Name: determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages
Uploaded: 2013-05-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

Ringraziamo Paula Cobos e il Dr. Evros Vassiliou per l&#39;assistenza di laboratorio e di fornire i macrofagi del mouse, rispettivamente. Ringraziamo anche il nostro laboratorio direttore Richard Criasia per guida e aiuto con i materiali. Infine, gli autori ringraziano Ramanpreet Kaur per un aiuto con la produzione video.

1. Tissue Culture <ol><li> Utilizzare Mus musculus macrofagi (topi BALB / c) per le determinazioni della tossina del colera. Inizialmente cultura tutti M. cellule musculus seguendo le istruzioni del fornitore. </li><li> Propagare BALB / c cellule topi in mezzo di coltura di Dulbecco modificato con L-glutammina completato con 10% di siero fetale bovino e 1% di antibiotici / antimicotici o RPMI 1640 supporti di base completato con 10% di siero fetale bovino, 5% di L-glutammina e 1 % antibiotic...

<ol>
	<li>Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+Acid:+Its+effects+on+stratum+corneum+in+relation+to+(trans)+dermal+drug+delivery.">Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery.</a> Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).</li><li>Tandon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+diffraction+and+spectroscopic+studies+of+oleic+acid-sodium+acetate.">X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate.</a> Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).</li><li>Kris-Etherton, P. 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W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenoleukodystrophy:+dietary+oleic+acid+lowers+hexacosanoate+levels.">Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels.</a> Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).</li><li>Bozan, B., Temelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+oxidative+stability+of+flax,+safflower+and+poppy+seed+and+seed+oil.">Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil.</a> Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).</li><li>Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+benefits+of+conjugated+linoleic+acid+to+3-dimensional+wrinkle+morphology.">Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology.</a> J. 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Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).</li><li>Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pilot+study+of+dietary+fatty+acid+supplementation+in+the+treatment+of+adult+periodontitis.">Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis.</a> Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).</li><li>Ferretti, A., Flanagan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithromboxane+activity+of+dietary+alpha-linolenic+acid:+a+pilot+study.">Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study.</a> Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).</li><li>Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Fatty+Acids+and+Cholesterol+Present+in+Bile+on+Expression+of+Virulence+Factors+and+Motility+of+Vibrio+cholera.">Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera.</a> Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).</li><li>Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+virulence+potential+of+Vibrio+cholerae+by+natural+compounds.">Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds.</a> Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).</li><li>Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+Genetics+of+Vibrio+cholerae+from+Nepal+in+2010:+Evidence+on+the+origin+of+the+Haitian+outbreak.">Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak.</a> mBio. 2 (4), 1-6 (2011).</li><li>Schaeffler, A., Gross, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid-induced+induction+of+Toll-like+receptor-4/nuclear+factor-kappa+B+pathway+in+adipocytes+links+nutritional+signaling+with+innate+immunity.">Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity.</a> Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).</li></ol>

Suggerimento di concentrazione di acidi grassi e di tossina colerica Mentre il meccanismo esatto di come acidi grassi migliorare l&#39;immunità mucosale è sconosciuta, diversi studi hanno tentato di investigare loro effetti benefici. Nostro studio mira a fornire metodologia per determinare la concentrazione massima di acidi grassi che le cellule possono tollerare nonché la concentrazione massima di tossina colerica che le cellule possono tollerare senza una significativa influenza sulla sopr...

