Name: determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages
Uploaded: 2013-05-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

نشكر بولا كوبوس والدكتور إفروس فاسيليو للمساعدة مختبر وتوفير الضامة الماوس، على التوالي. ونشكر أيضا لدينا مختبر مدير ريتشارد Criasia للتوجيه والمساعدة في المواد. وأخيرا، فإن الكتاب أشكر Ramanpreet كاور للمساعدة في إنتاج الفيديو.

1. زراعة الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الضامة العضلة المصحف (الفئران BALB / ج) وفيما يتعلق بتحديد بكتيريا الكوليرا. الثقافة في البداية كل من م. خلايا العضلة بعد تعليمات البائع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نشر BALB / ج خلايا ا...

<ol>
	<li>Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+Acid:+Its+effects+on+stratum+corneum+in+relation+to+(trans)+dermal+drug+delivery.">Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery.</a> Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).</li><li>Tandon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+diffraction+and+spectroscopic+studies+of+oleic+acid-sodium+acetate.">X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate.</a> Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).</li><li>Kris-Etherton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+debate+about+n-6+polyunsaturated+fatty+acid+recommendations+for+cardiovascular+health.">The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health.</a> Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).</li><li>Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenoleukodystrophy:+dietary+oleic+acid+lowers+hexacosanoate+levels.">Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels.</a> Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).</li><li>Bozan, B., Temelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+oxidative+stability+of+flax,+safflower+and+poppy+seed+and+seed+oil.">Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil.</a> Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).</li><li>Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+benefits+of+conjugated+linoleic+acid+to+3-dimensional+wrinkle+morphology.">Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology.</a> J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).</li><li>Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjugated+linoleic+acid+decreases+production+of+pro-inflammatory+products+in+macrophages:+Evidence+for+a+PPARy+dependent+mechanism.">Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).</li><li>Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-proliferative+effects+of+biologically+active+isomers+of+conjugated+linoleic+acid+on+human+colorectal+and+prostatic+cancer+cells.">The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells.</a> Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).</li><li>Granda, M., Sinclair, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acids+and+obesity.">Fatty acids and obesity.</a> Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).</li><li>Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pilot+study+of+dietary+fatty+acid+supplementation+in+the+treatment+of+adult+periodontitis.">Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis.</a> Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).</li><li>Ferretti, A., Flanagan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithromboxane+activity+of+dietary+alpha-linolenic+acid:+a+pilot+study.">Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study.</a> Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).</li><li>Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Fatty+Acids+and+Cholesterol+Present+in+Bile+on+Expression+of+Virulence+Factors+and+Motility+of+Vibrio+cholera.">Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera.</a> Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).</li><li>Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+virulence+potential+of+Vibrio+cholerae+by+natural+compounds.">Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds.</a> Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).</li><li>Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+Genetics+of+Vibrio+cholerae+from+Nepal+in+2010:+Evidence+on+the+origin+of+the+Haitian+outbreak.">Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak.</a> mBio. 2 (4), 1-6 (2011).</li><li>Schaeffler, A., Gross, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid-induced+induction+of+Toll-like+receptor-4/nuclear+factor-kappa+B+pathway+in+adipocytes+links+nutritional+signaling+with+innate+immunity.">Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity.</a> Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).</li></ol>

اقتراح من تركيز الأحماض الدهنية والسمية الكوليرا في حين أن الآلية الدقيقة لكيفية الأحماض الدهنية تعزيز مناعة المخاطية غير معروف، وقد حاول العديد من الدراسات للتحقيق آثارها المفيدة. وتهدف دراستنا إلى تقديم منهجية لتحديد الحد الأ?...

