Name: determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages
Uploaded: 2013-05-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

אנו מודים לד&quot;ר פאולה קובוס וEvros Vassiliou לסיוע מעבדה ומתן מקרופאגים העכבר, בהתאמה. אנו מודים גם מנהל המעבדה ריצ&#39;רד Criasia להדרכה ועזרה עם חומרים. לבסוף, המחברים מודים קאור Ramanpreet לקבלת עזרה בהפקת וידאו.

1. תרבית רקמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מקרופאגים מאסכאלאס Mus (BALB / ג) לקביעות רעלן הכולרה. בתחילה כל התרבות של מ &#39; תאי מאסכאלאס בעקבות הוראותיו של הספק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפץ תאי BALB / C עכברים בבינוני השתנה Dulbecco של ה?...

<ol>
	<li>Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+Acid:+Its+effects+on+stratum+corneum+in+relation+to+(trans)+dermal+drug+delivery.">Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery.</a> Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).</li><li>Tandon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+diffraction+and+spectroscopic+studies+of+oleic+acid-sodium+acetate.">X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate.</a> Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).</li><li>Kris-Etherton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+debate+about+n-6+polyunsaturated+fatty+acid+recommendations+for+cardiovascular+health.">The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health.</a> Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).</li><li>Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenoleukodystrophy:+dietary+oleic+acid+lowers+hexacosanoate+levels.">Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels.</a> Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).</li><li>Bozan, B., Temelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+oxidative+stability+of+flax,+safflower+and+poppy+seed+and+seed+oil.">Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil.</a> Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).</li><li>Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+benefits+of+conjugated+linoleic+acid+to+3-dimensional+wrinkle+morphology.">Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology.</a> J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).</li><li>Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjugated+linoleic+acid+decreases+production+of+pro-inflammatory+products+in+macrophages:+Evidence+for+a+PPARy+dependent+mechanism.">Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).</li><li>Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-proliferative+effects+of+biologically+active+isomers+of+conjugated+linoleic+acid+on+human+colorectal+and+prostatic+cancer+cells.">The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells.</a> Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).</li><li>Granda, M., Sinclair, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acids+and+obesity.">Fatty acids and obesity.</a> Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).</li><li>Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pilot+study+of+dietary+fatty+acid+supplementation+in+the+treatment+of+adult+periodontitis.">Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis.</a> Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).</li><li>Ferretti, A., Flanagan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithromboxane+activity+of+dietary+alpha-linolenic+acid:+a+pilot+study.">Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study.</a> Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).</li><li>Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Fatty+Acids+and+Cholesterol+Present+in+Bile+on+Expression+of+Virulence+Factors+and+Motility+of+Vibrio+cholera.">Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera.</a> Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).</li><li>Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+virulence+potential+of+Vibrio+cholerae+by+natural+compounds.">Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds.</a> Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).</li><li>Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+Genetics+of+Vibrio+cholerae+from+Nepal+in+2010:+Evidence+on+the+origin+of+the+Haitian+outbreak.">Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak.</a> mBio. 2 (4), 1-6 (2011).</li><li>Schaeffler, A., Gross, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid-induced+induction+of+Toll-like+receptor-4/nuclear+factor-kappa+B+pathway+in+adipocytes+links+nutritional+signaling+with+innate+immunity.">Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity.</a> Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).</li></ol>

הצעה של ריכוז חומצות שומן ורעלן הכולרה בעוד המנגנון של כמה חומצות שומן לשפר את החסינות רירית המדויק אינו ידוע, אך מספר מחקרים ניסו לבדוק ההשפעות המועילות שלהם. המחקר שלנו נועד לספק למתודולוגיית כדי לקבוע את הריכוז המרבי של חומצות ?...

