Name: intravital microscopy of the microcirculation in the mouse cremaster muscle for the analysis of peripheral stem cell migration
Uploaded: 2013-11-05T18:00:00
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細胞単離後、プロトコル全体で約2時間かかります。 1。顕微準備<ol><li>標準化されたプロトコル9,12に係るドナー骨髄および単離された亜集団の蛍光標識からの幹細胞の単離を行う細胞は、動物の動作が行われる時間の間休止することを許可する。蛍光標識のために我々はCFDA（カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル）をお勧めします...

<ol>
	<li>Madlambayan, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=marrow+stem+and+progenitor+cell+contribution+to+neovasculogenesis+is+dependent+on+model+system+with+SDF-1+as+a+permissive+trigger.">marrow stem and progenitor cell contribution to neovasculogenesis is dependent on model system with SDF-1 as a permissive trigger.</a> Blood. 114, 4310-4319 (2009).</li><li>Lapidot, T., Dar, A., Kollet, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+do+stem+cells+find+their+way+home?.">How do stem cells find their way home?.</a> Blood. 106, 1901-1910 (2005).</li><li>Lehr, H. A., Vollmar, B., Vajkoczy, P., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+fluorescence+microscopy+for+the+study+of+leukocyte+interaction+with+platelets+and+endothelial+cells.">Intravital fluorescence microscopy for the study of leukocyte interaction with platelets and endothelial cells.</a> Methods Enzymol. 300, 462-481 (1999).</li><li>Gavins, F. N., Chatterjee, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+for+the+study+of+mouse+microcirculation+in+anti-inflammatory+drug+research:+focus+on+the+mesentery+and+cremaster+preparations.">Intravital microscopy for the study of mouse microcirculation in anti-inflammatory drug research: focus on the mesentery and cremaster preparations.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 49, 1-14 (2004).</li><li>Leister, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+peritoneal+cavity+chamber+for+intravital+microscopy+of+the+liver+under+conditions+of+pneumoperitoneum.">A peritoneal cavity chamber for intravital microscopy of the liver under conditions of pneumoperitoneum.</a> Surg. Endosc. 17, 939-942 (2003).</li><li>Sriramarao, P., Anderson, W., Wolitzky, B. A., Broide, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+bone+marrow-derived+mast+cells+roll+on+P-selectin+under+conditions+of+flow+in+vivo.">Mouse bone marrow-derived mast cells roll on P-selectin under conditions of flow in vivo.</a> Lab Invest. 74, 634-643 (1996).</li><li>Baez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+open+cremaster+muscle+preparation+for+the+study+of+blood+vessels+by+in+vivo+microscopy.">An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy.</a> Microvasc. Res. 5, 384-394 (1973).</li><li>Bagher, P., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+cremaster+muscle+preparation+for+intravital+imaging+of+the+microcirculation.">The mouse cremaster muscle preparation for intravital imaging of the microcirculation.</a> J. Vis. Exp. , e2874 (2011).</li><li>Kaminski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+NOS+is+required+for+SDF-1alpha/CXCR4-mediated+peripheral+endothelial+adhesion+of+c-kit++bone+marrow+stem+cells.">Endothelial NOS is required for SDF-1alpha/CXCR4-mediated peripheral endothelial adhesion of c-kit+ bone marrow stem cells.</a> Lab Invest. 88, 58-69 (2008).</li><li>Furlani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HMGB-1+induces+c-kit++cell+microvascular+rolling+and+adhesion+via+both+toll-like+receptor-2+and+toll-like+receptor-4+of+endothelial+cells.">HMGB-1 induces c-kit+ cell microvascular rolling and adhesion via both toll-like receptor-2 and toll-like receptor-4 of endothelial cells.</a> J. Cell Mol. Med. 16, 1094-1105 (2012).</li><li>Furlani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+intravascular+administration+of+mesenchymal+stem+cells+safe?+Mesenchymal+stem+cells+and+intravital+microscopy.">Is the intravascular administration of mesenchymal stem cells safe? Mesenchymal stem cells and intravital microscopy.</a> Microvasc. Res. 77, 370-376 (2009).</li><li>Donndorf, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysing+migratory+properties+of+human+CD+133(+)+stem+cells+in+vivo+after+intraoperative+sternal+bone+marrow+isolation.">Analysing migratory properties of human CD 133(+) stem cells in vivo after intraoperative sternal bone marrow isolation.</a> Cell Transplant. , (2012).</li></ol>

<html>生体内蛍光顕微鏡検査は、直接視覚化および幹細胞、内皮相互作用の定量的な分析を可能にする。顕微露光および生体内視覚化技法はよく白血球 - 内皮相互作用および種々の化学成分の研究の間に選択的に単純な表面灌流技術によって標的組織に適用することができる確立されたので、精巣挙筋モデルは、特に有用である。による動きアーチファクトおよび重度画像ノイズが存在しない?...

