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Réactions de ligation de l'ADN

Overview

En biologie moléculaire, la ligature fait référence au raccrochement de deux fragments d'ADN à travers la formation d'une liaison phosphodiester. Un enzyme connu sous le nom de ligase catalyse la réaction de ligature. Dans la cellule, les ligases réparent les simples ou doubles brins cassés, ceci a lieu lors de la réplication de l'ADN. Au laboratoire, l'ADN ligase est utilisé pendant le clonage moléculaire pour relier les fragments d'ADN d'inserts avec les vecteurs – porteurs de molécules d'ADN qui vont répliquer les fragments cibles dans les organismes hôtes.

Cette vidéo fournit une introduction à la ligature d'ADN. Le principe de base de ligature est décrit ainsi que la procédure étape par étape de mise en place d'une réaction de ligature généralisée. Les aspects critiques des réactions de ligature sont discutés, tels que comment la longueur d'un surplomb à extrémité cohésive affecte la température de réaction et comment le rapport d'insert et de vecteur d'ADN doit être ajusté pour éviter l'auto-ligature. Les outils moléculaires qui aident les ligatures tels que le fragment de Klenow et la phosphatase alcaline de crevette (SAP) sont mentionnés. Les utilisations tels que les ligatures de proximité et l'ajout de lieurs aux fragments pour le séquençage sont aussi présentés.

Procedure

La ligature peut être définie comme l'acte du raccordement. En biologie, le terme fait référence à une réaction enzymatique qui lie deux biomolécules via une liaison covalente. Cette vidéo décrit l'application de la ligature d'ADN dans le domaine de la recherche en biologie moléculaire.

Dans la cellule, l'ADN ligase est une enzyme qui identifie et casse les joints dans l'ADN en catalysant la formation des liaisons phosphodiester entre les groupes 3'-hydroxyle et 5'-phosphate de...

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Tags
DNA LigationEnzymatic ReactionCovalent BondBiomoleculesDNA LigasesPhosphodiester BondsDNA ReplicationMolecular CloningEndonuclease digested DNA FragmentsVectorPlasmidHost CellsRestriction EndonucleasesSticky EndsBlunt ends

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Overview

0:28

DNA Ligation: Basic Principles

3:04

Setting up a Ligation

5:40

Applications

7:08

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