היתרונות הבריאותיים של חומצות שומן, כגון אולאית, לינולאית וחומצות ינולאית היו וממשיכים להיות מתועדים. לדוגמה, חומצה אולאית עוזרת להקל על חדירה של תרופות lipophilic ב1,2 הגוף, מפחיתה את מחלות לב כליליות ב -24%, כאשר מחליפה חומצות שומן רוויות 3, והוא משמש לטיפול במחלות מטבוליות כגון adrenoleukodystrophy 4 אשר צמודות X הפרעה גנטית של חילוף החומרים של חומצות שומן. . בעוד מבשר הכרחי לחומצה הארכידונית ביונקים, חומצה לינולאית (שלא כמו חומצה אולאית) אינו מסונתז על ידי הגוף ויש לקבל באמצעות מקורות חיצוניים, כגון על ידי צריכת זרעי פשתן 5 מחקרים מראים כמה השפעות בריאותיות מיטיבות של חומצה לינולאית, כגון: תכונות אנטי אייג&#39;ינג לעור; 6 תכונות אנטי דלקתיות; 7 הפצה מופחתת של תאי סרטן מעי גס וערמונית, 8 ואת היכולת להילחם בהשמנה והקידום O. חומצה לינולנית ו בריאות לב וכלי דם 9 משחקת תפקיד בהפחתת דלקת חניכיים, 10 והוויסות thromboxane וסינתזת prostacyclin. 11 12 Arpita למד את ההשפעה של חומצות שומן וכולסטרול במרת V. ביטוי של cholerae של גורמים ארסיות ותנועתיות. דואדי 13 הצביע על כך שתמצית מתנול מאדום פלפל צ&#39;ילי, ותרכובות המופקים באופן טבעי אחרות, עלולה להקטין את ייצור הרעלן כולרה. זה מתקבל על הדעת לשקול את השימוש במוצרי מזון עשירים בחומצות השומן הנ&quot;ל (כגון זרעי פשתן) במניעה ובהקלה של מחלות זיהומיות כגון כולרה באמצעות מתן חסינות רירית. ערכנו את חקירות לsolubilize חומצות שומן ולקבוע, באמצעות מבחני שגשוג תאים, הריכוז המרבי של חומצות שומן שתאי אפיתל במעי אדם יכולים לסבול ללא השפעות מזיקות על ceכדאיות LL. חוקרים שיערנו כי חומצות אולאית, לינולאית ולינולנית לספק השפעה חיובית על כדאיות תא בריכוזים נמוכים יותר, אבל זה בריכוזים גבוהים יותר הם יהיו רעילים לתאים. כמו כן, אנו solubilized רעלן הכולרה וקבענו את הריכוז המרבי של רעלן הכולרה שמקרופאגים עכבר BALB / C יכולים לסבול ללא ירידה משמעותית בכדאיויות תא. אנו משערים אפקט רעיל של רעלן הכולרה על כדאיות תא אפילו ברמה נמוכה מאוד. השיטה של ​​solubilizing רעלן הכולרה ולהשתמש בו כדי לקבוע את הכמות המקסימלית של הרעל שהתאים יכולים לסבול ללא ירידה משמעותית בשרידות מספקת יתרון למחקרים עתידיים. לדוגמה, שילוב של מתודולוגיות לעיל יכול לשמש כדי לקבוע אם חומצות שומן לספק תאים רירית עם חסינות מפני זיהומי כולרה. למיטב ידיעתנו, שיטה רציונלית וזה לא נחקרה. אנחנו דיscuss כיצד ניתן להשתמש בנתונים הראשוניים שלנו בחקירות מאוחרות יותר כדי לקבוע אם אולאית, חומצות לינולאית ולינולנית לספק תאים רירית עם חסינות מפני זיהום כולרה.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cells/Reagent</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Mus musculus macrophages</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC RAW 264.7</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2002</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2115</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal bovine serum </td>
			<td>Bio-west</td>
			<td>S0250</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Antibiotic/antimycotic </td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV3007901</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Human intestinal epithelial cells </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATTC CCL-241</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HybriCare media </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>46-X</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O1008</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linoleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-1376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linolenic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholera toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates</td>
			<td>BD Biosciences </td>
			<td>351172</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software</td>
			<td>Dynex</td>
			<td>91000101</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages

התפקיד החיובי של חומצות שומן במניעה ובהקלה של מחלות שאינן בני אדם והאנושיים היה וממשיך להיות מתועדים בהרחבה. תפקידים אלה כוללים השפעות על מחלות זיהומיות ולא זיהומיות כולל מניעה של דלקת, כמו גם חסינות רירית למחלות זיהומיות. כולרה היא מחלה הנגרמת על ידי מעי חריף החיידק Vibrio cholerae. זה מתרחש במדינות מתפתחות, ואם אינם מטופל, עלול לגרום למוות. אמנם חיסונים נגד כולרה קיימים, הם לא תמיד יעילים ושיטות מניעות אחרות יש צורך. אנחנו יצאנו כדי לקבוע ריכוזים נסבלים של שלוש חומצות שומן (חומצות אולאית, לינולאית ולינולנית) ושימוש ברעלן הכולרה מקרופאגים BALB / C עכברים ותאי אפיתל במעי אדם, בהתאמה. אנו solubilized את חומצות שומן הנ&quot;ל ומבחנים המשמשים התפשטות תאים כדי לקבוע את טווחי הריכוז וריכוזים מסוימים של חומצות השומן, כי הם לאלא מזיק לכדאיויות תא אפיתל במעי אדם. אנו solubilized רעלן הכולרה והשתמשנו בו בassay כדי לקבוע את טווחי הריכוז וריכוזים מסוימים של רעלן הכולרה שאינם סטטיסטי להקטין כדאיות תא במקרופאגים BALB / C. מצאנו את ריכוזי חומצת השומן האופטימליים להיות בין 1-5 ng / μl, וכי לרעלן הכולרה להיות &lt;30 ng לכל טיפול. נתונים אלה עשויים לסייע למחקרים עתידיים שמטרתם למצוא תפקיד הרירי מגן לחומצות שומן במניעה או הקלה של דלקות כולרה.

קביעת הריכוז האופטימלי של חומצות שומן הריכוז האופטימלי לחומצות שומן מוגדר כריכוז המרבי שבו צמיחת תאים היא דומה או עולה על זו של תאי בקרה, עם שונות נמוכות יחסית בתוצאות. כדי לקבוע את הריכוז האופטימלי של אולאית, טופלו תאי חומצות לינו...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

אנחנו יצאנו כדי לקבוע ריכוזים נסבלים של שלוש חומצות שומן (חומצות אולאית, לינולאית ולינולנית) ורעלן הכולרה שלא באופן משמעותי ולהשפיע לרעה על הישרדות תא על ידי solubilizing את חומצות שומן והרעל והשימוש בהם במבחני הישרדות תא.

נחישות של חומצות שומן נסבלות וריכוזי רעלן הכולרה שימוש בתאי אפיתל במעי אדם ומקרופאגים עכבר BALB / ג

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

יישום של עכבר Ligated מעיים תיקון של Peyer Assay Loop להערכת ספיגת חיידקים על ידי תאים M

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

בידוד ואיפיון של תאים דנדריטים ומקרופגים מהמעי עכבר

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

ויזואליזציה של תגובות מושרות רעלן של חיידקים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי תא החי

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

פלישת חיידקי enteric של תאי אפיתל במעי<em&gt; במבחנה</em&gt; באופן דרמטי משופר תוך שימוש במודל לשכת דיפוזיה אנכי

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

בידוד של תאי מיאלואידית דנדריטים ותאי האפיתל מקורנית האדם

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

באמצעות RNA-התערבות לחקר התגובה החיסונית המולדת בהמקרופאגים עכבר

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

ניתוח Immunofluorescence של גרגר מתח גיבוש לאחר האתגר בקטריאלי של תאים יונקים

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

Saturated Fatty Acids Induce Ceramide-associated Macrophage Cell Death

חומצות שומן רוויות לגרום מוות תאי מקרופאג Ceramide-הקשורים

Macrophages highly express epidermal fatty acid-binding protein and adipose fatty acid-binding protein. They actively uptake saturated and unsaturated ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

העכבר ואת האדם-נגזר תרבות ראשי קיבה אפיתל חד שכבתי לצורך המחקר של התחדשות

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

אינדוקציה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות בעכברי BALB/c לחקר המנגנונים הפתוגניים שלה

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...