本資料の目的は、末梢骨髄幹細胞の移動の直接観察および分析のためのマウス精巣挙筋の微小循環に塗布生体顕微鏡（IVM）の技術を記述することである。 幹細胞に基づく組織および臓器再生の現在の概念は、損傷組織1に骨髄由来幹細胞のホーミングを含む。成功した幹細胞の移動のための重要なステップは、経内皮移動、最終的には、臓器移植の2に続いて負傷した臓器内のローカル内皮と細胞の相互作用幹が含まれています。これらの幹細胞の生体内分析-内皮細胞相互作用は、 インビボで異なる病態生理学的な設定での幹細胞に基づく再生応答の定量のために理想的なパラメータを形成する。さらに、それは、考えられる思われる、将来的には、特定の幹細胞pの遊走能の生体内分析標準化された微小環境内opulationsは、さらなる臨床試験をこれらの集団を進める前に適用される可能性があります。 生体顕微鏡は、最初は炎症研究3分野におけるin vivoでの白血球-内皮細胞相互作用を観察し、定量化のために開発されました。生体顕微鏡研究の最初の成功の記録は、光学顕微鏡4の下にカエル」舌や腸間膜を勉強し、19世紀にはすでにコーンハイムから報告された。その最初の使用IVMは、驚異的な技術開発、今日を受けているので、ある種の必須成分は、定量IVMを行うために前提条件を形成は、（i）組織の光アクセスを可能にする製剤、（ii）は、顕微鏡によって検出できる分子プローブ、（三）検出システム、画像データから関心対象のパラメータを抽出することができる（iv）のコンピュータベースの分析システムに接続された顕微鏡4を設定します。 組織標本の様々な腸間膜およびマウスおよびラット5、マウス6、ハムスター、ウサギの耳といくつか例を挙げると、ハムスターの頬袋の背側皮下脂肪チャンバーの肝臓を含むIVM研究のために導入されている。 準備と可視化が十分に標準化された外科的手技によって可能であり、一般的には運動の成果物に問題が発生しないようにただし、次の年には、生体内の観察のための理想的な組織を代表する、マウスの精巣挙筋に焦点を当てます。オープン精巣挙筋標本はバエズや同僚7によって1970年に初めて実施された。当初のラットについて記載し、それはマウス8にも正常に採用されている。これまでの研究は、主に血管壁と白血球の相互作用に焦点を当てた後、私たち自身のグループは最近、評価引当として、マウス精巣挙筋標本を導入直接可視化し、定義微小環境9内の幹細胞内皮相互作用の定量分析のためのBLEツール。様々な幹細胞亜集団は、マウスのc-kit +骨髄幹細胞および間葉系幹細胞、ならびにヒトCD 133 +骨髄幹細胞を10〜12を含む、このモデルを用いて研究されている。ドナー骨髄および可視化のための蛍光標識からの細胞単離後に、幹細胞は、選択的に遠隔の臓器内の任意の細胞の捕捉を回避し、大腿動脈を介して動脈注入を利用して精巣挙筋の微小循環に適用される。潜在的に、それぞれの設定値内の局所幹細胞の遊走を媒介する種々のケモカインは、単純な局所灌流法により標的組織に適用することができるので、精巣挙筋モデルが特に有用である。

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carboxy-fluorescein diacetate succinimidylester (CFDA)</td>
			<td>Invitrogen, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>C1157</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodamine 6 G (1%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Munich, Germany</td>
			<td>83697</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin (Ketanest)</td>
			<td>Pfizer, Berlin, Germany</td>
			<td>not available</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylacin (Rompun)</td>
			<td>Bayer, Leverkusen, Germany</td>
			<td>not available</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate - buffered saline (PBS)</td>
			<td>PAN Biotech, Aidenbach, Germany</td>
			<td>P04-36500</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravital microscopy of the microcirculation in the mouse cremaster muscle for the analysis of peripheral stem cell migration

再生細胞治療の文脈における血管細胞のアプリケーションプロトコルの時代において、nonmarrow組織への幹細胞の遊走の基礎となるメカニズムは完全に解明されていない。ここでは、インビボで周辺の骨髄幹細胞の遊走の分析のためのマウスの精巣挙筋の微小循環に適用される生体顕微鏡の技術を記載している。 M.の精巣挙の生体顕微鏡は、以前の血管内皮と白血球の相互作用を直接観察するための炎症研究の分野で導入されている。十分な末梢幹細胞および前駆細胞の移動は、それを裏打ちする内皮に接着沿ってしっかりと圧延同様の初期ステップを含んでいるので内皮とintravasculary投与幹細胞の相互作用の観察および定量化のためM.精巣挙モデルを適用することが考えられる。様々な化学成分を選択的に標的tに適用することができるように初期の幹細胞の動員、骨髄外、生体内の場所を取るための単純な灌流技術による問題は、それが、本質的な微小環境の前提条件を確立することが可能である。

一般的には、精巣挙筋の微小循環内の血管内皮と直接注入幹細胞または前駆細胞の相互作用はまれな事象であると毛細血管細静脈（直径30〜80ミクロン）で独占的に発生します。による蛍光標識圧延しっかりと付着幹細胞に明らかに観察細静脈（ 図2）における内因性白血球の循環から分離して定量化することができる。 血流速度と壁剪断速度で表される微小...

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Intravital Microscopy of the Microcirculation in the Mouse Cremaster Muscle for the Analysis of Peripheral Stem Cell Migration

マウスのM.精巣挙微小循環の生体顕微鏡は、ユニークと周辺の骨髄幹細胞の移動を解析するための生体モデルでよく標準化されています。

末梢血幹細胞移動の解析のためのマウス精巣挙筋で微小循環の生体顕微鏡

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