Name: quantification of the respiratory burst response as an indicator of innate immune health in zebrafish
Uploaded: 2013-09-12T16:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish at JoVE.com

Yazarlar Kim laboratuvar, yararlı tartışmalar ve veri paylaşımı için Zebrafish bakım ve onarım, Dr Robert Wheeler Mark Nilan geçmiş ve şimdiki üyelerine de teşekkür ve NIH hibe 3RO1GM087308-02S1 ve 1P20RR024475-01A2 ve Maine Tarım ve Orman olur finansman için Station (Yayın Numarası 3303) Deney.

1.. Zebra balığı Bakım ve Onarım <ol><li> Hayvancılık: Kitle yumurtlamaya yetişkin zebrabalıkları olarak önce 13 tarif. 14, daha önce tarif edildiği gibi kökenli embriyolar toplayın. </li><li> Mikroenjeksiyon (istenirse) gibi gen ürünlerini aşırı ifade edilmesi için gen ürünleri ya da mRNA demonte morfolino oligonükleotitler ile Microinject 1-4 hücre aşamasında embriyoların zebra balığı, daha önce tarif edilen 15. <ol><li> Mock yeterli bir havuz korumak ...

<ol>
	<li>Medzhitov, R., Janeway, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Immunity:+Impact+on+the+Adaptive+Immune+Response.">Innate Immunity: Impact on the Adaptive Immune Response.</a> Current Opinion in Immunology. 9, 4-9 (1997).</li><li>Lam, S. H., Chua, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+Maturation+of+the+Immune+System+in+Zebrafish,+Danio+rerio:+A+Gene+expression+Profiling.">Development and Maturation of the Immune System in Zebrafish, Danio rerio: A Gene expression Profiling.</a> In Situ Hybridization and Immunological. 28, 9-28 (2004).</li><li>Stockhammer, O. W., Zakrzewska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+Profiling+and+Functional+Analyses+of+the+Zebrafish+Embryonic+Innate+Immune+Response+to+Salmonella+Infection.">Transcriptome Profiling and Functional Analyses of the Zebrafish Embryonic Innate Immune Response to Salmonella Infection.</a> J Immunol. 9. 9, 5641-5653 (2009).</li><li>Ordas, A., Hegedus, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+Sequencing+of+the+Innate+Immune+Transcriptomic+Response+of+Zebrafish+Embryos+to+Salmonella+Infection.">Deep Sequencing of the Innate Immune Transcriptomic Response of Zebrafish Embryos to Salmonella Infection.</a> Fish &amp; Shellfish Immunology. 31, 716-724 (2011).</li><li>Renshaw, S. A., Loynes, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Transgenic+Zebrafish+Model+of+Neutrophilic+Inflammation.">A Transgenic Zebrafish Model of Neutrophilic Inflammation.</a> Blood. 13, 3976-3978 (2006).</li><li>Mathias, J. R., Perrin, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+of+Inflammation+by+Retrograde+Chemotaxis+of+Neutrophils+in+Transgenic+Zebrafish.">Resolution of Inflammation by Retrograde Chemotaxis of Neutrophils in Transgenic Zebrafish.</a> J. Leukoc. Biol. 6, 1281-1288 (2006).</li><li>Ellett, F., Pase, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mpeg1+Promoter+Transgenes+Direct+Macrophage-Lineage+Expression+in+Zebrafish.">mpeg1 Promoter Transgenes Direct Macrophage-Lineage Expression in Zebrafish.</a> Blood. 4, 56-56 (2011).</li><li>Phennicie, R. T., Sullivan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+Resistance+to+Pseudomonas+aeruginosa+Infection+in+Zebrafish+is+Mediated+by+the+Cystic+Fibrosis+Transmembrane+Conductance+Regulator.">Specific Resistance to Pseudomonas aeruginosa Infection in Zebrafish is Mediated by the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator.</a> Infect. Immun. 11, 4542 (2010).</li><li>Brothers, K. M., Newman, Z. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Disseminated+Candidiasis+in+Zebrafish+Reveals+Role+of+Phagocyte+Oxidase+in+Limiting+Filamentous+Growth.">Live Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Reveals Role of Phagocyte Oxidase in Limiting Filamentous Growth.</a> Eukaryotic Cell. 7, 932-944 (2011).</li><li>Rotman, J., van Gils, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Screening+of+Innate+Immune+Gene+Expression+in+Zebrafish+using+Reverse+Transcription+-+Multiplex+Ligation-Dependent+Probe+Amplification.">Rapid Screening of Innate Immune Gene Expression in Zebrafish using Reverse Transcription - Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification.