Name: quantification of the respiratory burst response as an indicator of innate immune health in zebrafish
Uploaded: 2013-09-12T16:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish at JoVE.com

Författarna vill tacka för tidigare och nuvarande medlemmar av Kim laboratoriet, Mark Nilan för zebrafisk vård och underhåll, Dr Robert Wheeler för bra diskussioner och datadelning, och NIH bidrag 3RO1GM087308-02S1 och 1P20RR024475-01A2 och Maine Jordbruks-och skogs Experiment Station (publikationsnummer 3303) för finansiering.

1. Zebrafish Skötsel och underhåll <ol><li> Uppfödnings: Mass spawn vuxna zebrafisk, såsom tidigare beskrivits 13. Samla spawned embryon som tidigare beskrivits 14. </li><li> Mikroinjektion (om så önskas): mikroinjicera 1-4 cell skede zebrafisk embryon med morpholino oligonukleotider att knockdown genprodukter eller mRNA för att överuttrycker genprodukter som tidigare beskrivits 15. <ol><li> Upprätthålla en tillräcklig pool av mock injicerade kontroller (minst 48 levande, h?...

<ol>
	<li>Medzhitov, R., Janeway, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Immunity:+Impact+on+the+Adaptive+Immune+Response.">Innate Immunity: Impact on the Adaptive Immune Response.</a> Current Opinion in Immunology. 9, 4-9 (1997).</li><li>Lam, S. H., Chua, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+Maturation+of+the+Immune+System+in+Zebrafish,+Danio+rerio:+A+Gene+expression+Profiling.">Development and Maturation of the Immune System in Zebrafish, Danio rerio: A Gene expression Profiling.</a> In Situ Hybridization and Immunological. 28, 9-28 (2004).</li><li>Stockhammer, O. W., Zakrzewska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+Profiling+and+Functional+Analyses+of+the+Zebrafish+Embryonic+Innate+Immune+Response+to+Salmonella+Infection.">Transcriptome Profiling and Functional Analyses of the Zebrafish Embryonic Innate Immune Response to Salmonella Infection.</a> J Immunol. 9. 9, 5641-5653 (2009).</li><li>Ordas, A., Hegedus, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+Sequencing+of+the+Innate+Immune+Transcriptomic+Response+of+Zebrafish+Embryos+to+Salmonella+Infection.">Deep Sequencing of the Innate Immune Transcriptomic Response of Zebrafish Embryos to Salmonella Infection.</a> Fish &amp; Shellfish Immunology. 31, 716-724 (2011).</li><li>Renshaw, S. A., Loynes, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Transgenic+Zebrafish+Model+of+Neutrophilic+Inflammation.">A Transgenic Zebrafish Model of Neutrophilic Inflammation.</a> Blood. 13, 3976-3978 (2006).</li><li>Mathias, J. R., Perrin, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+of+Inflammation+by+Retrograde+Chemotaxis+of+Neutrophils+in+Transgenic+Zebrafish.">Resolution of Inflammation by Retrograde Chemotaxis of Neutrophils in Transgenic Zebrafish.</a> J. Leukoc. Biol. 6, 1281-1288 (2006).</li><li>Ellett, F., Pase, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mpeg1+Promoter+Transgenes+Direct+Macrophage-Lineage+Expression+in+Zebrafish.">mpeg1 Promoter Transgenes Direct Macrophage-Lineage Expression in Zebrafish.</a> Blood. 4, 56-56 (2011).</li><li>Phennicie, R. T., Sullivan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+Resistance+to+Pseudomonas+aeruginosa+Infection+in+Zebrafish+is+Mediated+by+the+Cystic+Fibrosis+Transmembrane+Conductance+Regulator.">Specific Resistance to Pseudomonas aeruginosa Infection in Zebrafish is Mediated by the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator.</a> Infect. Immun. 11, 4542 (2010).</li><li>Brothers, K. M., Newman, Z. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Disseminated+Candidiasis+in+Zebrafish+Reveals+Role+of+Phagocyte+Oxidase+in+Limiting+Filamentous+Growth.">Live Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Reveals Role of Phagocyte Oxidase in Limiting Filamentous Growth.