och analysera kärnor genom flödescytometri. Metoden har framgångsrikt använts för att detektera NF-kB och Elk-1 nukleära faktorer i kärnor från neutrofiler och andra celltyper. Således representerar detta förfarande ett alternativ för att analysera aktivering av transkriptionsfaktorer i isolerade kärnor från en mängd celltyper.

Reningsmetoden som beskrivs här ger vanligtvis ostimulerade neutrofiler (PMN) med renhet större än 95% (Figur 1A). Isolerade PMN kan sedan stimuleras genom tvärbindning speciella receptorer med specifika monoklonala antikroppar. Vi har stimulerat PMN genom Fc-receptorer och integriner (Figur 1B). När stimuleras, är PMN lyseras och kärnor isoleras med hög avkastning. Kärnorna därefter immunolabeled för en viss nukleär faktor, såsom den nukleära faktorn kB (NF-kB), med speci...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple and Efficient Method to Detect Nuclear Factor Activation in Human Neutrophils by Flow Cytometry at JoVE.com 

A Simple and Efficient Method to Detect Nuclear Factor Activation in Human Neutrophils by Flow Cytometry (Video) | JoVE 

Neutrofiler är de mest rikligt förekommande leukocyter i blod. Neutrofiler har transkriptionellt reglerade funktioner såsom produktion av proinflammatoriska cytokiner och hämning av apoptos. Dessa funktioner kan studeras med den metod som presenteras här, vilket möjliggör detektion och kvantifiering av nukleära faktorer genom flödescytometri i isolerade kärnor

En enkel och effektiv metod för att upptäcka Nuclear Factor Aktivering av humana neutrofiler genom flödescytometri

Neutrophils  are the most abundant leukocytes in peripheral blood. These cells are the first  to appear at sites of inflammation and infection, thus ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Simple and Efficient Method to Detect Nuclear Factor Activation in Human Neutrophils by Flow Cytometry

A Simple and Efficient Method to Isolate Macrophages from Mixed Primary Cultures of Adult Liver Cells

A Simple and Efficient Method to Isolate Macrophages from Mixed Primary Cultures of Adult Liver Cells (Video) | JoVE 

En enkel och effektiv metod att isolera Makrofager från Blandad Primär Cultures of Adult leverceller

Kupffer cells are liver-specific resident macrophages and play an important role in the physiological and pathological functions of the liver1-3. Although ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance (Video) | JoVE 

Mänskliga In Vitro Suppression som screeningmetod för erkännande av en tidig staten Immune obalans

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry (Video) | JoVE 

Undersökning av thymus Positiv och negativ selektion genom flödescytometri

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Studying Interactions of Staphylococcus aureus with Neutrophils by Flow Cytometry and Time Lapse Microscopy

Studying Interactions of Staphylococcus aureus with Neutrophils by Flow Cytometry and Time Lapse Microscopy (Video) | JoVE 

Studera Interaktioner av<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; Med Neutrofiler genom flödescytometri-och Time Lapse Mikroskopi

We present methods to study the effect of phenol soluble modulins (PSMs)  and other toxins produced and secreted by Staphylococcus  aureus on neutrophils. ...

Image-based Flow Cytometry Technique to Evaluate Changes in Granulocyte Function In Vitro

Image-based Flow Cytometry Technique to Evaluate Changes in Granulocyte Function In Vitro Video (Video) | JoVE

Bild-baserade flödescytometri Technique att utvärdera förändringar i Granulocyt Funktion<em&gt; In Vitro</em

Granulocytes play a key role in the body&#8217;s innate immune response to bacterial and viral infections. While methods exist to measure granulocyte ...

A Simple and Rapid Protocol to Non-enzymatically Dissociate Fresh Human Tissues for the Analysis of Infiltrating Lymphocytes

A Simple and Rapid Protocol to Non-enzymatically Dissociate Fresh Human Tissues for the Analysis of Infiltrating Lymphocytes Video (Video) | JoVE

En enkel och snabb protokoll till icke enzymatiskt dissociera Färska mänskliga vävnader för analys av lymfocyter

The ability of malignant cells to evade the immune system, characterized by tumor escape from both innate and adaptive immune responses, is now accepted ...

A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors

A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors Video (Video) | JoVE

En enkel och effektiv strategi för att konstruera Mutant vacciniavirus vektorer

The CRISPR-associated endonuclease Cas9 can edit particular genomic loci directed by a single guide RNA (gRNA). The CRISPR/Cas9 system has been ...

Live Imaging of Antifungal Activity by Human Primary Neutrophils and Monocytes in Response to A. fumigatus

Live Imaging of Antifungal Activity by Human Primary Neutrophils and Monocytes in Response to A. fumigatus Video (Video) | JoVE

Live avbildning antimykotiskt av humana primära neutrofiler och monocyter som svar på<em&gt; A. fumigatus</em

Aspergillus fumigatus is an opportunistic fungal pathogen causing invasive infections in immunocompromised hosts with a high case-fatality rate. Research ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages Video (Video) | JoVE

Isolering och In Vitro kultur av murina och mänskliga alveolära makrofager

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Characterization of Human Monocyte Subsets by Whole Blood Flow Cytometry Analysis

Characterization of Human Monocyte Subsets by Whole Blood Flow Cytometry Analysis Video (Video) | JoVE

Karakterisering av mänskliga monocyt delmängder av helblod Flow flödescytometri analys

Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can ...