</a> BMC Research Notes. 4, (2011).</li><li>d'Alencon, C. A., Pena, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+High-Throughput+Chemically+Induced+Inflammation+Assay+in+Zebrafish.">A High-Throughput Chemically Induced Inflammation Assay in Zebrafish.</a> BMC Biology. 8, 151 (2010).</li><li>Hermann, A. C., Millard, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+Respiratory+Burst+Assay+using+Zebrafish+Kidneys+and+Embryos.">Development of a Respiratory Burst Assay using Zebrafish Kidneys and Embryos.</a> Journal of Immunological Methods. 292, 119-129 (2004).</li><li>Avdesh, A., Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+Care+and+Maintenance+of+a+Zebrafish+(Danio+rerio)+Laboratory:+An+Introduction.">Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction.</a> J. Vis. Exp. (69), e4196 (2012).</li><li>Brothers, K. M., Wheeler, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+Imaging+of+Disseminated+Candidiasis+in+Zebrafish+Larvae.">Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae.</a> J. Vis. Exp. (65), e4051 (2012).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+Morpholino+Antisense+Oligonucleotides+in+Zebrafish+Embryos.">Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.</a> J. Vis. Exp. (27), e1113 (2009).</li><li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+the+Adult+Zebrafish+Kidney.">Dissection of the Adult Zebrafish Kidney.</a> J. Vis. Exp. (54), e2839 (2011).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Organs+from+the+Adult+Zebrafish.">Dissection of Organs from the Adult Zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (37), e1717 (2010).</li><li>Le Guyader, D., Redd, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+Unconventional+Behavior+of+Neutrophils+in+Developing+Zebrafish.">Origins and Unconventional Behavior of Neutrophils in Developing Zebrafish.</a> Blood. 111, 132-141 (2008).</li><li>Davidson, A. J., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'Definitive'+(and+'Primitive')+Guide+to+Zebrafish+Hematopoiesis.">The 'Definitive' (and 'Primitive') Guide to Zebrafish Hematopoiesis.</a> Oncogene. 23, 7233-7246 (2004).</li><li>Jovanovic, B., Goetz, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+Stimuli+Change+Expression+of+Genes+and+Neutrophil+Function+in+Fathead+Minnow+Pimephales+promelas+Rafinesque.">Immunological Stimuli Change Expression of Genes and Neutrophil Function in Fathead Minnow Pimephales promelas Rafinesque.</a> Journal of Fish Biology. 78, 1054-1072 (2011).</li><li>Niethammer, P., Grabher, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Tissue-Scale+Gradient+of+Hydrogen+Peroxide+Mediates+Rapid+Wound+Detection+in+Zebrafish.">A Tissue-Scale Gradient of Hydrogen Peroxide Mediates Rapid Wound Detection in Zebrafish.</a> Nature. 459, 996-1000 (2009).</li><li>Thisse, B., Pflumio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+zebrafish+genome+during+embryogenesis.+(NIH+R01+RR15402).">Expression of the zebrafish genome during embryogenesis. (NIH R01 RR15402).</a> ZFIN Direct Data Submission. , (2001).</li><li>Thisse, B., Thisse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+Release+Clones:+A+High+Throughput+Expression+Analysis.">Fast Release Clones: A High Throughput Expression Analysis.</a> ZFIN Direct Data Submission. , (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Table+18.4.">Table 18.4.</a> The Molecular Probes Handbook. , .</li></ol>

Fagositlerin birincil işlevi patojenleri tespit yutmak ve yok etmektir. Uygun bir solunum patlamaları üretmek için fagositoz yeteneği bu işlev için kritik öneme sahiptir. Böylece, solunum patlaması tepkisinin ölçümü kişi ve / veya deneysel manipülasyonlar tepki olarak grupları arasında genel olarak doğuştan gelen bağışıklık sağlık ve fonksiyon karşılaştırma yapmak için bir yöntemdir. Burada biz neden ölçmek ve tek tek zebra balığı embriyoların gruplar arasındaki solunum patlaması...

