Name: determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages
Uploaded: 2013-05-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

Wir danken Dr. Paula Cobos und Evros Vassiliou für Labor-Unterstützung und die Bereitstellung der Maus-Makrophagen sind. Wir danken auch unserem Labor Manager Richard Criasia für Beratung und Hilfe mit Materialien. Schließlich danken die Autoren Ramanpreet Kaur für die Hilfe bei Videoproduktion.

1. Tissue Culture <ol><li> Verwenden Mus musculus Makrophagen (BALB / c-Mäusen) für Cholera-Toxin Bestimmungen. Zunächst Kultur alle M. musculus Zellen nach Anweisungen des Herstellers. </li><li> Propagieren BALB / c-Mäusen Zellen in Dulbecco-modifiziertes Eagle-Medium mit L-Glutamin mit 10% fötalem Rinderserum abgeschlossen und 1% Antibiotikum / Antimykotikum oder RPMI 1640 Basismedium mit 10% fötalem Kälberserum, 5% L-Glutamin und 1 abgeschlossen % Antibiotikum / Antimykotikum Reagenz. </li>...

<ol>
	<li>Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+Acid:+Its+effects+on+stratum+corneum+in+relation+to+(trans)+dermal+drug+delivery.">Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery.</a> Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).</li><li>Tandon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+diffraction+and+spectroscopic+studies+of+oleic+acid-sodium+acetate.">X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate.</a> Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).</li><li>Kris-Etherton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+debate+about+n-6+polyunsaturated+fatty+acid+recommendations+for+cardiovascular+health.">The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health.</a> Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).</li><li>Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenoleukodystrophy:+dietary+oleic+acid+lowers+hexacosanoate+levels.">Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels.</a> Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).</li><li>Bozan, B., Temelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+oxidative+stability+of+flax,+safflower+and+poppy+seed+and+seed+oil.">Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil.</a> Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).</li><li>Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+benefits+of+conjugated+linoleic+acid+to+3-dimensional+wrinkle+morphology.">Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology.</a> J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).</li><li>Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjugated+linoleic+acid+decreases+production+of+pro-inflammatory+products+in+macrophages:+Evidence+for+a+PPARy+dependent+mechanism.">Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).</li><li>Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-proliferative+effects+of+biologically+active+isomers+of+conjugated+linoleic+acid+on+human+colorectal+and+prostatic+cancer+cells.">The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells.</a> Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).</li><li>Granda, M., Sinclair, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acids+and+obesity.">Fatty acids and obesity.</a> Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).</li><li>Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pilot+study+of+dietary+fatty+acid+supplementation+in+the+treatment+of+adult+periodontitis.">Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis.</a> Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).</li><li>Ferretti, A., Flanagan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithromboxane+activity+of+dietary+alpha-linolenic+acid:+a+pilot+study.">Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study.</a> Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).</li><li>Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Fatty+Acids+and+Cholesterol+Present+in+Bile+on+Expression+of+Virulence+Factors+and+Motility+of+Vibrio+cholera.">Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera.</a> Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).</li><li>Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+virulence+potential+of+Vibrio+cholerae+by+natural+compounds.">Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds.</a> Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).</li><li>Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+Genetics+of+Vibrio+cholerae+from+Nepal+in+2010:+Evidence+on+the+origin+of+the+Haitian+outbreak.">Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak.</a> mBio. 2 (4), 1-6 (2011).</li><li>Schaeffler, A., Gross, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid-induced+induction+of+Toll-like+receptor-4/nuclear+factor-kappa+B+pathway+in+adipocytes+links+nutritional+signaling+with+innate+immunity.">Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity.</a> Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).</li></ol>

Tipps der Konzentration von Fettsäuren und Cholera Toxin Zwar ist der genaue Mechanismus, wie Fettsäuren verbessern Schleimhaut-Immunität ist unbekannt, haben mehrere Studien versucht, ihre positiven Wirkungen zu untersuchen. Unsere Studie soll Methode bereitzustellen, um die maximale Konzentration an Fettsäuren, die Zellen als auch die maximale Konzentration von Choleratoxin tolerieren kann, dass Zellen ohne einen signifikanten Einfluß auf das Überleben der Zelle zu bestimmen tolerieren....