وكانت الفوائد الصحية للأحماض الدهنية، مثل الأوليك، اللينوليك والأحماض اللينولينيك والاستمرار في أن تكون موثقة. على سبيل المثال، يساعد حمض الأوليك تسهيل تغلغل المخدرات محبة للدهون في الجسم 1،2، ويقلل من الإصابة بأمراض القلب التاجية بنسبة 24٪ عند استبداله للأحماض الدهنية المشبعة 3، ويستخدم لعلاج الأمراض الأيضية مثل Adrenoleukodystrophy (4) الذي هو العاشر مرتبطة اضطراب وراثي في ​​استقلاب الأحماض الدهنية. . بينما هو مقدمة ضرورية لحمض الأراكيدونيك في الثدييات، وحمض اللينوليك (على عكس حمض الأوليك) لا توليفها من قبل الهيئة، ويجب الحصول عليها من خلال مصادر خارجية مثل كتبها استهلاك بذور الكتان عرض 5 الدراسات العديد من الآثار الصحية المفيدة للحمض اللينوليك مثل: خصائص مضادة للشيخوخة للبشرة؛ 6 خصائص مضادة للالتهابات، 7 انخفاض انتشار القولون والمستقيم والبروستاتا خلايا سرطان؛ 8 والقدرة على محاربة السمنة وتعزيز سو صحة القلب والأوعية الدموية. 9 حمض اللينولينيك يلعب دورا في الحد من التهاب اللثة، الثرموبوكسان 10 وتحوير والحيوي بروستاسيكلين 11 آربيتا 12 درس تأثير الأحماض الدهنية الصفراء والكوليسترول في V. التعبير الكوليرا &#39;S من عوامل الفوعة والحركة. وأشار ياماساكي 13 أن استخراج الميثانول من الفلفل الأحمر الحار، والمركبات المستخرجة طبيعيا أخرى، يمكن أن يحتمل أن ينخفض ​​إنتاج سموم الكوليرا. فمن المتصور أن تنظر في استخدام المنتجات الغذائية التي هي غنية في الأحماض الدهنية أعلاه (مثل بذور الكتان) في الوقاية والتخفيف من الأمراض المعدية مثل الكوليرا من خلال توفير حصانة. أجرينا تحقيقات لذوبان الأحماض الدهنية وتحديد، وذلك باستخدام المقايسات تكاثر الخلايا، والحد الأقصى لتركيز الأحماض الدهنية أن الخلايا الظهارية في الأمعاء البشرية يمكن أن يتسامح بدون آثار ضارة على CEجدوى ليرة لبنانية. افترضنا أن الأحماض الأوليك، اللينوليك واللينولينيك توفير تأثير مفيد على بقاء الخلية بتركيزات أقل، ولكن هذا في تركيزات أعلى أنها سوف تكون سامة للخلايا. نحن أيضا solubilized السم الكوليرا وتحديد الحد الأقصى لتركيز السم الكوليرا الذي BALB / C الضامة الماوس يمكن أن يتسامح دون حدوث انخفاض كبير في بقاء الخلية. نحن نفترض تأثير السامة للبكتيريا الكوليرا على بقاء الخلية حتى على مستوى منخفض جدا. طريقة solubilizing السم الكوليرا واستخدامه لتحديد الحد الأقصى لمقدار السم أن الخلايا يمكن أن يتسامح دون حدوث انخفاض كبير في البقاء على قيد الحياة ويوفر ميزة للدراسات المستقبلية. على سبيل المثال، وهو مزيج من المنهجيات أعلاه يمكن استخدامها لتحديد ما إذا كانت الأحماض الدهنية توفر الخلايا مع حصانة ضد الالتهابات الكوليرا. إلى حد علمنا، لم يتم استكشاف هذه المنهجية العقلانية و. نحن ديscuss كيف يمكن استخدام البيانات الأولية لدينا في التحقيقات في وقت لاحق لتحديد ما إذا الأوليك والأحماض اللينوليك واللينولينيك توفر الخلايا مع حصانة ضد الإصابة بالكوليرا.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cells/Reagent</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Mus musculus macrophages</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC RAW 264.7</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2002</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2115</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal bovine serum </td>
			<td>Bio-west</td>
			<td>S0250</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Antibiotic/antimycotic </td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV3007901</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Human intestinal epithelial cells </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATTC CCL-241</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HybriCare media </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>46-X</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O1008</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linoleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-1376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linolenic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholera toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates</td>
			<td>BD Biosciences </td>
			<td>351172</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software</td>
			<td>Dynex</td>
			<td>91000101</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages

لقد كان دور إيجابي من الأحماض الدهنية في الوقاية والتخفيف من الأمراض غير الإنسان والإنسان والاستمرار في أن تكون موثقة على نطاق واسع. وتشمل هذه الأدوار التأثيرات على الأمراض المعدية وغير المعدية بما في ذلك الوقاية من التهاب وكذلك حصانة للأمراض المعدية. الكوليرا هو مرض معوية حادة تسببها بكتيريا ضمة الكوليرا. ويحدث ذلك في الدول النامية، وإذا تركت دون علاج، يمكن أن يؤدي إلى الموت. بينما لقاحات الكوليرا موجودة، فهي ليست دائما فعالة وهناك حاجة إلى أساليب وقائية أخرى. شرعنا في تحديد التركيزات المسموح من ثلاثة أحماض الدهنية (الأحماض الأوليك، اللينوليك واللينولينيك) وبكتيريا الكوليرا باستخدام الماوس BALB / C الضامة والخلايا الظهارية في الأمعاء البشرية، على التوالي. نحن solubilized الأحماض الدهنية أعلاه وتستخدم المقايسات تكاثر الخلايا لتحديد نطاقات تركيز وتركيزات معينة من الأحماض الدهنية التي توجدر تضر الإنسان المعوية بقاء الخلية الظهارية. نحن solubilized توكسين الكوليرا واستخدامه في فحص لتحديد نطاقات تركيز وتركيزات محددة من بكتيريا الكوليرا التي لا تقلل إحصائيا بقاء الخلية في BALB / C الضامة. وجدنا تركيزات الأحماض الدهنية الأمثل أن تكون بين 1-5 نانوغرام / ميكرولتر، وذلك لذيفان الكوليرا أن يكون &lt;30 نانوغرام لكل معاملة. هذه البيانات قد تساعد الدراسات المستقبلية التي تهدف إلى إيجاد دور المخاطية الواقية للالأحماض الدهنية في الوقاية أو التخفيف من الالتهابات الكوليرا.

تحديد تركيز الأمثل من الأحماض الدهنية يتم تعريف تركيز الأمثل للأحماض الدهنية والحد الأقصى للتركيز على نمو الخلايا التي هي مماثلة لأو يفوق عدد الخلايا السيطرة، مع تقلبات منخفضة نسبيا في النتائج. لتحديد تركيز الأمثل للالأوليك، وعو...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

شرعنا في تحديد التركيزات المسموح من ثلاثة أحماض الدهنية (الأحماض الأوليك، اللينوليك واللينولينيك) وبكتيريا الكوليرا التي لم تؤثر سلبا بشكل ملحوظ وبقاء الخلية بواسطة solubilizing الأحماض الدهنية والسموم واستخدامها في المقايسات بقاء الخلية.

تقرير من الأحماض الدهنية المسموح وتركيزات ذيفان الكوليرا عن طريق خلايا الإنسان الظهارية في الأمعاء وBALB / ج الضامة ماوس

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Ligated تطبيق ماوس الفحص باير لتصحيح حلقة لتقييم امتصاص الأمعاء البكتيرية بواسطة خلايا M

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

عزل وتوصيف الخلايا الجذعية والضامة من الأمعاء ماوس

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

تصور الردود السم البكتيري المستحثة عن طريق لايف مضان المجهري الخليوي

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

الغزو الجرثومي المعوي الخلايا الظهارية المعوية<em&gt; في المختبر</em&gt; تتعزز بشكل كبير عن طريق دائرة إنتشار عمودي الموديل

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

عزل الخلايا الجذعية متعلق بالنخاع الشوكي والخلايا الظهارية من الغدة الصعترية الإنسان

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

باستخدام الحمض النووي الريبي التدخل للتحقيق في الاستجابة المناعية الفطرية في الفأر الضامة

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

تحليل المناعي من الإجهاد الحبيبية تشكيل بعد تحدي البكتيريا من خلايا الثدييات

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

Saturated Fatty Acids Induce Ceramide-associated Macrophage Cell Death

الأحماض الدهنية المشبعة الحث على موت الخلايا المرتبطة السيراميد بلعم

Macrophages highly express epidermal fatty acid-binding protein and adipose fatty acid-binding protein. They actively uptake saturated and unsaturated ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

الفأر والإنسان-المستمدة من الثقافة أساسي أحادي الطبقة الظهارية المعدة لدراسة تجديد

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

تحريض التهاب الكبد المناعي الذاتي الناجم عن الأدوية في الفئران BALB / c لدراسة آلياته المسببة للأمراض

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...