Doğal ve adaptif bağışıklık: Bağışıklık sistemi iki koldan oluşur. Doğuştan bağışıklık evrimsel adaptif bağışıklık daha eskidir. Omurgalılar hem doğal ve adaptif şubeleri sahip iken Omurgasız anda, sadece doğuştan bağışıklığı olması düşünülmektedir. Adaptif bağışıklık belirli patojenlere karşı özel ve uzun süreli bağışıklık sağlamasına rağmen, doğuştan gelen bağışıklık istilacı bakteri, virüs ve mantarlar için hemen bir yanıttır. Doğuştan gelen bağışıklık yanıtının bir önemli yönü yabancı istilacıları yutmak ve yok etmek fagositlerce (örneğin makrofajlar, nötrofiller) iltihabı ve işe sonuçlanan sitokin ve kemokin salınımını içerir. Başarılı doğuştan gelen bağışıklık tepkileri içerir: mikroorganizmalara (1) tanıma, uygun sinyalizasyon kaskadlar (sitokinler ve kemokinlerin örn. ayırıcı) (2) indüksiyon; fagositik hücrelerin (3) düzgün gelişimi yeterli / numaraları; (4) Enfeksiyon bölgelerinde fagositlerin göç; patojenlerin (5) yutulma ve sardı mikroorganizmaların (6) imha. Bu adımlardan herhangi birinde bir eksiklik bunalan ana yol ve enfeksiyona yenik olabilir. Tüm bitki ve hayvanlarda patojenlere karşı ilk savunma hattı olduğu için sağlam bir doğal immün yanıt organizmaların sağlığı için çok önemlidir. Omurgalılarda, aynı zamanda adaptif bağışıklık tepkisini 1 güçlendirir. Bu nedenle, biz daha iyi anlamak ve onun işlevini optimize etmek için doğal immün yanıtın tüm yönleriyle değerlendirmek mümkün olduğu önemlidir. Çoğu model organizma Arabadopsis dan C arasında değişen, doğuştan gelen bağışıklık incelemek için kullanılır kültürlenmiş insan hücrelerine farelerine Drosophila için elegans. Doğuştan gelen bağışıklık çalışma zebrafish (Br.rerio) model sistemi kullanmanın bir avantajı, zebra balığı, doğal ve adaptif hem im ile, bir omurgalı olmasıdırimzalamıstır, henüz doğal ve adaptif bağışıklığın gelişmesi geçici ayrılmış edilir. Adaptif bağışıklık tamamen işlevsel hale gelene kadar Zebra balığı yaklaşık 4-6 hafta sonrası döllenme 2 oluştuğu, sadece enfeksiyona karşı koruma için doğuştan bağışıklık güveniyor. Genetik manipülasyon, optik berraklık ve hızlı, dış gelişimi için araçlara ek olarak, zebra balığı embriyoların savunma prensibi modu olarak doğuştan gelen bağışıklık in vivo olarak doğuştan gelen bağışıklık tepkisinin karmaşıklıklarını çalışma için hangi basitleştirilmiş bir model sağlar. Çoklu protokolleri zebrafish embriyolarda doğuştan gelen bağışıklık tepkisinin farklı yönleriyle değerlendirmek için geliştirilmiştir. Mikrodiziler ve RNAseq zebra balığı doğuştan gelen bağışıklık tepkisi ile ortaya sitokin profilleri insanlarınkine benzeyen ve aynı zamanda doğal bağışıklık 3,4 beklenmedik genleri olduğunu ileri sürmüşlerdir onaylamıştır. Zebra balığı embriyo ve floresan, Transgen ve şeffaflıkpatojen ve zebrabalıkları ic suşları gerçek zamanlı in vivo dinamik konak-patojen etkileşimleri görselleştirme için izin verir. Nötrofil spesifik miyoloperoksidaz promoter 5,6 veya makrofaj özgü MPEG1 promoter 7 kontrolü altında GFP sentezleyen transgenik zebra balığı embriyolarının görselleştirmek ve ölçmek phagocyte göç lokalize enfeksiyonlar 8 siteleri yanı sıra fagositoz ve yıkımı ve görselleştirmek için mümkün kılmıştır floresan 8,9 patojenler etiketli. Zebrafish embriyoları, aynı zamanda, yüksek verimli deneyler ve kimyasal ekranlarının üretimi için uygundurlar. Bu duruma göre, enfeksiyon 10 ve kimyasal olarak neden olduğu hasarı 11 bölgelerine göç fagosit üzerine transcriptome analizi, yüksek verimli yöntemleri yakın zamanlarda geliştirilmiştir. Yukarıda listelenen tekniklerin hiçbiri nicel fagositlerce patojen imha son aşamasını değerlendirmek. Bu son aşamayuttu patojenleri öldürmek bir solunum patlaması (yani ROS üretimi ve diğer toksik bileşikler) içerir. Enzimi NADPH oksidaz fagositik hücrelerde ROS önemli bir kaynağıdır. Oksijene elektron transferi NADPH oksidaz enzimi sonuç alt birimlerin montajı, süperoksit anyonlar