</a> Eukaryotic Cell. 7, 932-944 (2011).</li><li>Rotman, J., van Gils, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Screening+of+Innate+Immune+Gene+Expression+in+Zebrafish+using+Reverse+Transcription+-+Multiplex+Ligation-Dependent+Probe+Amplification.">Rapid Screening of Innate Immune Gene Expression in Zebrafish using Reverse Transcription - Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification.</a> BMC Research Notes. 4, (2011).</li><li>d'Alencon, C. A., Pena, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+High-Throughput+Chemically+Induced+Inflammation+Assay+in+Zebrafish.">A High-Throughput Chemically Induced Inflammation Assay in Zebrafish.</a> BMC Biology. 8, 151 (2010).</li><li>Hermann, A. C., Millard, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+Respiratory+Burst+Assay+using+Zebrafish+Kidneys+and+Embryos.">Development of a Respiratory Burst Assay using Zebrafish Kidneys and Embryos.</a> Journal of Immunological Methods. 292, 119-129 (2004).</li><li>Avdesh, A., Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+Care+and+Maintenance+of+a+Zebrafish+(Danio+rerio)+Laboratory:+An+Introduction.">Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction.</a> J. Vis. Exp. (69), e4196 (2012).</li><li>Brothers, K. M., Wheeler, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+Imaging+of+Disseminated+Candidiasis+in+Zebrafish+Larvae.">Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae.</a> J. Vis. Exp. (65), e4051 (2012).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+Morpholino+Antisense+Oligonucleotides+in+Zebrafish+Embryos.">Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.</a> J. Vis. Exp. (27), e1113 (2009).</li><li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+the+Adult+Zebrafish+Kidney.">Dissection of the Adult Zebrafish Kidney.</a> J. Vis. Exp. (54), e2839 (2011).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Organs+from+the+Adult+Zebrafish.">Dissection of Organs from the Adult Zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (37), e1717 (2010).</li><li>Le Guyader, D., Redd, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+Unconventional+Behavior+of+Neutrophils+in+Developing+Zebrafish.">Origins and Unconventional Behavior of Neutrophils in Developing Zebrafish.</a> Blood. 111, 132-141 (2008).</li><li>Davidson, A. J., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'Definitive'+(and+'Primitive')+Guide+to+Zebrafish+Hematopoiesis.">The 'Definitive' (and 'Primitive') Guide to Zebrafish Hematopoiesis.</a> Oncogene. 23, 7233-7246 (2004).</li><li>Jovanovic, B., Goetz, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+Stimuli+Change+Expression+of+Genes+and+Neutrophil+Function+in+Fathead+Minnow+Pimephales+promelas+Rafinesque.">Immunological Stimuli Change Expression of Genes and Neutrophil Function in Fathead Minnow Pimephales promelas Rafinesque.</a> Journal of Fish Biology. 78, 1054-1072 (2011).</li><li>Niethammer, P., Grabher, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Tissue-Scale+Gradient+of+Hydrogen+Peroxide+Mediates+Rapid+Wound+Detection+in+Zebrafish.">A Tissue-Scale Gradient of Hydrogen Peroxide Mediates Rapid Wound Detection in Zebrafish.</a> Nature. 459, 996-1000 (2009).</li><li>Thisse, B., Pflumio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+zebrafish+genome+during+embryogenesis.+(NIH+R01+RR15402).">Expression of the zebrafish genome during embryogenesis. (NIH R01 RR15402).</a> ZFIN Direct Data Submission. , (2001).</li><li>Thisse, B., Thisse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+Release+Clones:+A+High+Throughput+Expression+Analysis.">Fast Release Clones: A High Throughput Expression Analysis.</a> ZFIN Direct Data Submission. , (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Table+18.4.">Table 18.4.</a> The Molecular Probes Handbook. , .</li></ol>

