Name: determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages
Uploaded: 2013-05-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

Biz Paula Cobos ve laboratuar yardım için Dr Evros Vasiliu teşekkür ve sırasıyla fare makrofajlar sağlar. Ayrıca rehberlik için laboratuar yöneticisi Richard Criasia teşekkür ve malzeme ile yardımcı olur. Son olarak, yazarlar video üretimi ile yardım için Ramanpreet Kaur teşekkür ederim.

1. Doku Kültürü <ol><li> Kolera toksini belirlemeleri için Mus musculus makrofajlar (BALB / c fareleri) kullanın. Başlangıçta, her kültür M. satıcının talimatları musculus hücreleri. </li><li> % 10 cenin sığır serumu ile tamamlanmış L-glutamin ile Dulbecco Modifiye Edilmiş Eagle Ortamı içinde BALB / c farenin hücreleri yay, ve% 1 antibiyotik / antimikotik ya da RPMI 1640 baz ortam,% 10 fetal sığır serumu,% 5 L-glutamin ve 1 ile tamamlandı % antibiyotik / antimikot...

<ol>
	<li>Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+Acid:+Its+effects+on+stratum+corneum+in+relation+to+(trans)+dermal+drug+delivery.">Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery.</a> Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).</li><li>Tandon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+diffraction+and+spectroscopic+studies+of+oleic+acid-sodium+acetate.">X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate.</a> Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).</li><li>Kris-Etherton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+debate+about+n-6+polyunsaturated+fatty+acid+recommendations+for+cardiovascular+health.">The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health.</a> Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).</li><li>Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenoleukodystrophy:+dietary+oleic+acid+lowers+hexacosanoate+levels.">Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels.</a> Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).</li><li>Bozan, B., Temelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+oxidative+stability+of+flax,+safflower+and+poppy+seed+and+seed+oil.">Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil.</a> Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).</li><li>Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+benefits+of+conjugated+linoleic+acid+to+3-dimensional+wrinkle+morphology.">Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology.</a> J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).</li><li>Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjugated+linoleic+acid+decreases+production+of+pro-inflammatory+products+in+macrophages:+Evidence+for+a+PPARy+dependent+mechanism.">Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).</li><li>Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-proliferative+effects+of+biologically+active+isomers+of+conjugated+linoleic+acid+on+human+colorectal+and+prostatic+cancer+cells.">The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells.</a> Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).</li><li>Granda, M., Sinclair, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acids+and+obesity.">Fatty acids and obesity.</a> Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).</li><li>Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pilot+study+of+dietary+fatty+acid+supplementation+in+the+treatment+of+adult+periodontitis.">Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis.</a> Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).</li><li>Ferretti, A., Flanagan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithromboxane+activity+of+dietary+alpha-linolenic+acid:+a+pilot+study.">Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study.</a> Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).</li><li>Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Fatty+Acids+and+Cholesterol+Present+in+Bile+on+Expression+of+Virulence+Factors+and+Motility+of+Vibrio+cholera.">Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera.</a> Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).</li><li>Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+virulence+potential+of+Vibrio+cholerae+by+natural+compounds.">Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds.</a> Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).</li><li>Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+Genetics+of+Vibrio+cholerae+from+Nepal+in+2010:+Evidence+on+the+origin+of+the+Haitian+outbreak.">Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak.</a> mBio. 2 (4), 1-6 (2011).</li><li>Schaeffler, A., Gross, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid-induced+induction+of+Toll-like+receptor-4/nuclear+factor-kappa+B+pathway+in+adipocytes+links+nutritional+signaling+with+innate+immunity.">Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity.</a> Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).</li></ol>

Yağ asitleri konsantrasyonu ve Kolera Toksin önerisi Yağ asitleri mukozal bağışıklık geliştirmek nasıl mekanizması tam olarak bilinmemekle birlikte, çeşitli çalışmalar, yararlı etkileri araştırmak için çalıştılar. Çalışmamız hücreler hücre sağkalım üzerinde önemli bir etkisi olmadan tolere ki de kolera toksin maksimum konsantrasyon olarak tolere olabilir yağ asitlerinin maksimum konsantrasyonunu belirlemek için yöntem sağlamayı amaçlamaktadır. <p cla...

