Reazioni di legatura del DNA

In biologia molecolare, la legatura si riferisce all'unione di due frammenti di DNA attraverso la formazione di un legame fosfodiestere. Un enzima noto come ligasi catalizza la reazione di legatura. Nella cellula, le ligases riparano le rotture a singolo e doppio filamento che si verificano durante la replicazione del DNA. In laboratorio, la DNA ligasi viene utilizzata durante la clonazione molecolare per unire frammenti di DNA di inserti con vettori - molecole di DNA portatrici che replicheranno frammenti bersaglio negli organismi ospiti.

Questo video fornisce un'introduzione alla legatura del DNA. Viene descritto il principio di base della legatura e una procedura passo-passo per impostare una reazione di legatura generalizzata. Vengono discussi gli aspetti critici delle reazioni di legatura, come il modo in cui la lunghezza di una sporgenza appiccicosa dell'estremità influisce sulla temperatura di reazione e come il rapporto tra l'inserto del DNA e il vettore dovrebbe essere adattato per prevenire l'auto-legatura. Vengono menzionati strumenti molecolari che aiutano con legazioni come il frammento di Klenow e la fosfatasi alcalina di gamberetti (SAP) e vengono presentate anche applicazioni , come legature di prossimità e l'aggiunta di linker ai frammenti per il sequenziamento.