üreten. Daha sonra enzimatik reaksiyon yoluyla, süperoksit sonra hidrojen peroksit ve hidroklorik asitten (Şekil 1A) dönüştürülebilir. Bu patojenler öldürür ve bu nedenle, zebra balığı embriyoların solunum patlaması potansiyelinin ölçümü genel olarak doğuştan gelen bağışıklık sağlık göstergesidir fagositlerin solunum patlaması olduğunu. Bireysel embriyolar zebrafish 12 gruplar halinde solunum patlamaları ve ölçmek için bir floresan bazlı bir deney geliştirilmiştir. Bu deney, bir ticari olarak temin edilebilir, hücre-geçirgen boyanın floresan olmayan, indirgenmiş formu kullanır. Bu boya, 2 &#39;, 7&#39;-dichlorodihydrofluorescein diasetat (H2DCFDA), floresan dönüştürülüroksidasyon üzerine cent bileşik, 2 &#39;, 7&#39;-diklorofloresandiasetat (DCF),. Fagosit solunum patlaması tarafından üretilen çeşitli ROS H2DCFDA okside ve floresan 24 üretebilirsiniz. Floresans görünümü zebrabalıkları grupları arasında solunum patlaması yanıtı ölçmek ve karşılaştırmak için kullanılabilir. Protein kinaz C agonist forbol miristat asetat (PMA) kimyasal olarak ROS üretimi için NADPH oksidaz uyarılması ve bu nedenle floresan okumaları (Şekil 1 B) arttırmak için kullanılır. Burada, bu zebra balığı embriyo solunum patlaması deneyinin değiştirilmiş ve optimize edilmiş bir versiyonu ayrıntılı bir protokol sağlar. Bu deney, zaman ve / veya deneysel manipülasyonlar (örneğin, morfolino aracılığında protein yok etme) tepki olarak tek zebrafish embriyoların gruplar arasındaki solunum patlamaları ve karşılaştırmak için kullanılabilir. Bu yöntemin kullanılması, diğer zebra balığı doğuştan gelen bağışıklık deneyleri ile bağlantılı olarak, karmaşık ve kritik ilişkin daha eksiksiz bir görüntü sağlayacakDoğuştan gelen bağışıklık tepkisi.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Instant Ocean Sea Salt</td>
			<td>Instant Ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>H2DCFDA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>35845-1G</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>PMA</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP6851</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2438-5X10ML</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Tricaine S MS222</td>
			<td>Western Chemical</td>
			<td>100 grams</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DMEM/F-12, No Phenol Red </td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Deep Petri Dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89107-632</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Plastic Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-711-7M</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>#5 Dumont Forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72700-D</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>1.7 ml Micro Centrifuge Tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>10011-724</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>15 ml Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-918</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>5 ml Serological Pipettes</td>
			<td>Greiner Bio One</td>
			<td>606180</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Synergy 2 Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Contact BioTek</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Black 96 Well Microplate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82050-728</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>25 ml Sterile Reservoirs</td>
			<td>VistaLab</td>
			<td>3054-2003</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>P200 Pipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Multichannel Pipettor</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89079-948</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pipette Tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89079-478</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