Den primära uppgiften för fagocyter är att upptäcka, uppsluka, och förstöra patogener. Förmågan hos fagocyter att producera en tillräcklig respiratory burst är kritisk för denna funktion. Således är kvantifiering av respiratory burst svar en metod för att möjliggöra jämförelser av allmänna medfödda immun hälsa och funktion mellan grupper av individer och / eller som svar på experimentella manipulationer. Här beskriver vi ett protokoll för att framkalla, kvantifiera och jämföra den respiratory b...

Immunförsvaret består av två grenar: medfödd och adaptiv immunitet. Medfödd immunitet är evolutionärt mer gammal än adaptiv immunitet. Ryggradslösa djur är för närvarande tros ha endast medfödd immunitet, medan ryggradsdjur besitter både det medfödda och adaptiva grenar. Även adaptiv immunitet ger specifik och långvarig immunitet mot vissa patogener, är medfödd immunitet ett omedelbart svar på invaderande bakterier, virus och svampar. En viktig aspekt av det medfödda immunsvar involverar frisättning av cytokiner och kemokiner, som resulterar i inflammation och rekrytering av fagocyter (t ex makrofager, neutrofiler) att uppsluka och förstöra främmande inkräktare. Framgångsrika medfödda immunsvar involverar: (1) erkännande av invaderande mikroorganismer, (2) induktion av lämpliga signaleringskaskader (t.ex. utsläpp av cytokiner och kemokiner), (3) ordentlig utveckling / tillräckligt många fagocytceller, (4) Migrering av fagocyter till webbplatser på infektion, (5) omvälvning av patogener, och (6) förstörelse av uppslukade mikroorganismer. Brist på någon av dessa åtgärder skulle kunna leda till värd bli överväldigade av, och ge efter för, infektionen. En robust medfödda immunsvar är avgörande för hälsan hos organismer eftersom det är den första försvarslinjen mot patogener i alla växter och djur. I ryggradsdjur, potentierar den även det adaptiva immunsvaret ett. Därför är det viktigt att vi har möjlighet att utvärdera alla aspekter av det medfödda immunsvaret för att bättre förstå den och att optimera dess funktion. Många modellorganismer som används för att studera medfödd immunitet, från Arabadopsis till C. elegans till Drosophila till möss till odlade humana celler. En fördel med att använda zebrafisk (Danio rerio) modellsystem för att studera medfödd immunitet är att zebrafisk är ett ryggradsdjur, med både medfödda och adaptiva imskapen, men utvecklingen av medfödd och adaptiv immunitet är tidsmässigt segregerade. Zebrafisk enbart förlita sig på medfödd immunitet för skydd mot infektion tills adaptiv immunitet blir fullt fungerande, vilket sker cirka 4-6 veckor efter befruktning 2. Förutom verktyg för genetisk manipulation, optisk klarhet och snabb, extern utveckling, medfödd immunitet som principen sättet försvar i zebrafisk embryon ger en förenklad modell där för att studera komplexiteten i det medfödda immunsvaret in vivo. Flera protokoll har utvecklats för att utvärdera olika aspekter av det medfödda immunsvaret i zebrafisk embryon. Microarrays och RNAseq har validerat att cytokinprofiler som framkallas av den zebrafisk medfödda immunsvar är liknande till det av människor och har också föreslagit medverkan av oväntade gener i medfödd immunitet 3,4. Insynen i zebrafisk embryot och fluorescerande, transgenic stammar av patogener och zebrafisk möjliggör visualisering av dynamiska värd-patogen interaktioner in vivo i realtid. Transgena zebrafisk embryon som uttrycker GFP under kontroll av neutrofila specifika myeloperoxidas promotor 5,6 eller makrofag-specifika MPEG1 promotorn 7 har gjort det möjligt att visualisera och kvantifiera phagocyte migration till platser av lokala infektioner 8 samt att visualisera fagocytos och förstörelse av märkt med fluorescens patogener 8,9. Zebrafisk embryon är också mottagliga för generering av hög kapacitet för analyser och kemiska skärmar. Följaktligen har hög kapacitet metoder transkriptomanalys vid infektion 10 och phagocyte migration till platser av kemiskt inducerad skada 11 nyligen utvecklats. Av de metoder som anges ovan, inget kvantitativt bedöma den sista etappen av patogen förstörelse av fagocyter. Det sista stegetinnebär en respiratory burst (dvs. produktion av ROS och andra