I benefici per la salute degli acidi grassi, come ad esempio acido oleico, linoleico e linolenico sono stati e continuano ad essere documentata. Per esempio acido oleico aiuta facilitare la penetrazione dei farmaci lipofili nel 1,2 corpo, riduce la malattia coronarica del 24% quando sostituite acidi grassi saturi 3, ed è usato per trattare malattie metaboliche come Adrenoleukodystrophy 4 che è un X-Linked malattia genetica del metabolismo degli acidi grassi. . Mentre un precursore necessario per l&#39;acido arachidonico nei mammiferi, acido linoleico (a differenza acido oleico) non viene sintetizzata dal corpo e deve essere ottenuto attraverso fonti esterne come dal consumo di semi di lino 5 studi mostrano diversi effetti benefici sulla salute di acido linoleico, quali: proprietà anti-invecchiamento per la pelle; 6 proprietà antinfiammatorie; 7 ridotta proliferazione del colon-retto e della prostata cellule di carcinoma, 8 e la capacità di combattere l&#39;obesità e la promozione of salute cardiovascolare. 9 acido linolenico ha un ruolo nel ridurre l&#39;infiammazione parodontale, trombossano 10 e modulando e prostaciclina biosintesi 11. Arpita 12 ha studiato l&#39;influenza di acidi grassi biliari e del colesterolo su V. espressione di fattori di virulenza e la motilità cholerae s &#39;. Yamasaki 13 indica che l&#39;estratto di metanolo dal peperoncino rosso, e altri composti estratti naturali, può potenzialmente diminuire la produzione della tossina del colera. È concepibile considerare l&#39;uso di prodotti alimentari che sono ricchi di acidi grassi superiori (come semi di lino) nella prevenzione e attenuazione di malattie infettive come il colera, formulando immunità mucosale. Abbiamo condotto indagini per solubilizzare gli acidi grassi e per determinare, mediante saggi di proliferazione cellulare, la massima concentrazione di acidi grassi che le cellule epiteliali intestinali umani possono tollerare senza effetti negativi sulla cevitalità ll. Abbiamo ipotizzato che gli acidi oleico, linoleico e linolenico forniscono un effetto benefico sulla vitalità cellulare a concentrazioni inferiori, ma che a concentrazioni più alte sono tossici per le cellule. Abbiamo anche solubilizzato la tossina del colera e determinata la concentrazione massima di tossina colerica che BALB / C macrofagi mouse possono tollerare senza un significativo decremento della vitalità cellulare. Ipotizziamo un effetto tossico di tossina colerica sulla vitalità cellulare anche a livello molto basso. Il metodo di solubilizzare una tossina del colera e utilizzarlo per determinare l&#39;importo massimo della tossina che le cellule possono tollerare senza una diminuzione significativa nella sopravvivenza fornisce un vantaggio per studi futuri. Per esempio, una combinazione delle metodologie sopra può essere utilizzata per determinare se gli acidi grassi forniscono cellule con l&#39;immunità mucosale contro le infezioni colera. Per quanto a nostra conoscenza, questa metodologia razionale e non è stato esplorato. Noi discuss come i nostri dati preliminari possono essere utilizzati in successive investigazioni per determinare se oleico, linoleico e linolenico fornire cellule con l&#39;immunità mucosale contro l&#39;infezione colera.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cells/Reagent</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Mus musculus macrophages</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC RAW 264.7</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2002</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2115</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal bovine serum </td>
			<td>Bio-west</td>
			<td>S0250</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Antibiotic/antimycotic </td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV3007901</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Human intestinal epithelial cells </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATTC CCL-241</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HybriCare media </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>46-X</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O1008</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linoleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-1376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linolenic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholera toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates</td>
			<td>BD Biosciences </td>
			<td>351172</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software</td>
			<td>Dynex</td>
			<td>91000101</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages

Il ruolo positivo degli acidi grassi per la prevenzione e la riduzione delle malattie non-umani e umani sono stati e continuano ad essere ampiamente documentato. Questi ruoli includono influenze sulle malattie infettive e non infettive tra cui la prevenzione di infiammazione e immunità mucosale a malattie infettive. Il colera è una malattia intestinale acuta causata dal batterio Vibrio cholerae. Essa si verifica nei paesi in via di sviluppo e, se non trattata, può portare alla morte. Mentre esistono vaccini per il colera, non sono sempre efficaci e sono necessari altri metodi preventivi. Ci proponiamo di determinare le concentrazioni tollerabili di tre acidi grassi (acido oleico, linoleico e linolenico) e la tossina del colera che utilizzano rispettivamente topo BALB / C macrofagi e cellule epiteliali intestinali umane. Noi solubilizzato degli acidi grassi sopra e saggi di proliferazione cellulare utilizzati per determinare gli intervalli di concentrazione e concentrazioni specifiche degli acidi grassi che non sonot pregiudizievoli per la vitalità delle cellule epiteliali intestinali umane. Noi solubilizzato tossina del colera e l&#39;ho usato in un test per determinare gli intervalli di concentrazione e concentrazioni specifiche di tossina del colera che non statisticamente diminuire la vitalità cellulare in BALB / C macrofagi. Abbiamo trovato le concentrazioni ottimali di acidi grassi per essere fra 1-5 ng / ml, e che per tossina colerica essere &lt;30 ng per il trattamento. Questi dati possono aiutare i futuri studi che mirano a trovare un ruolo protettivo della mucosa di acidi grassi nella prevenzione o riduzione delle infezioni da colera.

Determinazione della concentrazione ottimale di acidi grassi La concentrazione ottimale di acidi grassi è definito come la concentrazione massima alla quale la crescita cellulare è comparabile o superiore a quello delle cellule di controllo, con relativamente bassa variabilità nei risultati. Per determinare la concentrazione ottimale di oleico, cellule acidi linoleico e linolenico sono state inizialmente trattate con concentrazioni variabili di ciascun acido grasso in grandi incrementi e suc...

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Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

Ci proponiamo di determinare le concentrazioni tollerabili di tre acidi grassi (acido oleico, linoleico e linolenico) e la tossina del colera che non significativamente e influenzare negativamente la sopravvivenza delle cellule solubilizzando gli acidi grassi e le tossine e il loro utilizzo in saggi di sopravvivenza delle cellule.

Determinazione degli acidi grassi tollerabile e Concentrazioni tossina colerica Uso Umano cellule epiteliali intestinali e BALB / c macrofagi del mouse

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

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