Name: determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages
Uploaded: 2013-05-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

Wij danken Paula Cobos en Dr Evros Vassiliou voor lab bijstand en het verstrekken van de muis macrofagen, respectievelijk. We ons lab manager Richard Criasia danken ook voor begeleiding en hulp met materialen. Tot slot, de auteurs danken Ramanpreet Kaur voor hulp bij videoproductie.

1. Tissue Culture <ol><li> Gebruik Mus musculus macrofagen (BALB / c muizen) voor cholera toxine bepalingen. Aanvankelijk cultuur al M. musculus cellen volgens de instructies van leverancier. </li><li> Propageren BALB / c muizen cellen in Dulbecco&#39;s gemodificeerd Eagle&#39;s Medium met L-glutamine aangevuld met 10% foetaal runderserum en 1% antibioticum / antimycoticum of RPMI 1640 basismedium aangevuld met 10% foetaal runderserum, 5% L-glutamine en 1 % antibiotische / antimycotische reagens. </l...

<ol>
	<li>Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+Acid:+Its+effects+on+stratum+corneum+in+relation+to+(trans)+dermal+drug+delivery.">Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery.</a> Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).</li><li>Tandon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+diffraction+and+spectroscopic+studies+of+oleic+acid-sodium+acetate.">X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate.</a> Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).</li><li>Kris-Etherton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+debate+about+n-6+polyunsaturated+fatty+acid+recommendations+for+cardiovascular+health.">The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health.</a> Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).</li><li>Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenoleukodystrophy:+dietary+oleic+acid+lowers+hexacosanoate+levels.">Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels.</a> Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).</li><li>Bozan, B., Temelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+oxidative+stability+of+flax,+safflower+and+poppy+seed+and+seed+oil.">Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil.</a> Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).</li><li>Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+benefits+of+conjugated+linoleic+acid+to+3-dimensional+wrinkle+morphology.">Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology.</a> J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).</li><li>Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjugated+linoleic+acid+decreases+production+of+pro-inflammatory+products+in+macrophages:+Evidence+for+a+PPARy+dependent+mechanism.">Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).</li><li>Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-proliferative+effects+of+biologically+active+isomers+of+conjugated+linoleic+acid+on+human+colorectal+and+prostatic+cancer+cells.">The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells.</a> Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).</li><li>Granda, M., Sinclair, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acids+and+obesity.">Fatty acids and obesity.</a> Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).</li><li>Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pilot+study+of+dietary+fatty+acid+supplementation+in+the+treatment+of+adult+periodontitis.">Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis.</a> Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).</li><li>Ferretti, A., Flanagan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithromboxane+activity+of+dietary+alpha-linolenic+acid:+a+pilot+study.">Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study.</a> Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).</li><li>Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Fatty+Acids+and+Cholesterol+Present+in+Bile+on+Expression+of+Virulence+Factors+and+Motility+of+Vibrio+cholera.">Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera.</a> Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).</li><li>Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+virulence+potential+of+Vibrio+cholerae+by+natural+compounds.">Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds.</a> Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).</li><li>Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+Genetics+of+Vibrio+cholerae+from+Nepal+in+2010:+Evidence+on+the+origin+of+the+Haitian+outbreak.">Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak.</a> mBio. 2 (4), 1-6 (2011).</li><li>Schaeffler, A., Gross, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid-induced+induction+of+Toll-like+receptor-4/nuclear+factor-kappa+B+pathway+in+adipocytes+links+nutritional+signaling+with+innate+immunity.">Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity.</a> Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).</li></ol>

Suggestie van de concentratie van vetzuren en Cholera toxine Hoewel het exacte mechanisme hoe de vetzuren mucosale immuniteit bekend, hebben verschillende studies geprobeerd om de positieve effecten te onderzoeken. Onze studie beoogt methode aan de maximale concentratie van vetzuren die cellen evenals de maximale concentratie van cholera toxine kan tolereren cellen kunnen verdragen zonder een significante invloed op celoverleving te bepalen. Om de concentratie van d...