giftiga föreningar), som dödar de uppslukade patogener. Enzymet NADPH-oxidas är en viktig källa för ROS i fagocyterande celler. Montering av subenheterna av NADPH-oxidasenzymresulterar i överföringen av elektroner till syre, generera superoxidanjoner. Genom efterföljande enzymatiska reaktioner, kan superoxid sedan omvandlas till väteperoxid och underklorsyrlighet (Figur 1A). Det är den respiratoriska utbrott av fagocyter som dödar patogener och sålunda är en indikation på total medfödda immun hälsa kvantifieringen av respiratory burst potential zebrafiskembryon. Vi utvecklade en fluorescensbaserad analys för att kvantifiera den respiratoriska utbrott i grupper av enskilda zebrafiskembryon 12. Denna analys utnyttjar den icke-fluorescerande, reducerad form av en kommersiellt tillgänglig, cellgenomsläppliga färgämnet. Detta färgämne, 2 &#39;, 7&#39;-dichlorodihydrofluorescein diacetat (H2DCFDA), omvandlas till de lysrörcent förening, 2 &#39;, 7&#39;-diklorfluorescein (DCF), vid oxidation. De olika ROS genereras av fagocytsystemet respiratory burst kan oxidera H2DCFDA och generera fluorescens 24. Uppträdandet av fluorescens kan användas för att kvantifiera och jämföra respiratory burst svar mellan grupper av zebrafisk. Proteinkinas C-agonist forbolmyristatacetat (PMA) användes för att kemiskt förmå NADPH-oxidas för framställning av ROS och därmed öka fluorescensavläsningar (Figur 1B). Häri ger vi ett detaljerat protokoll av en modifierad och optimerad version av denna zebrafisk embryo respiratory burst-analys. Denna analys kan användas för att jämföra den respiratory burst mellan grupper av enskilda zebrafiskembryon över tid och / eller till följd av experimentella manipulationer (t.ex. morfolino-förmedlad protein knockdown). Användningen av denna metod, tillsammans med andra zebrafisk medfödd immunitet analyser, kommer att ge en mer fullständig bild av den komplexa och kritiskamedfödda immunsvaret.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Instant Ocean Sea Salt</td>
			<td>Instant Ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>H2DCFDA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>35845-1G</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>PMA</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP6851</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2438-5X10ML</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Tricaine S MS222</td>
			<td>Western Chemical</td>
			<td>100 grams</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DMEM/F-12, No Phenol Red </td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Deep Petri Dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89107-632</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Plastic Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-711-7M</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>#5 Dumont Forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72700-D</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>1.7 ml Micro Centrifuge Tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>10011-724</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>15 ml Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-918</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>5 ml Serological Pipettes</td>
			<td>Greiner Bio One</td>
			<td>606180</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Synergy 2 Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Contact BioTek</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Black 96 Well Microplate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82050-728</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>25 ml Sterile Reservoirs</td>
			<td>VistaLab</td>
			<td>3054-2003</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>P200 Pipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Multichannel Pipettor</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89079-948</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pipette Tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89079-478</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

quantification of the respiratory burst response as an indicator of innate immune health in zebrafish

