Name: determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages
Uploaded: 2013-05-30T13:00:00
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우리는 폴라 Cobos 및 실험실 지원 박사 브로스 Vassiliou을 감사하고 각각 마우스 대 식세포을 제공한다. 우리는 또한 지침 연구실 매니저 리처드 Criasia을 감사하고 재료를 도와줍니다. 마지막으로, 저자는 비디오 제작에 도움을 Ramanpreet의 우르 감사합니다.

1. 조직 문화 <ol><li> 콜레라 독소 결정에 대한 뮤스 musculus 대 식세포 (BALB / C 마우스)를 사용합니다. 처음에는 문화 M.의 공급 업체의 지침에 따라 musculus 세포. </li><li> 10 % 태아 소 혈청 완료 L-글루타민과 Dulbecco의 수정 이글의 중간에 BALB / C 마우스 세포를 전파하고, 1 % 항진균 / 항생제 또는 RPMI 1640 기본 매체는 10 % 태아 소 혈청, 5 %의 L-글루타민, 1로 완료 % 항진균 / 항생...

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	<li>Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+Acid:+Its+effects+on+stratum+corneum+in+relation+to+(trans)+dermal+drug+delivery.">Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery.</a> Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).</li><li>Tandon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+diffraction+and+spectroscopic+studies+of+oleic+acid-sodium+acetate.">X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate.</a> Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).</li><li>Kris-Etherton, P. 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B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+Genetics+of+Vibrio+cholerae+from+Nepal+in+2010:+Evidence+on+the+origin+of+the+Haitian+outbreak.">Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak.</a> mBio. 2 (4), 1-6 (2011).</li><li>Schaeffler, A., Gross, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid-induced+induction+of+Toll-like+receptor-4/nuclear+factor-kappa+B+pathway+in+adipocytes+links+nutritional+signaling+with+innate+immunity.">Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity.</a> Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).</li></ol>

지방산의 농도와 콜레라 독소의 제안 지방산 점막 면역을 강화하는 방법의 정확한 메커니즘은 알 수 있지만, 몇몇 연구들은 유익한 효과를 조사하기 위해 시도했습니다. 우리의 연구는 세포가 세포가 세포의 생존에 큰 영향없이 견딜 수있는뿐만 아니라 콜레라 독소의 최대 농도가 견딜 수있는 지방산의 최대 농도를 결정하는 방법을 제공하는 것을 목표로하고있다. <p class="...

같은 올레산, 리놀레산과 리놀렌산 등의 지방산의 건강 혜택은되고 문서화되는 것을 계속했다. 예를 들어, 올레인산은 몸 1,2 지용성 약물의 침투를 용이하게하는 데 도움이 포화 지방산 3를 대체 할 때 24 %가 관상 동맥 심장 질환을 감소시키고, X-연결되어 같은 Adrenoleukodystrophy 4와 같은 신진 대사 질환을 치료하는 데 사용됩니다 지방산 대사의 유전 질환. . 포유류의 아라키돈 산, 리놀산 (올레인산과는 달리)에 대한 필요한 전구체가 신체에 의해 합성되지 않는 등 아마씨 소비와 같은 외부 소스를 통해 얻을 수 있어야하지만 5 연구에서는 다음과 같은 리놀레산 여러 유익한 건강 효과를 보여 피부를위한 안티 에이징 속성, 6 항 염증, 대장 암과 전립선 암 세포의 7 감소 확산, 8 및 비만을 싸우는 능력 증진 오F 심장 혈관 건강. 9 리놀렌산 치주 염증, 10, 변조 트롬 복산과 프로 스타 사이클린의 생합성을 감소하는 역할을한다. 11 Arpita 12 V.에 담즙 지방산의 영향과 콜레스테롤을 공부 독성 요인과 운동의 콜레라의 식입니다. 야마자키 13 빨강 칠리 페 퍼, 기타 자연적으로 추출 된 화합물의 메탄올 추출물이 잠재적 인 콜레라 독소의 생산을 줄일 수 있다고 지적했다. 그것은 점막 면역을 제공을 통해 콜레라​​와 같은 전염성 질병의 예방과 퇴치를 위의 지방산 (예 : 아마 씨앗 등)이 풍부한 식품의 사용을 고려하는 것이 생각할 수있다. 우리는 세포 증식 분석, 인간 장 상피 세포가 세륨에 해로운 영향없이 견딜 수있는 지방산의 최대 농도를 사용하여 지방산을 용해하고 결정하기 위해 조사를 실시LL 생존. 우리는 올레산, 리놀레산과 리놀렌산은 낮은 농도에서 세포 생존에 유익한 효과를 제공하는 가설을하지만, 높은 농도에서 그들은 세포에 독성이 될 것입니다. 우리는 또한 콜레라 독소를 용해하고 BALB / C 마우스 대 식세포는 세포 생존에 큰 감소없이 견딜 수있는 콜레라 독소의 최대 농도를 결정 하였다. 우리는 심지어 매우 낮은 수준에서 세포 생존에 콜레라 독소의 독성 효과를 가설. 콜레라 독소를 가용화 및 세포 생존에 큰 감소없이 견딜 수있는 독소의 최대 크기를 결정하기 위해 그것을 사용하는 방법은 미래 연구에 대한 이점을 제공합니다. 예를 들어, 위의 방법의 조합은 지방산 콜레라 감염에 대한 점막 면역과 세포를 제공하는지 여부를 확인하는 데 사용할 수 있습니다. 우리가 아는 한,이 합리적이고 방법론은 탐구되지 않았습니다. 우리는 디우리의 예비 데이터는 올레산, 리놀레산과 리놀렌산은 콜레라 감염에 대한 점막 면역과 세포를 제공하는지 확인하기 위해 나중에 조사에서 사용할 수있는 방법을 scuss.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cells/Reagent</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Mus musculus macrophages</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC RAW 264.7</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2002</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2115</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal bovine serum </td>
			<td>Bio-west</td>
			<td>S0250</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Antibiotic/antimycotic </td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV3007901</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Human intestinal epithelial cells </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATTC CCL-241</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HybriCare media </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>46-X</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O1008</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linoleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-1376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linolenic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholera toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates</td>
			<td>BD Biosciences </td>
			<td>351172</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software</td>
			<td>Dynex</td>
			<td>91000101</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages

예방 및 비 - 인간과 인간의 질병의 완화 지방산의 긍정적 인 역할을하고 광범위하게 문서화되는 것을 계속했다. 이러한 역할은 염증의 예방뿐만 아니라 전염성 질병에 점막 면역 등의 전염성 및 비 전염성 질환에 영향을 이용하실 수 있습니다. 콜레라 박테리아 비브리오 콜레라에 의한 급성 장 질환이다. 그것은 개발 도상국에서 발생하고 방치하면 사망을 초래할 수 있습니다. 콜레라 백신은 존재하지만, 그들은 항상 효과적이지 다른 예방 방법이 필요합니다. 우리는 각각 마우스 BALB / C 대식 세포와 인간의 창자 상피 세포를 사용하여 허용 세 가지 지방산의 농도 (올레산, 리놀레산과 리놀렌산)과 콜레라 독소를 결정하기 위해 밖으로 설정합니다. 우리는 농도 범위와 NO 지방산의 특정 농도를 결정하기 위 지방산과 사용 세포 증식 분석을 용해인간의 장 상피 세포의 생존에 해로운 t. 우리는 콜레라 독소를 용해와 농도 범위와 통계적으로 BALB / C 대식 세포의 세포 생존 능력을 감소하지 않는 콜레라 독소의 특정 농도를 결정하기 위해 분석에 사용됩니다. 우리는 최적의 지방산 농도 사이에 1-5 μL / NG, 그 처리 기준 &lt;30 ng를 할 수 콜레라 독소합니다.이 발견 이 데이터는 예방이나 콜레라 감염의 완화 지방산에 대한 보호 점막 역할을 발견하는 것을 목표로 미래의 연구에 도움이 될 수 있습니다.

지방산의 최적 농도의 결정 지방산의 최적 농도는 세포의 성장에 필적하거나 결과 상대적으로 낮은 변동성 제어 세포의를 초과하는 최대 농도로 정의됩니다. 올레의 최적 농도를 결정하기 위해, 리놀레산과 리놀렌산 세포가 처음 큰 단위로 각 지방산의 농도를 변화하고 나중에 작은 단위로 처리 하였다. 그림 1은 세포의 생존을 사용하여 치료에 대한 긍정적 인 제...

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Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

우리는 크게 악영향 지방산과 독소를 가용화 및 세포 생존 분석에서 그들을 사용하여 세포의 생존에 영향을 미치지 않았다 개의 지방산 (올레산 리놀레산과 리놀렌산)과 콜레라 독소의 허용 농도를 결정하기 위해 밖으로 설정합니다.

인간의 장내 상피 세포와 BALB / C 마우스 대 식세포를 사용하여 웬만한 지방산과 콜레라 독소 농도의 결정

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

마우스의 응용은 M 세포에 의해 박테리아 이해를 평가하는 Peyer의 패치 장 루프 분석 출혈도 잡았

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

연구

면역학 및 감염병학

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

마우스 소장에서 돌기 세포 및 Macrophages의 분리 및 특성화

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

라이브 세포 형광 현미경을 사용하여 박테리아 독소 유도 응답의 시각화

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

장 상피 세포의 장내 세균의 침입<em&gt; 체외</em&gt; 크게 수직 확산 챔버 모델을 사용하여 향상

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

인간의 흉선에서 골수 수지상 세포와 상피 세포의 분리

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

마우스 대 식세포의 타고난 면역 반응을 조사하기 위해 RNA 간섭을 사용하여

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

포유류 세포의 박테리아 감염 후 스트레스 과립 형성의 면역 형광 분석

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

Saturated Fatty Acids Induce Ceramide-associated Macrophage Cell Death

포화 지방산은 세 라마 이드 관련 된 대 식 세포 세포 죽음을 유도

Macrophages highly express epidermal fatty acid-binding protein and adipose fatty acid-binding protein. They actively uptake saturated and unsaturated ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

중생의 연구에 대 한 기본 위 상피 단층 문화 마우스 및 인간의 파생

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

병원성 메커니즘 연구를위한 BALB / c 마우스에서 약물 유도,자가 면역 간염의 유도

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...