Oleik, linoleik ve linolenik asitler gibi yağ asitleri, sağlık yararları olmuştur ve belgelendirilmesi devam ediyor. Örneğin, oleik asit, vücut 1,2 lipofilik ilaçların penetrasyonu kolaylaştırır yardımcı doymuş yağ asitleri 3 yerine% 24 oranında azaltır, koroner kalp hastalığı, ve X,-bağlı böyle adrenolökodistrofi 4 gibi metabolizma hastalıkları tedavi etmek için kullanılır yağ asidi metabolizmasının genetik bozukluk. . Memelilerde araşidonik asit, linoleik asit (oleik asit aksine) için gerekli bir öncü vücut tarafından sentezlenir değildir ve bu keten tohumu tüketimi gibi dış kaynaklardan elde edilmelidir ise 5 Çalışmaları gibi linoleik asit birçok yararlı sağlık etkileri gösterir: cilt için anti-aging özellikleri, 6 anti-inflamatuar özellikleri, kolorektal ve prostat kanseri hücreleri 7 azaltılmış çoğalması, 8 ve obezite mücadele yeteneği ve promosyon of kalp-damar sağlığı. 9 linolenik asit, periodontal iltihabı, 10 ve modüle tromboksan ve prostasiklin biyosentezi azaltılmasında rol oynamaktadır. 11 Arpita 12 V. üzerinde safra yağ asitlerinin etkisi ve kolesterol okudu virülans faktörleri ve motilite cholerae &#39;nin ifadesi. Yamasaki 13 kırmızı acı biber, ve diğer doğal çıkarılan bileşikler, metanol özü potansiyel kolera toksin üretimini azaltır belirtti. Bu mukozal bağışıklık sağlayarak kolera gibi bulaşıcı hastalıkların önlenmesi ve azaltılması, yukarıda yağ asitleri (örneğin, keten tohumu gibi) bakımından zengin olan gıda ürünlerinin kullanımını dikkate almak düşünülebilir. Bu hücre çoğalma deneyleri, insan bağırsak epitel hücreleri Ce üzerinde zararlı etkiler olmadan tolere yağ asitlerinin en fazla konsantrasyonu kullanılarak, yağ asitleri çözünür hale getirmek için ve belirlemek için yapılan araştırmalarll canlılığı. Biz, oleik, linoleik ve linolenik asit daha düşük konsantrasyonlarda hücre canlılığı üzerinde yararlı bir etki sağlamak varsayıldı fakat daha yüksek konsantrasyonlarda bu hücreleri için toksik olacaktır. Ayrıca, kolera toksini ile çözülür ve BALB / C fare makrofaj hücre canlılığını önemli bir azalma olmadan tolere kolera toksin maksimum konsantrasyonu belirlenmiştir. Hatta çok düşük seviyede hücre canlılığı üzerine kolera toksin bir toksik etkisi hipotez. Bir kolera toksin çözündürülmesi ve hücrelerin hayatta kalma önemli bir azalma olmadan tolere edilebileceği toksin miktarının saptanması için kullanılma yöntemi, ileri çalışmalar için bir avantaj sağlar. Örneğin, yukarıdaki yöntemlerin bir arada yağ asitleri kolera enfeksiyonlara karşı mukozal bağışıklık ile ilgili hücre sağlamak olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir. Bildiğimiz kadarıyla en iyi için, bu rasyonel ve metodoloji araştırılmış değildir. Biz diBizim ön verilere oleik, linoleik ve linolenik asit kolera enfeksiyona karşı mukozal bağışıklık hücreleri sağlamak olmadığını belirlemek için daha sonra araştırmalarda kullanılabilir nasıl scuss.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cells/Reagent</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Mus musculus macrophages</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC RAW 264.7</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2002</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2115</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal bovine serum </td>
			<td>Bio-west</td>
			<td>S0250</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Antibiotic/antimycotic </td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV3007901</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Human intestinal epithelial cells </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATTC CCL-241</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HybriCare media </td>
			<td>ATCC</td>
			<td>46-X</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O1008</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linoleic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-1376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Linolenic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2376</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholera toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates</td>
			<td>BD Biosciences </td>
			<td>351172</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software</td>
			<td>Dynex</td>
			<td>91000101</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

determination of tolerable fatty acids and cholera toxin concentrations using human intestinal epithelial cells and balb/c mouse macrophages