Die gesundheitlichen Vorteile von Fettsäuren, wie Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure waren und sind weiterhin zu dokumentieren. Zum Beispiel hilft Ölsäure erleichtern das Eindringen von lipophilen Arzneistoffen im Körper 1,2 reduziert koronaren Herzerkrankung um 24%, wenn für gesättigte Fettsäuren 3 substituiert ist, und dient dazu, Stoffwechselerkrankungen wie Adrenoleukodystrophy 4, die eine ist, X-chromosomale behandeln genetische Störung des Fettsäurestoffwechsels. . Während eine notwendige Vorstufe für Arachidonsäure in Säugetieren, Linolsäure (anders als Ölsäure) wird nicht vom Körper synthetisiert und muss durch externe Quellen wie zB durch Leinsamen Verbrauch erzielt werden 5 Studien zeigen mehrere positive Auswirkungen auf die Gesundheit von Linolsäure wie: Anti-Aging-Eigenschaften für die Haut; 6 entzündungshemmende Eigenschaften; 7 reduzierte Proliferation von Darm-und Prostata-Karzinom-Zellen; 8 und die Fähigkeit zur Bekämpfung von Adipositas und Förderung of Herz-Kreislauf-Gesundheit. 9 Linolensäure spielt eine Rolle bei der Verringerung der parodontalen Entzündung, 10 und modulierende Thromboxan und Prostacyclin-Biosynthese. 11 Arpita 12 untersuchten den Einfluss der Galle Fettsäuren und Cholesterin auf V. cholerae &#39;s Ausdruck von Virulenzfaktoren und Beweglichkeit. Yamasaki 13 angedeutet, dass Methanol-Extrakt aus roten Chilischoten und anderen natürlich extrahierten Verbindungen können möglicherweise verringern Cholera-Toxin-Produktion. Denkbar ist es, die Verwendung von Lebensmittel-Produkten, die reich an den oben genannten Fettsäuren (wie Leinsamen) bei der Vorbeugung und Linderung von Infektionskrankheiten wie Cholera durch die Bereitstellung von Schleimhaut-Immunität sind zu berücksichtigen. Wir haben Untersuchungen an Fettsäuren löslich zu machen und zu bestimmen, unter Verwendung Zellproliferationsassays, die maximale Konzentration der Fettsäuren, die humanen intestinalen Epithelzellen ohne nachteilige Auswirkungen auf ce vertragenll Lebensfähigkeit. Wir vermuten, dass Öl-, Linol-und Linolensäure eine positive Wirkung auf die Lebensfähigkeit der Zellen bei niedrigeren Konzentrationen enthalten, aber dass bei höheren Konzentrationen werden sie für die Zellen toxisch. Wir haben auch die gelösten Cholera-Toxin und bestimmt die maximale Konzentration von Cholera-Toxin, dass BALB / C Maus-Makrophagen können, ohne einer signifikanten Abnahme der Lebensfähigkeit der Zellen zu tolerieren. Wir vermuten, eine toxische Wirkung von Cholera-Toxin auf die Lebensfähigkeit der Zellen auch bei sehr niedrigen Niveau. Das Verfahren zur Solubilisierung eine Cholera-Toxin und benutzen, um die maximale Menge des Toxins, dass die Zellen ohne einer signifikanten Abnahme der Überlebensfähigkeit tolerieren bestimmen stellt einen Vorteil für künftige Studien. Zum Beispiel kann eine Kombination der oben genannten Methoden zu bestimmen, ob Zellen bereitzustellen Fettsäuren mit Schleimhaut-Immunität gegen Cholera Infektionen. Nach bestem Wissen versichern wir, hat dies rational und Methodik nicht erforscht worden. Wir discuss wie unsere vorläufigen Daten in späteren Untersuchungen kann verwendet werden, um festzustellen, ob Öl-, Linol-und Linolensäure bieten Zellen mit Schleimhaut-Immunität gegen Cholera-Infektion.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cells/Reagent</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Mus musculus macrophages</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC RAW 264.7</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2002</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2115</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal bovine serum </td>
			<td>Bio-west</td>
			<td>S0250</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Antibiotic/antimycotic </td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV3007901</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Human intestinal epithelial cells </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATTC CCL-241</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HybriCare media </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>46-X</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O1008</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linoleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-1376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linolenic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholera toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates</td>
			<td>BD Biosciences </td>
			<td>351172</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software</td>
			<td>Dynex</td>
			<td>91000101</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages

Die positive Rolle von Fettsäuren in der Prävention und Linderung von nicht-menschlichen und menschlichen Krankheiten wurden und weiterhin umfassend dokumentiert werden. Diese Rollen sind Einflüsse auf infektiösen und nicht-infektiösen Krankheiten einschließlich Prävention von Entzündungen sowie Schleimhaut-Immunität gegen Infektionskrankheiten. Cholera ist eine akute Darm-Erkrankung, die durch das Bakterium Vibrio cholerae verursacht wird. Es tritt in den Entwicklungsländern, und wenn sie unbehandelt, kann zum Tod führen. Während Impfstoffe gegen Cholera existieren, sind sie nicht immer effektiv und vorbeugende Methoden erforderlich sind. Wir wollten tolerierbaren Konzentrationen von drei Fettsäuren (Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure) und Cholera-Toxin mit der Maus BALB / C Makrophagen und humanen intestinalen Epithelzellen, bzw. zu bestimmen. Wir solubilisiert die oben genannten Fettsäuren und verwendet Zellproliferationsassays die Konzentrationsbereiche und spezifische Konzentrationen der Fettsäuren, die nicht bestimment schädlich für die menschliche Darm-Epithelzellen Lebensfähigkeit. Wir solubilisiert Cholera-Toxin und benutzte es in einem Test, um die Konzentrationsbereiche und spezifische Konzentrationen von Cholera-Toxin, die nicht statistisch nicht verringern die Lebensfähigkeit der Zellen in BALB / C Makrophagen bestimmen. Wir fanden die optimale Fettsäure-Konzentrationen zwischen 1-5 ng / ul, und dass für die Cholera-Toxin auf &lt;30 ng pro Behandlung sein. Sein Diese Daten können helfen zukünftige Studien, die eine schützende Schleimhaut Rolle Fettsäuren in der Prävention oder Linderung von Cholerainfektionen finden sollen.

Bestimmung der optimalen Konzentration von Fettsäuren Die optimale Konzentration für die Fettsäuren ist als die maximale Konzentration, bei der das Zellwachstum ist vergleichbar oder übersteigt die Kontrollzellen, mit relativ geringen Schwankungen bei den Ergebnissen festgelegt. Um die optimale Konzentration von Ölsäure zu bestimmen, Linol-und Linolensäure Zellen wurden zunächst mit verschiedenen Konzentrationen von jeder Fettsäure in großen Schritten und dann mit kleineren Schritten ...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

Wir wollten tolerierbaren Konzentrationen von drei Fettsäuren (Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure) und Cholera-Toxin nicht wesentlich und nachteilig beeinflussen hat das Überleben der Zelle durch das Lösen der Fettsäuren und das Toxin und mit ihnen in das Überleben der Zelle Assays zu bestimmen.

Bestimmung der tolerierbaren Fettsäuren und Cholera Toxin-Konzentrationen mit menschlichen Darm-Epithelzellen und BALB / c Maus-Makrophagen

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Die Anwendung eines Maus Ligierte Peyer-Patch-Darmschlinge Assay zu bakterielle Aufnahme von M-Zellen auswerten

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolierung und Charakterisierung von dendritischen Zellen und Makrophagen aus dem Mausdarm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

Visualisierung der bakteriellen Toxin induzierten Reaktionen mit Live Cell Fluoreszenzmikroskopie

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric bakterielle Invasion von intestinalen Epithelzellen<em&gt; In Vitro</em&gt; Ist erheblich verstärkt unter Verwendung eines vertikalen Diffusion Chamber Modell

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolierung von myeloider dendritischer Zellen und Epithelzellen Menschliche Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Mit RNA-Interferenz, um die angeborene Immunantwort in Makrophagen der Maus Untersuchen

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

Immunfluoreszenzanalyse der Stressgranulat-Bildung nach bakterieller Herausforderung von Säugetierzellen

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

Saturated Fatty Acids Induce Ceramide-associated Macrophage Cell Death

Gesättigte Fettsäuren induzieren Ceramid-assoziierten Makrophagen Zelltod

Macrophages highly express epidermal fatty acid-binding protein and adipose fatty acid-binding protein. They actively uptake saturated and unsaturated ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

Abgeleitet von Maus und Mensch primäre gastrische Epithelzellen Monolayer Kultur for the Study of Regeneration

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

Induktion der medikamenteninduzierten Autoimmunhepatitis bei BALB/c-Mäusen zur Untersuchung ihrer pathogenen Mechanismen

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...