Name: cell death associated with abnormal mitosis observed by confocal imaging in live cancer cells
Uploaded: 2013-08-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cell Death Associated with Abnormal Mitosis Observed by Confocal Imaging in Live Cancer Cells at JoVE.com

Bu araştırmanın finansman kaynakları: Tel Aviv Üniversitesi teknoloji transferi şirketi, Ramot ve Sheba-Tıp Merkezi (M. CA ve SI.), ICRF ortak bir fon - İsrail Kanser Araştırma Vakfı (M. CA.) Ve İsrail bilim Vakfı ( SI).

1. Hücre Kültürü hazırlanması MDA-MB-231 hücreleri, ATCC (American Type Culture Collection) satın alındı ​​ve sıvı azot içinde saklandı. <ol><li> Dulbeco Modifiye Edilmiş Eagle Ortamı (DMEM),% 10 at serumu,% 1 L-glutamin ve% 1 Penstrep-Amfoterisin B içeren 10 ml tam ortam içinde 92 mm çapında Petri kabındaki Tohum 10 6, MDA-MB-231 hücrelerinin hücre Veren 80-100 yaklaşık% izdiham çoğalmaya. </li><li> Çanak kültür ortamı çıkarın ve a...

<ol>
	<li>Jagtap, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+phananthridine+inhibitors+of+poly(adenosine+5'-diphosphate-ribose)+synthetase:+Potent+cytoprotective+and+antishock+agents.">Novel phananthridine inhibitors of poly(adenosine 5'-diphosphate-ribose) synthetase: Potent cytoprotective and antishock agents.</a> Crit. Care Med. 30, 1071-1082 (2002).</li><li>Castiel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+molecule+exclusively+eradicates+human+cancer+cells:+Extra-centrosomes+de-clustering+agent.">A small molecule exclusively eradicates human cancer cells: Extra-centrosomes de-clustering agent.</a> BMC Cancer. 11 (1), 412 (2011).</li><li>Inbar-Rozensal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+selective+eradication+of+human+nonhereditary+breast+cancer+cells+by+phenanthridine+-derived+polyADP-ribose+polymerase+inhibitors.">A selective eradication of human nonhereditary breast cancer cells by phenanthridine -derived polyADP-ribose polymerase inhibitors.</a> Breast Cancer Res. 11 (6), R78 (2009).</li><li>Gergely, F., Basto, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+centrosomes:+together+they+stand,+divided+they+fall.">Multiple centrosomes: together they stand, divided they fall.</a> Genes Dev. 22, 2291-2296 (2008).</li><li>Godinho, S. A., Kwon, M., Pellman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrosomes+and+cancer:+how+cancer+cells+divide+with+too+many+centrosomes.">Centrosomes and cancer: how cancer cells divide with too many centrosomes.</a> Canc. Met. Rev. 28, 85-98 (2009).</li><li>Doxsey, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-evaluating+centrosome+function.">Re-evaluating centrosome function.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2, 688-698 (2001).</li><li>Walczak, C. E., Heald, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+mitotic+spindle+assembly+and+function.">Mechanisms of mitotic spindle assembly and function.</a> International Rev. of Cytology. 265, 111-158 (2008).</li><li>Ogden, A., Rida, P. C. G., Aneja, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Let's+huddle+to+prevent+a+muddle:+centrosome+declustering+as+an+attractive+anticancer+strategy.">Let's huddle to prevent a muddle: centrosome declustering as an attractive anticancer strategy.</a> Cell Death Differ. 19, 1255-1267 (2012).</li><li>Kramer, A., Anderhub, S., Maier, B., Schatten, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+Consequences+of+centrosomes+clustering+in+cancer+cells.">Mechanisms and Consequences of centrosomes clustering in cancer cells.</a> The Centrosome: Cell and Molecular mechanisms of functions and disfunctions in disease. , 255-277 (2012).</li><li>Galimberti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaphase+Catastrophe+Is+a+Target+for+Cancer+Therapy.">Anaphase Catastrophe Is a Target for Cancer Therapy.</a> Clin. Cancer Res. 17, 1218-1222 (2011).</li><li>Kanai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haploinsufficiency+of+poly(ADP-ribose)+polymerase-1-mediated+poly(ADP-ribosyl)ation+for+centrosome+duplication.">Haploinsufficiency of poly(ADP-ribose) polymerase-1-mediated poly(ADP-ribosyl)ation for centrosome duplication.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 359, 426-430 (2007).</li><li>Gartner, E. M., Burger, A. M., Lorusso, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(ADP-ribose)+polymerase+inhibitors:+a+novel+drug+class+with+a+promising+future.">Poly(ADP-ribose) polymerase inhibitors: a novel drug class with a promising future.</a> Cancer J. 16, 83-90 (2010).</li><li>Wahlberg, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Family-wide+chemical+profiling+and+structural+analysis+of+PARP+and+tankyrase+inhibitors.">Family-wide chemical profiling and structural analysis of PARP and tankyrase inhibitors.</a> Nature Biotechnology. 30, 283-288 (2012).</li><li>Rouleau, M., Patel, A., Hendze, M. J., Kaufmann, S. H., Poirier, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PARP+inhibition:+PARP1+and+beyond.">PARP inhibition: PARP1 and beyond.</a> Nature Rev. Cancer. 10, 293-301 (2010).</li><li>Leber, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteins+Required+for+Centrosome+Clustering+in+Cancer+Cells.">Proteins Required for Centrosome Clustering in Cancer Cells.</a> Sci. Transl. Med. 2 (33), 33-38 (2010).</li><li>Kwon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+to+suppress+multipolar+division+in+cancer+cells+with+extra+centrosomes.">Mechanisms to suppress multipolar division in cancer cells with extra centrosomes.</a> Gene Dev. 22, 2189-2203 (2008).</li></ol>