Önlenmesi ve insan olmayan ve insan hastalıklarının hafifletilmesi yağ asitlerinin olumlu rol oynamaktadır ve yaygın belgelenmelidir devam etmektedir. Bu roller iltihabı önlenmesi hem de bulaşıcı hastalıklara mukozal bağışıklık dahil olmak üzere bulaşıcı ve bulaşıcı olmayan hastalıklar etkiler içerir. Kolera bakterisi Vibrio cholerae neden olduğu akut bağırsak hastalıktır. Bu gelişmekte olan ülkelerde ortaya çıkar ve eğer tedavi edilmezse, ölümle sonuçlanabilir. Kolera için aşı mevcut olmakla birlikte, her zaman etkili değildir ve diğer önleyici yöntemlere ihtiyaç vardır. Biz sırasıyla fare BALB / C makrofajlar ve insan bağırsak epitel hücreleri kullanarak tolere üç yağ asitleri konsantrasyonları (oleik, linoleik ve linolenik asit) ve kolera toksin belirlemek için yola çıktı. Bu konsantrasyon aralıkları ve hiçbir olan yağ asitlerinin belirli bir konsantrasyonlarını belirlemek için, yukarıda bulunan yağ asitleri ve kullanılan hücre çoğalma deneyleri çözündürülmüşİnsan bağırsak epitel hücre canlılığı için zararlı t. Biz, kolera toksini ile çözülür ve konsantrasyon aralıkları ve istatistiksel BALB / C makrofaj hücre canlılığı azalma yok kolera toksin belirli konsantrasyonlarda tespit etmek için bir ölçüm içinde kullanılabilir. Bu optimum yağ asidi konsantrasyonları arasında 1-5 ng / ml, ve bu tedavi için &lt;30 ng olması kolera toksininin. Olduğu bulundu Bu veri önlenmesi veya kolera enfeksiyonların azaltılması yağ asitleri için koruyucu mukozal rol bulmak amacı ileride yapılacak çalışmalar yardımcı olabilir.

Yağ Asitleri Optimum Konsantrasyon belirlenmesi Yağ asitleri için optimum konsantrasyon hücre büyümesi ile karşılaştırılabilir ya da sonuç olarak nispeten düşük bir değişkenlik, kontrol hücreleri bu aştığı maksimum konsantrasyon olarak tanımlanır. Oleik optimum yoğunluğunu belirlemek için, linoleik ve linolenik asit hücreler başlangıçta büyük artışlarla her yağ asidi konsantrasyonlarının değiştirilmesi ve daha sonra daha küçük artımlarla ile muamele e...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages at JoVE.com

Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

Biz önemli ölçüde ve olumsuz yağ asitleri ve toksin çözücü ve hücre yaşam deneyleri bunları kullanarak hücre yaşamını etkilemedi üç yağ asitleri (oleik linoleik ve linolenik asit) ve kolera toksin tolere konsantrasyonlarını belirlemek için yola çıktı.

İnsan Bağırsak Epitel Hücreleri ve BALB / c Fare makrofajlar kullanarak Tolere edilebilir yağ asitleri ve Kolera Toksin Konsantrasyonları belirlenmesi

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Fare Uygulama M hücreleri tarafından Bakteriyel Alımı değerlendirin Peyer Patch Bağırsak Loop Testi bağlandı

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Fare Barsak ayrı dendritik hücreler ve makrofajlar İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Visualization of Bacterial Toxin Induced Responses Using Live Cell Fluorescence Microscopy

Canlı Hücre Floresan Mikroskopi kullanma Bakteriyel Toksin İsteyerek Yanıtların Görselleştirme

Bacterial toxins bind to cholesterol in membranes, forming pores that allow for leakage of cellular contents and influx of materials from the external ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Bağırsak Epitel Hücreleri Of Enterik Bakteriyel Invasion<em&gt; In Vitro</em&gt; Dramatik bir Dikey Difüzyon Odası Modeli Geliştirilmiş mı

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

İnsan Thymus ile myeloid dendritik hücreleri ve epitel hücreleri İzolasyonu

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Fare Makrofagların yılında Doğuştan Bağışıklık Tepkisi Soruşturma RNA girişimi kullanma

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

Memeli Hücrelerinin Bakteri Mücadelesinden Sonra Stres Granül Oluşumunun İmmünofloresan Analizi

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

Saturated Fatty Acids Induce Ceramide-associated Macrophage Cell Death

Doymuş yağ asitleri Ceramide ilişkili makrofaj hücre ölümüne neden

Macrophages highly express epidermal fatty acid-binding protein and adipose fatty acid-binding protein. They actively uptake saturated and unsaturated ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

Fare ve insan elde edilen birincil Gastrik epitel Monolayer kültür yenilenme çalışmaları için

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

Patojenik Mekanizmalarının İncelenmesi için BALB/c Farelerde İlaca Bağlı, Otoimmün Hepatitin İndüklenmesi

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...