quantification of the respiratory burst response as an indicator of innate immune health in zebrafish

Fagosit solunum patlaması patojen enfeksiyonuna karşı doğuştan gelen bağışıklık tepkisinin bir parçası olan ve reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimini içerir. ROS zehirlidir ve fagosite mikroorganizmaları öldürmek için işlev görürler. Fagosit türevi ROS in vivo miktar güçlü bir doğuştan gelen bağışıklık tepkisi için bir organizmanın yeteneği ile ilgili bilgi sağlar. Burada fagosit solunum patlaması kimyasal indüksiyon üzerine tüm Zebra balığı embriyolarının ROS ölçmek ve karşılaştırmak için bir protokol açıklar. Bu yöntem, ROS tarafından oksidasyonu ve onu takiben floresan haline olmayan bir floresan bileşik kullanır. Bireysel embriyolar, zebra balığı, bir mikroplaka oyuklarına pipetle ve solunum patlaması bir kimyasal uyarıcı ile ya da olmadan, bu flüorojenik alt-tabaka içinde inkübe edilir. Her çukurdaki floresans bir mikro levha okuyucusu kullanarak arzu edilen zaman noktalarında ölçülür. Floresans okumaları floresan arka plan ortadan kaldırmak için ayarlandı ve daha sonra işbirliği vardıreşleştirilmemiş t-testi kullanılarak mpared. Bu yöntem, farklı gelişim aşamalarında ve bu protein demonte, aşırı ekspresyonuna veya farmakolojik maddeler ile tedavi olarak deneysel manipülasyonlar tepki olarak zebrafish embriyoların solunum patlama potansiyelinin karşılaştırma sağlar. Bu yöntem aynı zamanda yetişkin zebrafish böbrekler ve diğer bazı balık türleri ikinci bütün Dissected böbrek veya hücre preparasyonlarda solunum patlaması yanıtını izlemek için kullanılabilir. Biz bu protokolün göreceli basitlik ve uyum mevcut protokolleri tamamlayacak ve daha doğuştan gelen bağışıklık tepkisini anlamaya çalışırlar araştırmacıların ilgi olacağına inanıyoruz.

Burada, biz 48 de Zebra balığı embriyolarının solunum patlaması yanıtı (yabani tip, AB arka) karşılaştıran veri ve 72 saat sonrası fertilizasyon (hpf) sağlar. Bizim kontrol grubu ve deney grubu olarak 72 hpf embriyolar gibi davranıyordu 48 hpf embriyolar. Kullanılan örneklem büyüklüğü 24 un kaynaklı embriyolar ve gelişim aşamasında başına 24 PMA-kaynaklı embriyolar oldu. (Bağıl Floresan Birimleri (RFU) in) Ham floresan okumaları 4 saat PMA eklenmesinden sonra mikroplak okunmasıyla elde e...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish at JoVE.com

Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish

Zebra balığı Doğuştan Bağışıklık Sağlık Bir Göstergesi Olarak Solunum Burst Tepki Kantitasyonu

Doğuştan gelen bağışıklık tepkisi patojen enfeksiyonuna karşı koruma sağlar organizmalar. Doğuştan gelen bağışıklık tepkisinin önemli bir bileşeni, fagosit solunum patlaması, istila eden mikroorganizmaları öldürmek reaktif oksijen türleri oluşturur. Biz, doğuştan gelen bağışıklık tepkisi kimyasal uyarılmaktadır zaman üretilen reaktif oksijen türleri rakamlarla bir solunum patlaması tahlili tarif eder.

The phagocyte respiratory burst is part of the innate immune response to  pathogen infection and involves the production of reactive oxygen species (ROS). ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Insan In Vitro Bağışıklık Dengesizlik Erken Devlet Tanıma Tarama Aracı Olarak Bastırılması

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

Paraziter Eşek Arıları Bir Giriş<em&gt; Drosophila</em&gt; Ve antiparaziter İmmün Yanıt

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

İmmün Yanıt ve Uyku içinde kantitatif ölçümü<em&gt; Drosophila</em

A complex interaction between the immune response and  host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in  particular, is known ...

Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production

Sitokin Üretimi Viral Evasion Doğuştan Bağışıklık Sinyalizasyonu Diseksiyon

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Fare Makrofagların yılında Doğuştan Bağışıklık Tepkisi Soruşturma RNA girişimi kullanma

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

Batı Nil Virüsü Mutant Soy Enfeksiyon MyD88-aracılı Hücresel Bağışıklık Tepki Vitro Analizi

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Bir Zebra balığı Larva Modeli Doğuştan Bağışıklık Tepki Non-invaziv Görüntüleme<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Enfeksiyon

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Mukozal astar sıvı noninvaziv örnekleme için In Vivo üst solunum yolu bağışıklık arabulucu düzeyleri miktar

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

Efferocytosis tek hücreli floresans mikroskobu tarafından miktar

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Bir fare modeli için değerlendirmek doğuştan gelen bağışıklık yanıtı Staphylococcus aureus enfeksiyon

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...