Konfokal görüntüleme mitoz sırasında canlı çok centrosomal hücreleri (Şekil 3 ve Ek bilgileri) PJ-34 sitotoksik etkisinin gerçek zamanlı belgeler temin yaşıyor. Bu PJ-34 5-9 Mitotik Afet hücre ölümünün indüksiyon düşündüren, ekstra centrosomes de-kümeleme ve hücre ölümüne insan kanser hücrelerinde PJ-34 sitotoksisite atfederek ilk canlı belgelerine oldu. Bunun aksine, süper numerary sentrozom iki odak kümeleme iki focali kümelenmiş ilave sentrozom (Ş...

Fenantren, PJ-34 de dahil olmak üzere PARP1 inhibitörleri, elde edilen stres koşulları (inme ya da miyokard infarktüsü) 1 altında enerji tüketen PARP1 aracılı DNA-onarım ile oluşturulan apoptotik hücre ölüm pasif hücreleri korumak için tasarlanmıştır. Ancak, son zamanlarda biz PJ-34, bu uyaran PARP1 inhibe göre iki kat daha yüksek konsantrasyonda, sadece insan kanser hücrelerinin 2,3 hücre ölümüne neden olabilir keşfetti. Hücrenin daha hızlı yayılması olduğu, hücrelerin daha verimli ortadan kaldırılması oldu. PJ-34 sitotoksik aktivite ekstra centrosomes mitoz 2 de-kümeleme bağlandı. Birçok insan kanser hücreleri liman 4,5 multicentrosomes. Etkili bir mitoz iki sentrozom barındıran hareketsiz hücreler ya da iyi huylu proliferatif hücrelerin zarar vermeden 72-96 saat içinde, bu hücrelerin ortadan 20 uM PJ-34 ile supernümere sentrozom liman insan meme kanseri hücreleri, MDA-MB-231, inkübasyonu <sup&gt; 2,3. İyi huylu hücrelerin insan timus hazırlanan MCF-10, insan meme epitelyal hücreleri, insan endotelyal hücreleri (HUVEC) ve primer mezenkimal hücreler dahildir. Bu hücreler, PJ-34 sitotoksik aktivitesi dirençli bulunmuştur. PJ-34 96 saat inkübasyon sırasında kendi cep döngüsü müdahale ya da centrosomes ve iki odak milli oluşumu 2,3 etkilemedi. Bipolar centrosome montaj mitoz 4,5 bipolar mili oluşumu için çok önemlidir. Bu nedenle, ikiden fazla centrosomes ile hücre iki kutup 4-9 kendi ekstra centrosomes kümeleme, bir güçlükle anlaşılan moleküler mekanizması geliştirdik. Kendi centrosomes bipolar montaj hatası tutuklamalar G2 / M tutuklama hücre döngüsü ve hücre ölümüne yol açan 4,5 mitotik başarısızlığı bu çok kutuplu bozuk iğ ve anormal kromozomlar ayrışmaya neden olabilir. Ekstra centrosomes de-kümeleme altında yatan moleküler mekanizmalar yoğun incelenmiştir &lt;&gt; 10 destek. Sağlıklı dokuları 5,10 korurken bu ölüm mekanizması anlamak kanser hücrelerinin özel ortadan kaldırılması sağlayacaktır. Bu nedenle, mitotik felaket hücre ölümü geçiren bileşiklerin konfokal görüntüleme İlave sentrozom kümeleme etkileyen molekülleri tanımlamak için kullanılabileceğini göstermektedir, insan katı cancers.Our sonuç geniş etkili olabileceği seçici bir kanser tedavisinde yeni bir mod, teklif mitoz 2,3, ilaç adayları hedef bu bileşiklerin kanser render. Biz sabit ve canlı insan kanser hücreleri (mitoz ekstra-centrosomes yüksek çıkması ile) karşı normal hücreler tarayarak fenantridin PJ-34 sitotoksik aktivite belgeledi. Bir adım insan kanser hücrelerinde PJ-34 sitotoksik aktivitesini tanımlamak için kullanılan görüntüleme yöntemleri adım açıklama aşağıda yer almaktadır.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Invitrogen (GIBCO)</td>
			<td>41965</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal bovine Serum)</td>
			<td>Invitrogen (GIBCO)</td>
			<td>12657</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen-Strep-Ampho solution</td>
			<td>Biological Industries, Israel</td>
			<td>03-033-1B</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Invitrogen (GIBCO)</td>