De gezondheidsvoordelen van vetzuren, zoals oliezuur, linolzuur en linoleenzuur werden en worden gedocumenteerd. Bijvoorbeeld, oliezuur helpt penetratie van lipofiele geneesmiddelen in het lichaam 1,2 vergemakkelijken vermindert coronaire hartziekte met 24% wanneer gelezen verzadigde vetzuren 3 en wordt gebruikt om metabolische ziekten zoals Adrenoleukodystrophy 4 is een X-gebonden behandelen erfelijke aandoening van vetzuurmetabolisme. . Terwijl een noodzakelijke voorloper arachidonzuur in zoogdieren, linolzuur (in tegenstelling oliezuur) niet wordt gesynthetiseerd door het lichaam en moet door externe bronnen zoals lijnzaad consumptie door 5 Studies geven verschillende gezondheidsvoordelen van linolzuur zoals: anti-aging eigenschappen voor de huid; 6 anti-inflammatoire eigenschappen; 7 verminderde proliferatie van colorectale en prostaatkanker cellen; 8 en de mogelijkheid om obesitas te bestrijden en promotie of cardiovasculaire gezondheid. 9 linoleenzuur speelt een rol bij het ​​verminderen van periodontale ontsteking, 10 en moduleren tromboxaan en prostacycline biosynthese. 11 Arpita 12 onderzocht de invloed van gal vetzuren en cholesterol op V. cholerae &#39;s expressie van virulentiefactoren en de beweeglijkheid. Yamasaki 13 aangegeven dat methanol extract van rode chili pepers, en andere natuurlijk gewonnen verbindingen, cholera toxine productie potentieel kunnen verlagen. Het is denkbaar om het gebruik van voedingsmiddelen die rijk zijn in de bovenstaande vetzuren (zoals lijnzaad) bij de preventie en verlichting van infectieziekten zoals cholera door het verstrekken van mucosale immuniteit onderzocht. We onderzoeken verricht om vetzuren te solubiliseren en zou op basis van celproliferatie assays, de maximale concentratie van vetzuren die menselijke intestinale epitheliale cellen kan verdragen zonder nadelige gevolgen cell levensvatbaarheid. We veronderstelden dat oliezuur, linolzuur en linoleenzuur verschaffen een gunstig effect op de levensvatbaarheid van cellen bij lagere concentraties, maar bij hogere concentraties zij toxisch voor de cellen is. Ook oplosbaar choleratoxine en bepaald de maximale concentratie van cholera toxine dat BALB / C muizen macrofagen kan verdragen zonder significant in cellevensvatbaarheid. Onze hypothese is een toxisch effect van cholera toxine op levensvatbaarheid van de cellen, zelfs bij zeer lage niveau. Werkwijze solubiliseren een cholera toxine en te gebruiken om de maximale hoeveelheid van het toxine dat de cellen kunnen tolereren zonder significant in overlevingsvermogen bepalen een voordeel voor toekomstige studies. Bijvoorbeeld kan een combinatie van de bovenstaande methoden worden bepaald of vetzuren cellen te voorzien van mucosale immuniteit tegen cholera infecties. Om het beste van onze kennis, is dit rationeel en methodiek niet onderzocht. Wij discuss hoe onze voorlopige gegevens kunnen worden gebruikt in latere onderzoeken om te bepalen of oliezuur, linolzuur en linoleenzuur cellen te voorzien van mucosale immuniteit tegen cholera-infectie.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cells/Reagent</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Mus musculus macrophages</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC RAW 264.7</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2002</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2115</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal bovine serum </td>
			<td>Bio-west</td>
			<td>S0250</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Antibiotic/antimycotic </td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV3007901</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Human intestinal epithelial cells </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATTC CCL-241</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HybriCare media </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>46-X</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O1008</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linoleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-1376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linolenic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholera toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates</td>
			<td>BD Biosciences </td>
			<td>351172</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software</td>
			<td>Dynex</td>
			<td>91000101</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages

De positieve rol van vetzuren in de preventie en verlichting van non-humane en humane ziekten werden en uitgebreid gedocumenteerd. Deze rollen zijn invloeden op infectieuze en niet-infectieuze ziekten, zoals het voorkomen van ontsteking en mucosale immuniteit tegen infectieziekten. Cholera is een acute intestinale ziekte veroorzaakt door de bacterie Vibrio cholerae. Het komt voor in ontwikkelingslanden en indien onbehandeld, kan leiden tot de dood. Terwijl voor cholera vaccins bestaan, zijn ze niet altijd effectief en andere preventieve methoden nodig. We stellen om aanvaardbare concentraties van drie vetzuren (oliezuur, linolzuur en linoleenzuur) en cholera toxine met de muis BALB / C macrofagen en humane intestinale epitheelcellen, respectievelijk bepalen. We oplosbaar bovengenoemde vetzuren en gebruikt celproliferatie assays om de concentratie trajecten en specifieke concentraties van de vetzuren die niet vastt schadelijk voor de menselijke intestinale epitheliale cellevensvatbaarheid. We oplosbaar choleratoxine en gebruikt in een test om de concentratie trajecten en specifieke concentraties van choleratoxine die statistisch cellevensvatbaarheid doen afnemen in BALB / C macrofagen bepalen. We vonden de optimale vetzuur concentraties tussen 1,5 ng / ul, en die van cholera toxine &lt;30 ng per behandeling. Deze gegevens kunnen toekomstige studies die tot doel hebben een beschermende mucosale rol van vetzuren in de preventie of verlichting van cholera infecties te helpen.

Bepaling van de optimale concentratie van Fatty Acids De optimale concentratie van vetzuren wordt gedefinieerd als de maximale concentratie waarbij de celgroei is vergelijkbaar met of groter dan die van de controle cellen met relatief lage variabiliteit in resultaten. Om de optimale concentratie van oliezuur bepalen werden linolzuur en linoleenzuur cellen aanvankelijk behandeld met verschillende concentraties van elk vetzuur in grote stappen en later met kleinere stappen. Figuur 1</stro...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

We stellen om aanvaardbare concentraties van drie vetzuren (oliezuur, linolzuur en linoleenzuur) en cholera toxine dat niet significant en negatief effect hadden op overleving van de cel door oplossen van de vetzuren en de toxine en het gebruik ervan in de overleving van de cel assays bepalen.

Bepaling van de toelaatbare vetzuren en Cholera toxine Concentraties behulp Human Intestinal epitheelcellen en BALB / c muis macrofagen

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Toepassing van een muis geligateerd Peyer&#39;s Patch Intestinale Loop Assay om Bacteriële opname evalueren door M-cellen

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolatie en karakterisering van dendritische cellen en macrofagen van de muis Darm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

Visualisatie van bacteriële toxine geïnduceerde responsen met Live Cell Fluorescentie Microscopie

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enterische Bacteriële invasie van darmepitheelcellen<em&gt; In Vitro</em&gt; Is het drastisch verbeterde Met behulp van een verticale Diffusion Kamer Model

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolatie van myeloïde dendritische cellen en epitheelcellen van Human Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Met behulp van RNA-interferentie te onderzoeken de aangeboren immuunrespons in muizenmacrofagen

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

Immunofluorescentie analyse van stress granule vorming na bacteriële uitdaging van zoogdiercellen

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

Saturated Fatty Acids Induce Ceramide-associated Macrophage Cell Death

Verzadigde vetzuren induceren Ceramide-geassocieerde Macrophage celdood

Macrophages highly express epidermal fatty acid-binding protein and adipose fatty acid-binding protein. They actively uptake saturated and unsaturated ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

Muis en mens-afkomstige primaire maag epitheliale enkelgelaagde cultuur voor de studie van regeneratie

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

Inductie van geneesmiddel-geïnduceerde, auto-immune hepatitis bij BALB / c-muizen voor de studie van de pathogene mechanismen

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...