Den fagocyt respiratory burst är en del av det medfödda immunsvaret mot patogeninfektion och innebär produktion av reaktiva syreradikaler (ROS). ROS är giftiga och fungera för att döda fagocytiserade mikroorganismer. In vivo kvantifiering av fagocyt-derived ROS ger information om en organism förmåga att montera ett robust medfödda immunsvaret. Här beskriver vi ett protokoll för att kvantifiera och jämföra ROS i hela zebrafisk embryon vid kemisk induktion av fagocytsystemet respiratory burst. Metoden använder sig av en icke-fluorescerande förening som blir fluorescerande vid oxidation av ROS. Enskilda zebrafiskembryon pipetteras i brunnar i en mikroplatta och inkuberades i detta fluorogent substrat med eller utan en kemisk inducerare av respiratory burst. Fluorescens i varje brunn kvantifieras vid önskade tidpunkter med hjälp av en mikroplattläsare. Fluorescens avläsningar justeras för att eliminera bakgrunds fluorescens och compared hjälp av ett oparat t-test. Denna metod gör det möjligt att jämföra den respiratory burst potential zebrafisk embryon i olika utvecklingsstadier och som svar på experimentella manipulationer såsom protein knockdown, överuttryck eller behandling med farmakologiska medel. Denna metod kan också användas för att övervaka andningsskursvar i hela dissekerades njurarna eller cellpreparat från njurar hos vuxna zebrafisk och några andra fiskarter. Vi tror att den relativa enkelheten och anpassningsförmåga av detta protokoll kommer att komplettera befintliga protokoll och kommer att vara av intresse för forskare som vill bättre förstå det medfödda immunsvaret.

Här ger vi data som jämför den respiratory burst svar i zebrafiskembryon (vildtyp, AB bakgrund) vid 48 och 72 timmar efter befruktning (HPF). De 48 HPF embryon agerade som vår kontrollgrupp och 72 HPF embryon som vår försöksgrupp. Urvalsstorleken som användes var 24 un-inducerade embryon och 24 PMA-inducerade embryon per utvecklingsstadiet. Råa Fluorescensavläsningar (i relativa fluorescensenheter (RFU)) erhölls genom avläsning av mikroplattan 4 timmar efter tillsats av PMA. Råa fluorescensvärden ges i <st...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish at JoVE.com

Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish

Det medfödda immunförsvaret skyddar organismer mot patogen infektion. En kritisk del av det medfödda immunförsvaret, fagocyten respiratory burst genererar reaktiva syreföreningar som dödar invaderande mikroorganismer. Vi beskriver en respiratory burst analys som kvantifierar reaktiva syreradikaler som produceras när det medfödda immunsvaret är kemiskt inducerad.

Kvantifiering av Respirator Burst Response som en indikator för Innate Immune Health i Zebrafish

The phagocyte respiratory burst is part of the innate immune response to  pathogen infection and involves the production of reactive oxygen species (ROS). ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Mänskliga In Vitro Suppression som screeningmetod för erkännande av en tidig staten Immune obalans

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

En introduktion till parasitsteklar av<em&gt; Drosophila</em&gt; Och Antiparasite immunsvar

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

Kvantitativ mätning av immunsvaret och sova i<em&gt; Drosophila</em

A complex interaction between the immune response and  host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in  particular, is known ...

Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production

Dissekera Innate Immun Signalering i Viral Evasion av cytokinproduktion

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Att använda RNA-interferens för att undersöka det medfödda immunsvar i musmakrofager

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In vitro Analys av MyD88-medierad cellulärt immunsvar till West Nile-virus mutant stam Infektion

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Icke-invasiv avbildning av det medfödda immun Response i en Zebrafish Larv Modell av<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infektion

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Icke-invasiv provtagning av slemhinna slemhinnan vätska för kvantifiering av In Vivo övre luftvägarna immun-medlare nivåer

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

Kvantifiering av Efferocytosis av Single-cell fluorescensmikroskopi

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

En musmodell att bedöma medfödda immunsvaret mot Staphylococcus aureus -infektion

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...