			<td>25030-024</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% Tripsin-EDTA</td>
			<td>Invitrogen (GIBCO)</td>
			<td>25200</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>92 mm Petri dishes</td>
			<td>Nunc,Thermo scientific</td>
			<td>150350</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm poly-D-lysine coated glass bottom culture dishes</td>
			<td>MatTek Corporation, USA</td>
			<td>P35GC-0-14-C</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luminescent ATP detection assay kit</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab113849</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NDS (Normal Donkey Serum)</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti &alpha;-tubulin antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9026</td>
			<td>1:250 dilution (IF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti &gamma;-tubulin antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5192</td>
			<td>1:200 dilution (IF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Goat Anti-Mouse IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11017</td>
			<td>1:1,000 dilution (IF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 Donkey Anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-10042</td>
			<td>1:1,000 dilution (IF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold antifade reagent with DAPI (mounting)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36935</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JetPEI (liposomal transfection reagent )</td>
			<td>Polyplus</td>
			<td>101-10</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica (Mannheim, Germany)</td>
			<td>TCS SP5II</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cell death associated with abnormal mitosis observed by confocal imaging in live cancer cells

Güçlü PARP1 inhibitörleri olarak hareket fenantren türevleri mitoz çoklu-centrosomal insan kanser hücrelerinde Sürnümerer centrosomes en iki odak kümeleme engelledi. Fenantridin PJ-34 molekülü en güçlü idi. İlave sentrozom Declustering çoklu centrosomal hücrelerindeki mitotik yetmezliği ve hücre ölümüne neden olur. En katı insan kanser ekstra centrosomes yüksek olay var. PJ-34 aktivitesi canlı bir insan meme kanseri sentrozom oldukça bol olduğu floresan γ-tubulin kodlayan vektörler ve floresan histon H2b mevcut için transfekte edilmiş MDA-MB-231 hücrelerinin konfokal görüntüleme ile gerçek zamanlı olarak belgelenmiştir kromozomlar. Anormal kromozomlar düzenlemeler ve declustered centrosomes temsil eden de-kümelenmiş γ-tubulin odakları PJ-34 ile tedavi sonrası transfekte MDA-MB-231 hücrelerinde tespit edildi. Iki mil kutuplarda un-kümelenmiş ekstra centrosomes kendi hücre ölümü öncesinde. Bu sonuçlar, FO bağlantılıR, ilk kez İlave sentrozom mitoz de-kümeleme ve hücre ölümüne yol açan mitotik yetmezliği olan insan kanser hücreleri, PJ-34 arasında en son tespit edilen özel sitotoksik aktivitesi. Iki centrosomes ve iki odak iğ ile mitoz geçiren normal hücrelere zarar vermeden sabit hücreler, çok centrosomes ile PJ-34 özel ortadan kanser hücrelerinin konfokal görüntüleme tarafından gözlemlenen önceki bulgulara göre. PJ-34 Bu sitotoksik aktivite diğer güçlü PARP1 inhibitörleri tarafından paylaşılan değildi ve PARP1 inhibisyon bağımsızlığını düşündüren, PARP1 eksik MEF barındıran extracentrosomes gözlendi. Konfokal görüntüleme Canlı mitoz sırasında hücrelerin ortadan kaldırılması yeni moleküller belirlenmesi için yararlı bir araç sundu.

PJ-fenantridin 34 1 çözelti, kararlı suda (Şekil 1). Daha önceki sonuçlar hücre ölümünü ortaya ve PJ-34 ile tedavi edilen sabit çoklu centrosomal kanser hücrelerinin çeşitli ekstra-sentrozom de kümelenmiş. Aksine, normal hızla çoğalan hücrelerde 2,3 etkilenmedi. Centrosomes sabit ekstra centrosomal hücreleri 2 centrine1 ve γ-tubulin karşı antikor çift etiketleme tarafından tespit edilmiştir. Burada, PJ-34 sitotoksi...

Watch this Scientific Journal Video about Cell Death Associated with Abnormal Mitosis Observed by Confocal Imaging in Live Cancer Cells at JoVE.com

Cell Death Associated with Abnormal Mitosis Observed by Confocal Imaging in Live Cancer Cells

Mitoz geçiren kanser hücrelerinde fenantridin PJ-34 sitotoksik aktivite canlı konfokal görüntüleme ile gerçek zamanlı olarak belgelenmiştir. PJ-34 eradike insan meme kanseri MDA-MB-231 mitoz İlave sentrozom barındıran hücreler. Normal iki odak mitoz farklı olarak, ekstra-sentrozom PJ-34 varlığında iki kutup mili kümelenmiş değildi.

Anormal Mitoz ile İlişkili Hücre Ölümü Canlı Kanser Hücreleri Konfokal Görüntüleme Uyacakları

Phenanthrene derivatives acting as potent PARP1 inhibitors prevented the bi-focal clustering of supernumerary centrosomes in multi-centrosomal human ...

Research

JoVE Journal

Medicine

High-Efficiency Transduction of Liver Cancer Cells by Recombinant Adeno-Associated Virus Serotype 3 Vectors

Rekombinant Adeno Associated Virus serotip 3 Vektörler Karaciğer Kanseri Hücreleri Yüksek Verimlilik İletimi

Recombinant vectors based on a non-pathogenic human parvovirus, the adeno-associated virus 2 (AAV2) have been developed, and are currently in use in a ...

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Ex Vivo Enfeksiyon Oncolytic Virüsler Canlı Doku

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Evaluation of Cancer Stem Cell Migration Using Compartmentalizing Microfluidic Devices and Live Cell Imaging

Bölümlere Mikroakışkan Cihazlar ve Canlı Hücre Görüntüleme kullanma Kanser Kök Hücre Göç Değerlendirilmesi

In the last 40 years, the United States invested over 200 billion dollars on cancer research, resulting in only a 5% decrease in death rate. A major ...

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

Tümör 4D Canlı hücre Görüntüleme için MAME Modeller: Mikroçevre etkileşimler olduğunu Etki Malign İlerlemesi

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Azoxymethane (AOM) ve Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) ile Modelleme Kolit-İlişkili Kanser

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

Meme Kanseri Fare Modelleri Tümör Mikroçevre İlaç Yanıtlarının Görüntüleme Canlı

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

A Multiplexed Luciferase-based Screening Platform for Interrogating Cancer-associated Signal Transduction in Cultured Cells

Kültür Hücreler Kanser ile ilişkili Sinyal İletimi sorgulanması için bir Multiplexed Lusiferaz tabanlı Tarama Platformu

Genome-scale interrogation of gene function using RNA interference (RNAi)  holds tremendous promise for the rapid identification of chemically tractable  ...

Assessing Phagocytic Clearance of Cell Death in Experimental Stroke by Ligatable Fluorescent Probes

Ligatable Floresan Sondalar Deneysel İnme Hücre Ölümü Fagositik Gümrükleme Değerlendirilmesi

We describe a new histochemical approach for visualization of phagocytic clearance in focal brain ischemia. The approach permits the study of elimination ...

Profiling of Estrogen-regulated MicroRNAs in Breast Cancer Cells

Meme Kanseri Hücrelerinde östrojen düzenlenmiş microRNA profil

Estrogen plays vital roles in mammary gland development and breast cancer progression. It mediates its function by binding to and activating the estrogen ...